生藥的顯微鑒定技術(shù)

生藥的顯微鑒定技術(shù)第一頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日目的要求：1、掌握生藥鑒定的目的，鑒定的標(biāo)準(zhǔn)，鑒定的一般程序，基原鑒定和性狀鑒定的概念和一般步驟。2、熟悉性狀和基原鑒定的主要特點(diǎn)。教學(xué)時(shí)數(shù)：2學(xué)時(shí)。教學(xué)難點(diǎn)：生藥鑒定的標(biāo)準(zhǔn)和一般程序。教具：《藥用植物學(xué)和生藥學(xué)教學(xué)課件》第二頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日復(fù)習(xí)題：1、掌握生藥鑒定的目的意義、標(biāo)準(zhǔn)和一般程序是什么？2、基原鑒定和性狀鑒定的概念、一般步驟是什么？3、基原鑒定及性狀鑒定的特點(diǎn)是什么？第三頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日生藥鑒定（一）簡(jiǎn)介主講李建銀第四頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日生藥鑒定的概念：就是依據(jù)國(guó)家藥典、有關(guān)資料規(guī)定或有關(guān)專(zhuān)著對(duì)生藥作真實(shí)性、純度及品質(zhì)優(yōu)良度的鑒定。第五頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日生藥鑒定的意義：發(fā)掘中醫(yī)藥學(xué)遺產(chǎn)，整理中藥品種。盡量做到一藥一名，互不混淆，保證生藥品種的真實(shí)性、療效和用藥安全。

制訂生藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，促進(jìn)生藥標(biāo)準(zhǔn)化。尋找和利用新藥資源，發(fā)展中藥事業(yè)。第六頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日生藥鑒定的一般程序：

１檢品登記：

２按規(guī)定取樣：

３雜質(zhì)檢查：

４品種鑒定：

５品質(zhì)鑒定：

６寫(xiě)出鑒定報(bào)告：

第七頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日生藥鑒定常用方法：１基原鑒定（分類(lèi)學(xué)鑒定）：

概念：利用分類(lèi)學(xué)的知識(shí)，對(duì)生藥的來(lái)源進(jìn)行鑒定，確定學(xué)名和藥用部分

步驟：⑴實(shí)地調(diào)查和采集標(biāo)本⑵觀察、記錄植物形態(tài)⑶核對(duì)文獻(xiàn)進(jìn)行鑒定：中國(guó)植物志、中國(guó)高等植物科屬檢索表、中國(guó)經(jīng)濟(jì)植物志、中國(guó)藥用植物圖鑒、中國(guó)高等植物圖鑒、中藥志、中藥大辭典、新華本草、植物分類(lèi)學(xué)報(bào)等。原始文獻(xiàn)⑷核對(duì)標(biāo)本：對(duì)有疑問(wèn)的生藥進(jìn)行最后鑒定

特點(diǎn)：是生藥鑒定和一切研究工作（生藥生產(chǎn)、資源開(kāi)發(fā)、新藥研制）的基礎(chǔ)，鑒定比較準(zhǔn)確，但采集標(biāo)本較難。第八頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日生藥鑒定常用方法：２性狀鑒定：

概念：利用眼看、手摸、鼻聞、口嘗、水試、火試等十分簡(jiǎn)便的方法對(duì)生藥的外觀性狀進(jìn)行鑒定，確定生藥真?zhèn)蝺?yōu)劣的方法。

內(nèi)容包括：形狀、大小、顏色、表面特征、質(zhì)地、斷面特征、氣、味，水試、火試。黨參的“獅子盤(pán)頭”，松貝的“懷中抱月”，海馬的“馬頭蛇尾瓦愣身”，野山參的“雁脖蘆，圓肩膀,棗核丁，鐵線紋，珍珠須”，何首烏的“云錦紋”，黃芪斷面的“菊花心”，蒼術(shù)斷面的“朱砂點(diǎn)”。

特點(diǎn)：簡(jiǎn)便易行，不需要特殊的儀器設(shè)備，但需要有一定的工作經(jīng)驗(yàn),同時(shí)難以對(duì)粉末類(lèi)生藥及中成藥進(jìn)行鑒定。第九頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日來(lái)源鑒定性狀鑒定顯微鑒定理化鑒定四大鑒定生藥鑒定第十頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日一、來(lái)源鑒定

（originidentification)

概念

應(yīng)用植物、動(dòng)物、礦物的分類(lèi)學(xué)知識(shí)，對(duì)中藥的來(lái)源進(jìn)行鑒定研究，確定其正確的學(xué)名，以保證在應(yīng)用中品種準(zhǔn)確無(wú)誤。植物鑒定的步驟

1．觀察植物形態(tài)

2．核對(duì)文獻(xiàn)

3．核對(duì)標(biāo)本第十一頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日二、性狀鑒定

(macroscopicidentification)性狀鑒定：是指用眼看、手摸、鼻嗅、口嘗等方式了解藥材性狀，判斷藥材品種和質(zhì)量的鑒定方法。性狀：指藥材的形狀、大小、色澤、表面特征、質(zhì)地、斷面特征和氣味等屬性。第十二頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日性狀鑒定的內(nèi)容1.看形狀

3.看表面4.驗(yàn)質(zhì)地5.看斷面6.嗅氣嘗味2.

量大小第十三頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日黃芪

黃芩三棱(圓柱形)(圓錐形)

(扁卵狀圓錐形)第十四頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日半夏類(lèi)球形麥冬紡錘形桃仁扁長(zhǎng)卵形第十五頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日不規(guī)則塊狀熟地厚樸卷筒狀黃柏板片狀第十六頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日蘆長(zhǎng)碗密棗核艼，緊皮細(xì)紋珍珠須防風(fēng)根莖“蚯蚓頭”第十七頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日海馬石決明夏枯草第十八頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日藍(lán)（膽礬）黃（蒲黃）紅（西紅花）白（僵蠶）黑（熟地）第十九頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日在描述復(fù)合色的藥材時(shí)，應(yīng)以后一種為主黃綠色（荊芥穗）紅棕色（何首烏）黃白色（川貝母）第二十頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日毛茸（辛夷）鉤刺（蒼耳子）縱皺紋（桔梗）環(huán)紋（防風(fēng)）光滑（相思子）第二十一頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日羌活白芷防己莪術(shù)第二十二頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日大血藤檳榔雞血藤何首烏大黃第二十三頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日嗅氣嘗味＊取樣要有代表性＊口嘗時(shí)咀嚼1分鐘＊有刺激性和劇毒的藥材，口嘗小心，以免中毒第二十四頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日一般術(shù)語(yǔ)角質(zhì)：泛指含大量淀粉的藥材蒸、煮加工后糊化呈半透明狀，且質(zhì)地堅(jiān)硬。如郁金、天麻。也指葉片或其他器官表面被有的一層蠟質(zhì)物質(zhì)。松泡：指藥材質(zhì)地疏松且有空洞，捏之下陷，稱(chēng)松泡，如南沙參。菊花心：指藥材橫切面上維管束與較窄的射線排列形成的細(xì)密放射狀紋理，狀似開(kāi)放的菊花，如甘草，黃芪等。金錢(qián)環(huán)：指果實(shí)藥材頂端花柱基痕周?chē)囊蝗Νh(huán)紋，如作枳實(shí)藥用的香圓的果實(shí)。吐脂：又稱(chēng)起霜。指蒼術(shù)飲片暴露稍久后，所含f3－按油醇成分析出的結(jié)晶，因呈毛狀，色白如脂霜，而稱(chēng)吐脂或起霜。第二十五頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日一般術(shù)語(yǔ)油潤(rùn)：藥材質(zhì)地柔軟，含油而潤(rùn)澤，謂之油潤(rùn)。車(chē)輪紋：指根或莖類(lèi)藥材橫切面上維管束與較寬的射線相間排列成稀疏整齊的放射狀紋理，狀如木制車(chē)輪，如廣防己、關(guān)木通等。朱砂點(diǎn)：藥材斷面上棕紅色麻點(diǎn)，，色如朱砂，如蒼術(shù)、白芷、木香等。

云錦花紋又稱(chēng)云紋。指何首烏的塊根橫切面皮層中出多個(gè)異型維管束組成的云朵狀花紋。粉性：藥材富含淀粉粒，折斷時(shí)有粉塵飛出。如天花粉、山藥、貝母等。

第二十六頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日性狀鑒定小結(jié)1.性狀鑒定的內(nèi)容：

看形狀：形狀是指干燥藥材形態(tài)

量大?。捍笮∈撬幉牡拈L(zhǎng)短、粗細(xì)和厚薄

看表面：表面是指藥材個(gè)子貨的最外層或飲片未經(jīng)刀切的部分

驗(yàn)質(zhì)地：質(zhì)地是指藥材的軟硬、疏松、致密、粘性或粉性等特征

看斷面：斷面是指藥材的折斷面、切斷面和碎斷面

嗅氣嘗味：注意有強(qiáng)烈刺激性和劇毒的藥材，口嘗時(shí)要特別小

心，以免中毒

2.觀察性狀的原則是：先整體后局部。局部則先上后下，先外后內(nèi)。

3.性狀鑒定的優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單、易行、迅速第二十七頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日三顯微鑒定

(microscopicidentification)

利用顯微技術(shù)對(duì)藥材進(jìn)行顯微分析，以確定其品種和質(zhì)量的一種鑒定方法。包括：組織鑒定—用于完整藥材或粉末特征相似的同屬藥材鑒定；粉末鑒定—用于破碎、粉末狀藥材和中成藥鑒定。

第二十八頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日制片方法：首先要根據(jù)顯微觀察的不同目的制作不同的制片，例如要：

①觀察組織構(gòu)造：通常使用的切片方法有：徒手切片法：通常將選擇好的材料兩端切齊，以左手持材料，右手持刀片，從左前向右后水平切割材料（切片時(shí)隨時(shí)以水濕潤(rùn)刀口），將切片以毛筆掃入盛水的平皿中，然后從切片中挑選較好者制片，以備顯微觀察。顯微鑒定的常用方法第二十九頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日此法適合較幼嫩的地下器官、嫩莖、較粗的葉柄、較幼嫩的果實(shí)、種子等器官。也可用兩片雙面刀片并齊，在桌面上或硬的支撐物上下切，可獲得薄厚理想的切片（適合薄的材料，如葉片、花的各部等）。第三十頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日滑走切片法:利用滑走切片機(jī)代替徒手切片的一種方法。適合較堅(jiān)硬、較粗大的材料。通常將選擇好的材料固定于切片機(jī)上，調(diào)整好厚?。?－50微米）就可以切片。同樣將切片置于水中，挑選較薄的進(jìn)行制片觀察。石蠟制片法；

第三十一頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日附頁(yè)：⒈石蠟制片技術(shù)：

石蠟制片又叫永久制片，是觀察植物組織構(gòu)造常用的制片方法之一。其優(yōu)點(diǎn)主要是適合各種植物組織的制片，切片的厚薄易于控制（最薄可達(dá)0.5微米），清晰度很好，亦適合作細(xì)胞學(xué)研究，并能夠制成連續(xù)切片，制片易于長(zhǎng)久保存，易于交流等。但制片周期較長(zhǎng)，易受條件限制，制片中使用化學(xué)試劑較多，對(duì)人有一定毒害，易使材料變脆、變硬或變形，某些內(nèi)含物易于消失，常使組織變小，甚至使組織扭轉(zhuǎn)變形，細(xì)胞所含物質(zhì)縮小而折光性增強(qiáng)，影響觀察正確性，且制片成本較高等。雖然這樣，但是石蠟制片仍不失為一種很好的制片方法，被人們常采用。第三十二頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日主要的基礎(chǔ)理論和技術(shù)方法：首先要明確,在這種條件下,植物的組織或部位不能直接用來(lái)切片,首先要按照該方法的要求,將材料進(jìn)行程序化處理,終究要讓所起填充作用的石蠟進(jìn)入到材料的細(xì)胞中,然后帶石蠟在切片機(jī)上進(jìn)行切片,再染色、封藏。這樣的程序中，中間過(guò)程是十分復(fù)雜的，往往隨材料的不同，而方法有所不同，在實(shí)際工作中要不斷地摸索,不斷地總結(jié),只有這樣,才有可能做出好的片子。第三十三頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日選擇切片材料是全部切片工作的第一步，如果選擇的材料不適當(dāng)或有錯(cuò)誤，以后的工作將是沒(méi)有意義的。選擇材料時(shí)要注意具有代表性,植物的器官或器官的某一部位,其組織構(gòu)造往往能夠代表整個(gè)器官的基本情況,但不同部位,即便是同一器官,其組織構(gòu)造,亦有一定的過(guò)渡差異,通常在選擇材料時(shí),要注意選擇器官靠中間的部位作為試驗(yàn)材料,當(dāng)然如果是作生長(zhǎng)發(fā)育觀察,則另當(dāng)別論。因此選好試驗(yàn)材料，對(duì)于整個(gè)實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要。第三十四頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日當(dāng)選擇好材料后，實(shí)驗(yàn)的主要過(guò)程有以下步驟：材料的固定或軟化——沖洗——脫水——透明——浸蠟——包埋——切片——貼片——烘片——脫蠟——二重染色——封片。第三十五頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日⒉制片程序簡(jiǎn)介：

a.材料的固定或軟化：

最好用新鮮的固定材料（新鮮材料可迅速殺死植物細(xì)胞，并可最大程度保持組織和細(xì)胞的自然狀態(tài)，這就是所說(shuō)的殺死和固定）。干材料可先行軟化（常用溫水浸泡，勤換水，勿使材料腐爛）。第三十六頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日

一種固定液兼有殺死和固定雙重作用，固定液能否迅速滲透于組織中，既與固定液本身的穿透能力有關(guān)，也因組織的致密程度有關(guān)，因此要根據(jù)材料的情況選擇固定液，一般的固定液中，F(xiàn)AA固定液的作用較快（葉類(lèi)材料至少4小時(shí)，或8－24小時(shí)、木類(lèi)材料3天－一周），而含有鉻酸的固定液作用較慢（葉類(lèi)材料至少8小時(shí)，木類(lèi)材料一周以上，期間最好更換一項(xiàng)固定液）。組織細(xì)胞的殺死和固定是同時(shí)發(fā)生的。第三十七頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日所謂殺死是指在很短的時(shí)間內(nèi)終止細(xì)胞的生命力；固定是指在殺死的同時(shí)，保存了組織細(xì)胞的構(gòu)造基本上沒(méi)有改變，其目的有一下幾點(diǎn)：①防止組織細(xì)胞中細(xì)菌和酶的活動(dòng)而引起霉?fàn)€。②減少組織細(xì)胞在以后程序中的收縮和變形。③植物細(xì)胞在生活狀態(tài)下，有些結(jié)構(gòu)模糊不清，經(jīng)固定使各部分結(jié)構(gòu)清晰可辨。④經(jīng)過(guò)固定的材料，組織細(xì)胞容易著色。第三十八頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日

b.沖洗：

若為固定的材料，制片前用流水沖洗直至固定液被徹底置換干凈。水溶性固定液要用水洗，特別是含有鉻酸的固定液應(yīng)用流水沖洗，醇溶性固定液，應(yīng)以固定液中酒精濃度相等或相近的酒精洗滌。第三十九頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日流水沖洗時(shí)以慢速流水進(jìn)行沖洗，切忌流速太快使材料上下翻飛而使材料損壞；用酒精混合固定液固定的材料，用同濃度的酒精溶液更換洗滌；固定液中含有苦味酸，無(wú)論它是水溶性還是酒精溶液，一定要用酒精溶液洗滌；含有鉻酸或其它金屬離子的材料可流水沖洗4－24小時(shí)，以徹底清除金屬離子。第四十頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日

c.脫水：

經(jīng)過(guò)沖洗或軟化的材料，因組織內(nèi)含有大量的水分，在以下的步驟中會(huì)有干擾，故須將水脫干凈。通常預(yù)先配制好從10%—100%的梯度酒精溶液，在一定時(shí)間范圍內(nèi)逐級(jí)置換.

注：梯度、時(shí)間要視材料的性質(zhì)而定，不能一概而論，直至到達(dá)100%的酒精兩次。第四十一頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日

梯度酒精脫水時(shí)間可按材料的大小、質(zhì)地情況而定，如較幼嫩的根及根莖、莖、葉等材料，在70％以下濃度的酒精，一般2小時(shí)更換一次，70％以上的酒精約在4小時(shí)以上更換一次。在一般情況下，材料應(yīng)在70％酒精中過(guò)夜；堅(jiān)硬的木質(zhì)材料，每級(jí)度酒精需4－8小時(shí)；材料進(jìn)入70％酒精以上時(shí)，每級(jí)度酒精要更換1－2次。第四十二頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日d.透明：因以下的步驟是使用脂溶性很強(qiáng)的石蠟，但以上最末步驟的純酒精，亦不會(huì)與此相溶，因此本步驟的關(guān)鍵是選擇一個(gè)界于二者之間的溶媒，以實(shí)現(xiàn)自然過(guò)渡。通常選擇二甲苯，與無(wú)水酒精配成梯度并在一定時(shí)間范圍內(nèi)逐級(jí)置換，直至達(dá)純二甲苯兩次。第四十三頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日e.浸蠟：

使組織細(xì)胞內(nèi)浸入石蠟，以填充組織間隙和細(xì)胞內(nèi)，是以下各步驟的關(guān)鍵所在。以上步驟所選擇的二甲苯可以和石蠟相溶，因此將二者配置成不同的梯度，并在一定的時(shí)間范圍內(nèi)逐級(jí)更換（注：本步驟可在恒溫箱中進(jìn)行），直至純石蠟兩次。第四十四頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日f(shuō).包埋：

將材料與熔融的石蠟?zāi)淘谝黄?叫包埋。這個(gè)過(guò)程要求動(dòng)作要嫻熟、快速、到位，通常所用的工具有鑷子、酒精燈、包埋模具（金屬或用紙自己折疊）、冷水等。在此過(guò)程中，要注意材料在蠟塊中的位置，這與以后的各過(guò)程好壞有一定關(guān)系。第四十五頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日g.切片：將包埋好的蠟塊修理成梯形（中央有材料），再將蠟塊熔粘在特制的木塊上，然后固定在旋轉(zhuǎn)切片機(jī)上進(jìn)行切片。將切下的蠟片用鑷子擺放在深色的紙上（靠刀口面朝下）。若蠟帶不直，則要修正蠟塊的幾個(gè)邊，使之規(guī)則后再切；若連不成帶狀，說(shuō)明蠟質(zhì)過(guò)硬或室溫過(guò)低；若卷片，說(shuō)明刀口角度不適或刀鈍感。第四十六頁(yè)，共五十一頁(yè)，2022年，8月28日

h.貼片：將切好的蠟片按需要分割成一定長(zhǎng)短，用鑷子夾放在預(yù)先準(zhǔn)備好的溫水上（水溫以不會(huì)使蠟片熔散但要使蠟片充分展開(kāi)為度），貼于預(yù)先