(全國版)2019版高考生物一輪復(fù)習(xí)生物技術(shù)實(shí)踐第2講微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用學(xué)案

第2講微生物的培育與應(yīng)用考大綱求全國卷五年考情2017·卷ⅠT37,2016·卷ⅠT39,2016·卷ⅢT39,2015·卷微生物的分別和培育ⅠT39,2014·卷ⅠT39,2014·卷ⅡT39,2013·卷ⅡT392.某種微生物數(shù)目的測(cè)定2016·卷ⅠT39,2014·卷ⅡT393.培育基對(duì)微生物的選擇作2017·卷ⅠT37,2016·卷ⅢT39,2014·卷ⅠT39,2013·卷用ⅡT39考點(diǎn)一|微生物的實(shí)驗(yàn)室培育(對(duì)應(yīng)學(xué)生用書第236頁)[識(shí)記—基礎(chǔ)梳理]1．培育基觀點(diǎn)：人們依據(jù)微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同樣需求，配制出供其生長(zhǎng)生殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。(2)營(yíng)養(yǎng)組成：一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽。其他還需要知足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、氧氣以及特別營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求。①種類：依據(jù)物理性質(zhì)可分為液體培育基和固體培育基。②下表為某微生物培育基的成分KH2PO4

Na2HPO4

MgSO4·7H2O

葡萄糖

尿素

瓊脂

H2O1.4g

2.1g

0.2g

10.0g

1.0g

15.0g

1000mL該培育基中可以為微生物供給碳源的是葡萄糖，因?yàn)榇伺嘤屑尤肓谁傊?，故該培育基為固體培育基。2．無菌技術(shù)重點(diǎn)：防備外來雜菌的入侵。不同樣對(duì)象的無菌操作方法(連線)：[答案]①—b—Ⅰ②—b—Ⅱ③、④—a⑤—a—Ⅲ、Ⅳ⑥—b3．大腸桿菌的純化培育制備牛肉膏蛋白胨固體培育基計(jì)算―→稱量―→熔解―→滅菌―→倒平板純化大腸桿菌的方法①純化培育原理：想方想法在培育基上獲取由一個(gè)細(xì)胞生殖而來的肉眼可見的菌落，即可獲取較純的菌種。②純化大腸桿菌的重點(diǎn)步驟：接種。③接種方法：以下列圖甲可表示用平板劃線法接種獲取的平板；以下列圖乙可表示用稀釋涂布平板法接種獲取的平板。④純化原理：上圖甲菌體的分別是經(jīng)過一系列的連續(xù)劃線操作實(shí)現(xiàn)的；上圖乙菌體的分別是經(jīng)過一系列的梯度稀釋和涂布平板操作實(shí)現(xiàn)的。4．菌種的收藏方法暫時(shí)收藏法：關(guān)于屢次使用的菌種，先接種到試管的固定斜面培育基上培育，此后放入4℃的冰箱中收藏。甘油管藏法：關(guān)于需要長(zhǎng)久保留的菌種，先將菌液轉(zhuǎn)入滅菌后的甘油中，混勻后放在－20℃冷凍箱中保留。[教材邊角知識(shí)]選修1P18“旁欄小資料”,微生物的接種方法只有平板劃線法和稀釋涂布平板法嗎？微生物接種的核心是什么？__________________________________________________________________________________________________________________________________【提示】不是，微生物的接種技術(shù)還包含斜面接種、穿刺接種等方法，其核心是防備雜菌的污染，保證培育物的純度。[運(yùn)用—考向?qū)歖考向1考察無菌技術(shù)1．牛奶中富含蛋白質(zhì)，長(zhǎng)久飲用有助于加強(qiáng)體質(zhì)，但牛奶同時(shí)也是多種疾病的流傳載體。國家標(biāo)準(zhǔn)是每毫升牛奶中細(xì)菌數(shù)小于30000個(gè)。以下是牛奶消毒及細(xì)菌檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。解析回答：圖中步驟①稱為________消毒法。步驟②是________。培育基中的蛋白胨可以為微生物供給________。進(jìn)行步驟③操作時(shí)，應(yīng)采納以下中的哪一種工具？________。為了防備雜菌污染，此步驟應(yīng)在________周邊進(jìn)行。將接種后的培育基和作為比較的________________同時(shí)放入37℃恒溫培育箱中，培育36小時(shí)。拿出后統(tǒng)計(jì)各平板的菌落數(shù)，結(jié)果以下表所示。應(yīng)入選擇此中稀釋倍數(shù)為____________的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，經(jīng)過消毒后的牛奶中，細(xì)菌數(shù)大概是____________/mL。牛奶稀釋倍數(shù)102103104平板1菌落數(shù)87101平板2菌落數(shù)83121平板3菌落數(shù)85100[解析](1)80°C恒溫水浴15min是巴氏消毒法，步驟②是進(jìn)行系列稀釋(或梯度稀釋)。培育基中的蛋白胨可以為微生物供給碳源、氮源(和維生素)，③是接種，因?yàn)樾枰?jì)數(shù)，需用稀釋涂布平板法，接種工具是涂布器；為了防備雜菌污染，此步驟應(yīng)在酒精燈火焰周邊進(jìn)行。(3)統(tǒng)計(jì)各平板的菌落數(shù)時(shí)，應(yīng)選擇菌落數(shù)在30～300的計(jì)數(shù)，經(jīng)過消毒后的牛奶中，細(xì)菌數(shù)大概是(87＋83＋85)÷3×102＝8500個(gè)。[答案]

(1)巴氏

系列稀釋

(或梯度稀釋

)

(2)碳源、氮源(和維生素

)

B酒精燈火焰(3)一個(gè)未接種的培育基

102

8500

個(gè)[技法總結(jié)]選擇無菌技術(shù)的原則1．考慮無菌技術(shù)的收效：滅菌的收效比消毒要好。2．考慮操作對(duì)象的承受能力：活體生物資料、操作者的手等只好采納消毒，而不可以滅菌。[備選習(xí)題](2018·湖北省七市高三一調(diào))我國規(guī)定1升自來水中大腸桿菌不得超出3個(gè)。在培育基中加入伊紅美藍(lán)，可以使大腸桿菌的菌落呈深紫色，并帶有金屬光彩。有關(guān)部門據(jù)此對(duì)自來水中的大腸桿菌進(jìn)行檢測(cè)。詳細(xì)步驟大概以下：(一)用火焰灼燒自來水龍頭3分鐘，此后翻開水龍頭放水5分鐘，再用無菌的三角瓶接取1000毫升水樣，蓋好瓶塞。(二)將漏斗和抽濾瓶固定好，用鑷子夾住濾膜邊沿，將水樣倒入漏斗中，邊抽濾、邊加水。(三)用鑷子將濾膜拿出、放在無菌平板進(jìn)步行培育，察看并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果?；卮鹨韵聠栴}：實(shí)驗(yàn)中所用的醋酸纖維素濾膜、漏斗、抽濾瓶、鑷子等實(shí)驗(yàn)器械和培育基都需先用______________法進(jìn)行滅菌。如需檢測(cè)培育基滅菌能否完全，常用的方法是_________________________________________________________________________________________________________________________。制作本實(shí)驗(yàn)所用的無菌平板時(shí)，需要加入________、水、無機(jī)鹽等大腸桿菌所必需的營(yíng)養(yǎng)成分，以及加入________，便于統(tǒng)計(jì)菌落外；還需要將培育基的pH調(diào)整至________性。鑒識(shí)能否有大腸桿菌菌落，需要在培育基中加入

________。(3)按上述步驟制作的

3個(gè)樣品平板上全部的菌落數(shù)分別為

49、51、47。能否據(jù)此得出每升水樣中大腸桿菌數(shù)約為

49的結(jié)論？

________。原由是

________________________________________________________________________。[解析](1)培育基常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌法，檢測(cè)培育基滅菌能否完全，常用的方法是將滅菌過的培育基在適合的條件下培育一段時(shí)間，察看培育基上能否有菌落產(chǎn)生。培育微生物的培育基需要碳源、氮源、水和無機(jī)鹽。統(tǒng)計(jì)微生物數(shù)目要用固定培育基，所以培育基需要加入瓊脂。大腸桿菌生長(zhǎng)的最合適pH為中性或微堿性，伊紅美藍(lán)是專一判斷大腸桿菌的指示劑，利用伊紅美藍(lán)培育基可以判斷大腸桿菌。該培育基是鑒識(shí)培育基，在平板上生長(zhǎng)的菌落，只有部分是大腸桿菌形成的菌落，因此大腸桿菌數(shù)實(shí)質(zhì)數(shù)值應(yīng)當(dāng)小于49。[答案]

(1)高壓蒸汽滅菌

將滅菌過的培育基在適合的條件下培育一段時(shí)間，察看培育基上能否有菌落產(chǎn)生(2)碳源和氮源

瓊脂

中性或微堿

伊紅美藍(lán)不可以培育基表面生長(zhǎng)的菌落，只有部分是大腸桿菌的菌落考向2微生物的純化培育2．(2018·貴州省模擬)生活飲用水已經(jīng)過積淀、過濾、加氯消毒等辦理，含微生物極少，但當(dāng)水源不干凈或辦理達(dá)不到要求時(shí)，仍舊會(huì)含相當(dāng)量的微生物甚至含有致病性微生物。供水管道損壞及二次供水等環(huán)節(jié)也可能致使生活飲用水的污染。因今生活飲用水的微生物安全性平時(shí)檢測(cè)是很重要的。我國生活飲用水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)(GB5749－85)中規(guī)定生活飲用水中細(xì)菌總數(shù)不得大于100個(gè)/mL，總大腸菌群不得大于3個(gè)/L。(1)查驗(yàn)細(xì)菌的含量時(shí)，可以將水樣進(jìn)行一系列的梯度稀釋，此后將不同樣稀釋度的水樣用涂布器分別涂布到瓊脂固體培育基的表面進(jìn)行培育，記錄菌落數(shù)目，進(jìn)而計(jì)算出樣本中的菌株數(shù)。這類微生物的計(jì)數(shù)方法獲取的菌落數(shù)一般

________(填“小于”“大于”或“等于”)活菌的實(shí)質(zhì)數(shù)目。(2)用該方法對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)能否需要設(shè)置比較組？

____。為何？

___________________________________________________________________。分別取0.1mL已稀釋102倍的水樣分別涂布到三個(gè)瓊脂固體培育基的表面進(jìn)行培育，培育基記錄到大腸桿菌的菌落數(shù)分別為155、158、170，則每升原水樣中大腸桿菌數(shù)為________。為了更進(jìn)一步的研究，需要純化大腸桿菌。以下列圖是采納純化微生物培育的兩種接種方法接種后培育的收效圖，請(qǐng)解析接種的詳細(xì)方法。獲取圖A收效的接種方法是________________，圖B收效的接種方法是____________。某同學(xué)在用A方法純化土壤中的細(xì)菌時(shí)，發(fā)現(xiàn)培育基上的菌落連成一片，最可能的原由是________________________。為了防備雜菌污染，有同學(xué)建議加入抗生素，你感覺可以嗎？________。[解析](1)用這類方法計(jì)數(shù)時(shí)，當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞在一同時(shí)，平板上察看到的但是一個(gè)菌落，所以獲取的菌落數(shù)一般小于活菌的實(shí)質(zhì)數(shù)目。設(shè)置比較的目的是為了除去非測(cè)試要素(如培育基能否被污染)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。由給定的數(shù)據(jù)可計(jì)算出每升原水樣中大腸桿菌數(shù)為(155＋158＋170)÷3×102×10×103＝1.61×108。(4)讀題圖可知，獲取圖A收效的接種方法是稀釋涂布平板法，圖B收效的接種方法是平板劃線法。某同學(xué)在用A方法純化土壤中的細(xì)菌時(shí)，發(fā)現(xiàn)培育基上的菌落連成一片，最可能的原由是菌液濃度過高。因?yàn)榭股夭恢粴珉s菌，并且也可以殺滅大腸桿菌，因此在培育基上不可以夠加入抗生素。[答案](1)小于(2)需要因?yàn)樾枰袛嗯嘤芊癖晃廴?3)1.61×108(4)稀釋涂布平板法平板劃線法菌液濃度過高(土壤溶液稀釋不夠)不可以夠[規(guī)律總結(jié)]兩種純化細(xì)菌方法的比較項(xiàng)目長(zhǎng)處缺點(diǎn)平板劃線法可以察看菌落特色，對(duì)混淆不可以計(jì)數(shù)菌進(jìn)行分別稀釋涂布平可以計(jì)數(shù)，可以察看菌落特吸取量較小，較麻煩，平板不干板法征燥收效不好，簡(jiǎn)單延伸[備選習(xí)題]某研究小組研究了不同樣濃度的抗生素

A對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見以下列圖

1?；卮鹨韵掠嘘P(guān)問題：(1)該培育基為大腸桿菌供給的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、無機(jī)鹽、置該培育基時(shí)，平時(shí)加入________作為凝結(jié)劑。

________四類，而配為了保證利用____________法接種大腸桿菌時(shí)，形成一層菌膜，則對(duì)菌種的稀釋倍數(shù)________。其他，在培育和接種大腸桿菌時(shí)要特別注意進(jìn)行________操作。依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選出對(duì)大腸桿菌控制作用最顯然的抗生素A濃度的依據(jù)是______________________________________________________________________________________________________________________

。(3)為減少實(shí)驗(yàn)偏差，每一濃度的抗生素

A還要制備

________。(4)該研究小組運(yùn)用上述實(shí)驗(yàn)方法還研究了同樣濃度的a、b、c三種不同樣抗生素對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)的影響。請(qǐng)?jiān)趫D2中圖示這一辦理方案(可模擬圖1加以必需的講解)。[解析](1)微生物生長(zhǎng)生殖所需要的四類主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是水、無機(jī)鹽、碳源和氮源。該實(shí)驗(yàn)所用的培育基為固體培育基，常用的凝結(jié)劑是瓊脂。圖中接種大腸桿菌時(shí)所使用的接種方法是稀釋涂布平板法，為了獲取菌膜，稀釋倍數(shù)不可以太大。接種和培育大腸桿菌的重點(diǎn)是無菌操作。據(jù)圖1解析，⑤號(hào)圓紙片的抑菌圈最大，說明該濃度的抗生素A對(duì)大腸桿菌控制作用最顯然。為減少實(shí)驗(yàn)偏差，每一濃度的抗生素A還要制備多個(gè)圓紙片進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)。該方案的自變量為同樣濃度的a、b、c三種不同樣抗生素，還應(yīng)有空白比較，注意在圖中要標(biāo)志清楚，詳細(xì)圖解見答案。[答案]

(1)氮源

瓊脂

(2)稀釋涂布平板

不可以太大

無菌

透明圈越大，控制收效越顯然

(3)多個(gè)圓紙片

(4)圖示見以下列圖所示考點(diǎn)二|微生物的分別與計(jì)數(shù)(對(duì)應(yīng)學(xué)生用書第238頁)[識(shí)記—基礎(chǔ)梳理]1．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法顯微鏡直接計(jì)數(shù)法①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算必定容積的樣品中微生物的數(shù)目。②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。③缺點(diǎn)：不可以劃分死菌與活菌。間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培育基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，根源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推斷出樣品中大概含有多少活菌。②計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M，此中，C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。③操作：設(shè)置重復(fù)組，加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與正確性。同時(shí)為了保證結(jié)果正確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。2．土壤中分解尿素的細(xì)菌的分別與計(jì)數(shù)分別原理土壤中細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕?，這類物質(zhì)在把尿素分解成無機(jī)物的過程中起到催化作用。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般用稀釋涂布平板法。實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣→樣品的稀釋→微生物的培育與察看→細(xì)菌的計(jì)數(shù)。(4)判斷方法：在培育基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅，pH高升，說明細(xì)菌能分解尿素。3．分解纖維素的微生物的分別纖維素酶①組成：纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它最少包含三種組分，即

C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。②作用：C1酶纖維素――→纖維二糖

葡萄糖苷酶――→

葡萄糖CX酶纖維素分解菌的精選①原理纖維素分解菌↓剛果紅纖維素酶―→紅色復(fù)合物――――→紅色消逝，出現(xiàn)透明圈。纖維素②精選方法：剛果紅染色法，即經(jīng)過能否產(chǎn)生透明圈來精選纖維素分解菌。③培育基：以纖維素為唯一碳源的選擇培育基。④實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣：富含纖維素的環(huán)境↓選擇培育：用選擇培育基培育，以增添纖維素分解菌的濃度↓梯度稀釋：制備系列稀釋液↓涂布平板：將樣品涂布到鑒識(shí)纖維素分解菌的培育基上↓精選：產(chǎn)生透明圈的菌落[運(yùn)用—考向?qū)歖考向1微生物的選擇培育1．(2018·吉林長(zhǎng)春二模)下邊是精選抗鏈霉素大腸桿菌的實(shí)驗(yàn)步驟及有關(guān)圖解。實(shí)驗(yàn)步驟：①把大批對(duì)鏈霉素敏感的大腸桿菌接種在不含鏈霉素的培育基1的表面，進(jìn)行培育。②待其長(zhǎng)出密集的小菌落伍，用影印法接種到不含鏈霉素的培育基2上，隨即再影印到含有鏈霉素的培育基3上，進(jìn)行培育。③在培育基3上出現(xiàn)了個(gè)別抗鏈霉素的菌落，將其精選出。請(qǐng)回答：配制培育基時(shí)除了知足基本的營(yíng)養(yǎng)條件外，還需知足微生物生長(zhǎng)對(duì)特別營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、________、________的要求。從功能上看，含有鏈霉素的培育基屬于________培育基。若在培育基中加入伊紅和美藍(lán)，則培育皿中長(zhǎng)出的菌落顏色為________。由圖可知，1號(hào)培育基接種的方法為________________。對(duì)2和3進(jìn)行比較，在2上找到與3上相應(yīng)的菌落，挑取此中一個(gè)菌落接種到________(填“含鏈霉素”或“不含鏈霉素”

)的培育基上，假如有好多的菌落出現(xiàn)，則說明該抗性基因突變發(fā)生在該菌接觸鏈霉素之

________(填“前”或“后”

)。(4)3

中的菌落比

1、2中的菌落少好多，這說了然基因突變擁有

________的特色。[解析]

(1)配制培育基時(shí)在供給幾種基本營(yíng)養(yǎng)條件的基礎(chǔ)上，還需知足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特別營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。

(2)鏈霉素是抗生素，對(duì)大腸桿菌擁有選擇作用。在伊紅和美藍(lán)培育基上，大腸桿菌菌落顏色為黑色。由題圖可知，1號(hào)培育基接種的方法為稀釋涂布平板法。(3)培育基2和培育基3上同樣的菌落，是擁有同樣性狀的大腸桿菌形成的，將培育基2中一個(gè)與培育基3相對(duì)應(yīng)的菌落接種到含鏈霉素的培育基上，若出現(xiàn)好多的菌落，則說明該抗性基因突變發(fā)生在該菌接觸鏈霉素從前。(4)抗鏈霉生性狀是大腸桿菌基因突變后獲取的性狀，3號(hào)培育皿中的菌落比1號(hào)、2號(hào)中的菌落少好多，這說了然基因突變擁有低頻性的特色。[答案](1)pH氧氣(2)選擇黑色稀釋涂布平板法(3)含鏈霉素前(4)低頻性[備選習(xí)題

]在檢查和分別湖水中耐鹽細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)中，先將10升湖水水樣濃縮至10毫升，此后各取濃縮水樣1毫升，涂布到多個(gè)培育皿中培育。請(qǐng)回答：可以經(jīng)過提升培育基中____________的濃度，精選被檢查細(xì)菌，這類培育基被稱為____________培育基。要提升實(shí)驗(yàn)結(jié)果的靠譜性，除去培育基未完全滅菌的可能性，應(yīng)當(dāng)設(shè)置的比較組是____________。為查驗(yàn)

(1)中精選方法的收效，可以設(shè)置的比較組是

____________。(3)在微生物的培育過程中，實(shí)驗(yàn)室對(duì)培育基滅菌常用的方法是

____________。為防備冷凝水影響細(xì)菌的生長(zhǎng)，需將培育皿____________培育。在培育基上產(chǎn)生的單個(gè)菌落在生態(tài)學(xué)中可以被稱為____________。依據(jù)培育皿上菌落的平均數(shù)可以計(jì)算湖水中該種細(xì)菌的密度，但計(jì)算的數(shù)據(jù)要比實(shí)質(zhì)活菌的數(shù)目少，原由是__________________________________________________________________________________________________________________________________

。[解析]

(1)此實(shí)驗(yàn)的目的是檢查和分別湖水中耐鹽細(xì)菌，

所以可經(jīng)過提升培育基中

NaCl的濃度，進(jìn)而精選出被檢查細(xì)菌，

而其余耐鹽性較低或不耐鹽的細(xì)菌則被殺死，

這類培育基被稱為選擇培育基。要提升實(shí)驗(yàn)結(jié)果的靠譜性，除去培育基未完全滅菌的可能性，應(yīng)當(dāng)設(shè)置一個(gè)未接種的培育皿作為比較組。

(1)中精選耐鹽細(xì)菌是經(jīng)過加入高濃度的

NaCl實(shí)現(xiàn)的，所以要查驗(yàn)

(1)中精選方法的收效，可以設(shè)置的比較組是未加高濃度的

NaCl培育基進(jìn)行培育。對(duì)培育基滅菌常用的方法是高壓蒸汽滅菌。微生物極有可能進(jìn)入培育皿中附在冷凝水中，為防備冷凝水影響細(xì)菌的生長(zhǎng)，需將培育皿倒置培育。在培育基上產(chǎn)生的單個(gè)菌落為同一種生物的總和，在生態(tài)學(xué)中可以被稱為種群。察看培育皿上菌落數(shù)時(shí)，若兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一同時(shí)，視為一個(gè)菌落，則計(jì)算的數(shù)據(jù)要比實(shí)質(zhì)活菌的數(shù)目少。[答案]

(1)鹽(或

NaCl)

選擇

(2)未接種

(或接種等量無菌水

)的培育皿

未加高濃度鹽的培育基培育

(3)高壓蒸汽滅菌

倒置

種群

(4)當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一同時(shí)在平板上察看到的是一個(gè)菌落考向2微生物的分別與計(jì)數(shù)2．(2018·黃岡市高三聯(lián)考)水污染是全世界性的環(huán)境問題，微生物降解是水污染治理的有效手段之一。聚乙烯醇

(PVA)是存在于化工污水中的一種難以降解的大分子有機(jī)物，

PVA分解菌能產(chǎn)生

PVA

酶分解

PVA，PVA與碘作用時(shí)能產(chǎn)生藍(lán)綠色復(fù)合物，當(dāng)

PVA

被分解時(shí)藍(lán)綠色復(fù)合物消逝，形成白色透明斑，請(qǐng)回答以下問題：要從土壤中精選出能高效分解PVA的細(xì)菌，應(yīng)采納以________作為唯一的碳源的選擇培育基，實(shí)驗(yàn)中還應(yīng)設(shè)置比較組。將菌液稀釋同樣的倍數(shù)，比較組培育基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目應(yīng)顯然________(填“多于”或“少于”)選擇培育基上的數(shù)目，進(jìn)而說明選擇培育基擁有精選作用。要測(cè)定土壤稀釋液中微生物的數(shù)目，可在顯微鏡下用________計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)。若將100mL

含有

PVA

分解菌的土壤樣品溶液稀釋

104倍后，取

0.1mL

稀釋液平均涂布在選擇培育基表面，測(cè)得菌落數(shù)的平均值為

160個(gè)，空白比較組平板上未出現(xiàn)菌落，則

100mL原菌液中有

PVA分解菌

________個(gè)，該方法的丈量值與實(shí)質(zhì)值比較一般會(huì)

________(

填“偏大”“偏小”或“相等”

)。要判斷分別出的細(xì)菌能否為PVA分解菌，培育PVA分解菌的培育基中除了加入必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外還需要加入

________用于鑒識(shí)

PVA

分解菌。要比較不同樣菌株降解

PVA能力的大小，用含同樣

PVA

濃度的上述培育基來培育不同樣菌株，一準(zhǔn)時(shí)間后，經(jīng)過測(cè)定________來確立不同樣菌株降解

PVA

能力的大小。[解析]

(1)要從土壤中精選出能高效分解

PVA的細(xì)菌，應(yīng)采納以聚乙烯醇

(PVA)作為唯一的碳源的選擇培育基，目的是裁減不可以分解聚乙烯醇(PVA)的細(xì)菌。實(shí)驗(yàn)中設(shè)置的比較組培育基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目應(yīng)顯然多于選擇培育基上的數(shù)目，因?yàn)楸容^組沒有裁減不可以分解聚乙烯醇(PVA)的細(xì)菌。(2)在顯微鏡下計(jì)數(shù)微生物細(xì)胞的數(shù)目可直接用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。依據(jù)題意，100mL原菌液中有PVA分解菌的數(shù)目為160÷0.1×104×100＝1.6×109。因?yàn)樵摲椒ǐ@取的菌落可能是兩個(gè)也好多個(gè)細(xì)菌共同產(chǎn)生一個(gè)菌落致使統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)較實(shí)質(zhì)菌落數(shù)偏少，所以該方法的丈量值與實(shí)質(zhì)值比較一般會(huì)偏小。(3)依據(jù)題目告訴的判斷PVA分解菌的原理“PVA與碘作用時(shí)能產(chǎn)生藍(lán)綠色復(fù)合物，當(dāng)PVA被分解時(shí)藍(lán)綠色復(fù)合物消逝，形成白色透明斑”可知，要判斷分別出的細(xì)菌能否為PVA分解菌，培育PVA分解菌的培育基中除了加入必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外還需要加入碘用于鑒識(shí)PVA分解菌。要比較不同樣菌株降解PVA能力的大小，用含同樣PVA濃度的上述培育基來培育不同樣苗株，一準(zhǔn)時(shí)間后，經(jīng)過測(cè)定白色透明斑的大小(或直徑)來確立不同樣菌株降解PVA能力的大小。[答案](1)聚乙烯醇(或PVA)多于(2)血細(xì)胞(血球)9偏小(3)碘白1.6×10色透明斑的大小(或直徑)3．(2018·衡水中學(xué)高三調(diào)考)為研究“某品牌酸奶中乳酸菌數(shù)目及其抗衡生素耐藥性情況”，某同學(xué)進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)解析回答以下問題：配制的細(xì)菌培育基除了含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽等主要營(yíng)養(yǎng)成格外，還應(yīng)加入適量的________和瓊脂。在培育基各成分熔解與滅菌之間，要進(jìn)行的是________。(2)接種微生物的方法有好多，圖1中過程①②③所示的方法為______________。用該方法統(tǒng)計(jì)樣本菌落數(shù)后，所得數(shù)據(jù)需要乘以10n后，才可表示乳酸菌的數(shù)目(單位：個(gè)/mL)，這里的n＝________。用該方法統(tǒng)計(jì)樣本菌落數(shù)時(shí)，同時(shí)需要做A、B、C三個(gè)培育皿，原由是______________________________________________________________________________。為了檢測(cè)乳酸菌抗衡生素的敏感性，取該單菌落合適稀釋，接種于固體培育基表面，在

37

℃培育箱中培育

24h

，使其平均生長(zhǎng)，充滿平板。將分別含有

A、B、C三種抗生素的濾紙片平均置于該平板上的不同樣地點(diǎn)，培育一段時(shí)間后，含

A的濾紙片四周出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌抗衡生素

A________(填“敏感”或“不敏感”

)；含

C濾紙片四周的透明圈比含

A的小，且透明圈中出現(xiàn)了一個(gè)菌落，在除去雜菌污染的狀況下，此菌落很可能是

__________________。[解析]

(1)配制的細(xì)菌培育基除了含有水、

碳源、氮源和無機(jī)鹽等主要營(yíng)養(yǎng)成格外，

還需要特其他物質(zhì)維生素，因?yàn)樵撆嘤鶠楣腆w培育基，所以還應(yīng)加入適合的瓊脂作為凝固劑。在培育基各成分熔解與滅菌之間，

要先調(diào)

pH。(2)

接種微生物的方法有好多，

圖

1中過程③所示的方法為稀釋涂布平板法。用該方法統(tǒng)計(jì)樣本菌數(shù)落時(shí)，同時(shí)需要做A、B、C三個(gè)培育皿，分別計(jì)數(shù)3次，取平均值，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為正確靠譜。用該方法統(tǒng)計(jì)樣本菌落數(shù)后，所得數(shù)據(jù)需要乘以10n后，才可表示乳酸菌的數(shù)目(單位：個(gè)/mL)，這里的n＝6。在抗藥性查驗(yàn)過程中，假如在菌落四周出現(xiàn)透明的圓圈，說明此種抗生素可控制該細(xì)菌，所以該致病菌抗衡生素A敏感；含C濾紙片四周的透明圈比含A的小，且透明圈出現(xiàn)了一個(gè)菌落，在除去雜菌污染的狀況下，此菌落很可能是抗生素C的耐藥菌。[答案]

(1)維生素

調(diào)

pH

(2)稀釋涂布平板法

6分別計(jì)數(shù)

3次，取平均值，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為正確靠譜

(3)敏感

抗生素

C的耐藥菌[備選習(xí)題](2018·河南六市聯(lián)考)微生物加強(qiáng)采油(MEOR)是利用某些微生物能降解石油，增大石油的乳化度，降低石油黏度的原理，經(jīng)過向油井中注入含微生物的水來提升采油率的新技術(shù)。以下是人們精選、純化和擴(kuò)大培育該類微生物的實(shí)驗(yàn)操作。請(qǐng)回答以下問題：土壤是微生物的大本營(yíng)，該類微生物應(yīng)取自________________的土壤。為精選和純化該類微生物，從功能上分，應(yīng)采納________培育基。常用的接種方法是________和________。接種后，應(yīng)密封培育的原由是__________________，培育一段時(shí)間后在培育基上形成降油圈，此時(shí)采用______________便可獲取高效菌株。(4)擴(kuò)大培育過程中需要對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)。取

0.2mL樣品，用固體培育基對(duì)其培育，最后統(tǒng)計(jì)三個(gè)平板，菌落數(shù)分別是

200、180、220。則樣品中微生物的數(shù)目為

________個(gè)/mL。該統(tǒng)計(jì)結(jié)果

________(填“低于”“高于”

)實(shí)質(zhì)值。[解析]

(1)在長(zhǎng)久被石油污染的土壤中生計(jì)下來的微生物，能降解石油，所以取樣時(shí)，應(yīng)從含石油多的土壤中采集。

(2)從功能上分，應(yīng)采納特定的選擇培育基進(jìn)行精選和純化該類微生物；常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。

(3)該類微生物是厭氧微生物，接種后應(yīng)密封培育；培育一段時(shí)間后在培育基上可形成降油圈，

降油圈越大，說明該處的微生物降解石油的能力越強(qiáng)，所以應(yīng)選擇降油圈大的菌落進(jìn)行培育以獲取高效菌株。

(4)

計(jì)算微生物的數(shù)目應(yīng)取三個(gè)平板的平均值，即

(200

＋180＋220)÷3÷0.2＝

1000(個(gè)/mL)，該結(jié)果會(huì)低于實(shí)質(zhì)值，

因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)菌落連在一同時(shí)，

平板上察看到的但是單個(gè)菌落數(shù)。[答案](1)長(zhǎng)久被石油污染(含石油多的)(2)選擇平板劃線法稀釋涂布平板法(3)該類微生物是厭氧型的降油圈大的菌落(4)1000

低于真題查收|感悟高考(對(duì)應(yīng)學(xué)生用書第

淬煉考能239頁)1．(2017·全國卷Ⅰ)某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成

CO2和

NH3，供植物吸取和利用?；卮鹣铝袉栴}：有些細(xì)菌能分解尿素，有些細(xì)菌則不可以，原由是前者能產(chǎn)生________。能分解尿素的細(xì)菌不可以以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源，原由是_______________________________________________________________。但可用葡萄糖作為碳源，進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是___________________________________________________________(答出兩點(diǎn)即可)。為了精選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培育基時(shí)，應(yīng)選擇________(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”)作為氮源，不選擇其余兩組的原由是_______________________________________________________________________________________________________________________________。用來篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有____________________________________________________________________________________________________________________(

答出兩點(diǎn)即可

)。[解析]

(1)有些細(xì)菌能分解尿素是因?yàn)檫@些細(xì)菌能產(chǎn)生脲酶，將尿素分解成

CO2和

NH3。能分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物，不可以利用CO2作為碳源合成有機(jī)物，但這些細(xì)菌可用葡萄糖作為碳源，進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是：作為能源物質(zhì)氧化分解為細(xì)胞生命活動(dòng)供給能量，為其余有機(jī)物的合成供給原料。為了精選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培育基時(shí)，應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源，這樣只有能分解尿素的細(xì)菌才能在培育基上生計(jì)。

若選擇“

NH4NO3”或“尿素＋

NH4NO3”作為氮源，能分解尿素的細(xì)菌和不可以分解尿素的細(xì)菌都能利用NH4NO3，不可以起到精選作用。用來精選分解尿素細(xì)菌的培育基含有KH2PO4和Na2HPO4，它們可以為細(xì)菌生長(zhǎng)供給無機(jī)營(yíng)養(yǎng)；同時(shí)，

KH2PO4和

Na2HPO4還可以作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過程中

pH牢固。[答案]

(1)脲酶

分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物，不可以利用

CO2來合成有機(jī)物

為細(xì)胞生命活動(dòng)供給能量，為其余有機(jī)物的合成供給原料

(2)尿素

其余兩組都含有

NH4NO3，能分解尿素的細(xì)菌和不可以分解尿素的細(xì)菌都能利用

NH4NO3，不可以起到精選作用

(3)為細(xì)菌生長(zhǎng)供給無機(jī)營(yíng)養(yǎng)，作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過程中pH牢固2．(2016·全國卷Ⅰ)空氣中的微生物在重力等作用下，可以必定程度地沉降。某研究小組欲用平板采集教室空氣中的微生物，以認(rèn)識(shí)教室內(nèi)不同樣高度空氣中微生物的散布狀況。實(shí)驗(yàn)步驟以下：①配制培育基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O)；②制作無菌平板；③設(shè)置空白比較組和若干實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行有關(guān)操作；④將各組平板置于37℃恒溫箱中培育一段時(shí)間，統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的平均數(shù)?；卮鹨韵聠栴}：(1)該培育基中微生物所需的氮根源于________。若要達(dá)成步驟②，該培育基中的成分X平時(shí)是________。(2)步驟③中，實(shí)驗(yàn)組的操作是______________________________________________________________________________________________________。(3)若在某次檢查中，某一實(shí)驗(yàn)組平板上菌落平均數(shù)為36個(gè)/平板，而空白比較組的一個(gè)平板上出現(xiàn)了6個(gè)菌落，這類結(jié)果說明在此次檢查中出現(xiàn)了________現(xiàn)象。若將30(即36－6)個(gè)/平板作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法________(填“正確”或“不正確”)。[解析](1)牛肉膏和蛋白胨中均含有氮元素，所以微生物所需的氮根源于牛肉膏和蛋白胨。若要達(dá)成步驟②，需要進(jìn)行倒平板操作，用到的是固體培育基，所以培育基中要有瓊脂。(2)該實(shí)驗(yàn)的空白比較組為不進(jìn)行辦理的無菌平板，實(shí)驗(yàn)組的操作為將各無菌平板分別放置在教室不同樣高度的地點(diǎn)上，開蓋裸露同樣時(shí)間。(3)若空白比較組的平板上出現(xiàn)了菌落，說明實(shí)驗(yàn)過程中出現(xiàn)了污染現(xiàn)象?？瞻妆容^組的一個(gè)平板上出現(xiàn)了6個(gè)菌落，致使實(shí)驗(yàn)變量不唯一，不可以確立實(shí)驗(yàn)組平板上的菌落能否僅由教室內(nèi)不同樣高度空氣中的微生物形成，所以不可以求出實(shí)驗(yàn)組的菌落平均數(shù)。[答案](1)牛肉膏、蛋白胨瓊脂(2)將各實(shí)驗(yàn)組平板分別放置在教室不同樣高度的位置上，開蓋裸露一段時(shí)間污染不正確3．(2016·全國卷Ⅲ)某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液為實(shí)驗(yàn)資料分別純化乳酸菌。分別純化所用固體培育基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培育基中的碳酸鈣?；卮鹨韵聠栴}：分別純化乳酸菌時(shí)，第一需要用________對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋，進(jìn)行梯度稀釋的原由是__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(2)推斷在分別純化所用的培育基中加入碳酸鈣的作用有

________和________。分別純化時(shí)應(yīng)精選出

________的菌落作為候選菌。(3)乳酸菌在－20

℃長(zhǎng)久保留時(shí)，菌液中常需要加入必定量的

________(

填“蒸餾水”“甘油”或“碳酸鈣”

)。[解析]

(1)分別純化乳酸菌時(shí)，第一需要用無菌水對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋，

這樣既可防備雜菌污染，又可將乳酸菌分別成單個(gè)細(xì)胞，以便在培育基表面形成單個(gè)菌落。(2)乳酸的累積影響乳酸菌的增殖，加入碳酸鈣可以中和乳酸菌代謝(無氧呼吸)過程中產(chǎn)生的乳酸，其他，乳酸和碳酸鈣反響，進(jìn)而致使碳酸鈣分解形成透明圈，有益于乳酸菌的鑒識(shí)和分別。(3)關(guān)于需要長(zhǎng)久保留的菌種，可以采納甘油管藏的方法。在

3mL的甘油瓶中，裝入

1mL甘油后滅菌。將

1mL培育的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在－

20℃的冷凍箱中保留。[答案]

(1)無菌水

泡菜濾液中菌的濃度高，直接培育很難分別獲取單菌落

(2)鑒識(shí)乳酸菌中和產(chǎn)生的乳酸(或酸)擁有透明圈(3)甘油4．(2014·全國卷Ⅰ)植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?；卮鹨韵聠栴}：(1)分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，

該酶是由

3種組分組成的復(fù)合酶，此中的葡萄糖苷酶可將________分解成________。在含纖維素的培育基中加入剛果紅(CR)時(shí)，CR可與纖維素形成________色復(fù)合物。用含有CR的該種培育基培育纖維素分解菌時(shí)，培育基上會(huì)出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的________。(3)為從富含纖維素的土壤中分別獲取纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計(jì)了甲、乙兩種培育基(成分見下表)：酵母膏無機(jī)鹽淀粉纖維素粉瓊脂CR溶液水培育基甲＋＋＋＋－＋＋培育基乙＋＋＋－＋＋＋注：“＋”表示有，“－”表示無。據(jù)表判斷，培育基甲________(填“能”或“不可以”)用于分別和鑒識(shí)纖維素分解菌，原因是__________________________________________________；培育基乙________(填“能”或“不可以”)用于分別和鑒識(shí)纖維素分解菌，原由是_________________________________