酶工程制藥講解

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一、酶工程〔EnzymeEngineering〕酶工程是酶學(xué)和工程學(xué)相互滲透結(jié)合開展而形成一門新的技術(shù)學(xué)科。它是從應(yīng)用的目的出發(fā)研究酶、應(yīng)用酶的特異性催化功能，并通過工程化將相應(yīng)原料轉(zhuǎn)化成有用物質(zhì)的技術(shù)。第一節(jié)概述對酶的認(rèn)識和研究歷程人們對酶的認(rèn)識起源于生產(chǎn)實踐，人類幾千年前，都開始制作發(fā)酵及食品。1833年，PagonPersoz從麥芽中得到一種能水解淀粉的物質(zhì)——淀粉酶。1878年，Kühne將這類生物催化劑統(tǒng)稱為Enzyme。酶工程的名稱出現(xiàn)于二十世紀(jì)二十年代初1969年人工合成牛胰核糖核酸酶。1971年，第一屆國際酶工程會議提出酶工程的主要內(nèi)容：酶的生產(chǎn)、別離純化、酶的固定化、酶及固定化的反響器、酶和固定化酶的應(yīng)用。1983年，發(fā)現(xiàn)核酸的催化功能——1989獲諾貝爾獎一.化學(xué)酶工程固定化酶：運(yùn)動受到限制修飾酶：在體外用一定的化學(xué)方法將酶和一些試劑進(jìn)行共價連接后而形成的酶。人工模擬酶：利用有機(jī)化學(xué)合成的方法合成的比酶結(jié)構(gòu)簡單的具有催化作用的非蛋白質(zhì)分子。二.生物酶工程工程酶〔克隆酶〕突變酶設(shè)計新酶基因三.酶工程的根本過程可以概括如下四.生物工程各分支領(lǐng)域之間的關(guān)系如何？酶工程主要包括內(nèi)容酶的大量生產(chǎn)和別離純化及它們在細(xì)胞外的應(yīng)用酶的固定化技術(shù)和固定化酶反響器基因工程技術(shù)應(yīng)用于酶制劑的生產(chǎn)與遺傳修飾酶的研究酶分子改造與化學(xué)修飾以及酶結(jié)構(gòu)與功能之間關(guān)系的研究酶的抑制劑、激活劑的開發(fā)及應(yīng)用研究抗體酶、核酸酶的研究模擬酶、合成酶以及酶分子的人工設(shè)計、合成的研究有機(jī)介質(zhì)中酶的反響,新穎酶的發(fā)現(xiàn)、研究和應(yīng)用二、酶的來源1〕直接從動植物獲得，即從生物體中別離和提純?nèi)狈Γ荷a(chǎn)周期長，來源有限，還要受一些自然條件的限制。2〕化學(xué)合成方法缺乏：一般只適用于短肽的生產(chǎn)，實際應(yīng)用還需相當(dāng)長的時間。3〕工業(yè)微生物發(fā)酵，即通過液體深層發(fā)酵或固態(tài)發(fā)酵，是工業(yè)上酶的主要來源。其優(yōu)點(diǎn)如下：微生物種類繁多，制備出的酶種類齊全微生物繁殖快，生產(chǎn)周期短微生物具有較強(qiáng)的適應(yīng)性和應(yīng)變能力，可以通過適應(yīng)、誘導(dǎo)、誘變以及基因工程等方法培育出新的高產(chǎn)酶的菌株。微生物細(xì)胞產(chǎn)生酶的分類〔按生成條件〕結(jié)構(gòu)酶：在細(xì)胞的生長過程中出于其自身需要而表達(dá)。誘導(dǎo)酶：參加相應(yīng)的誘導(dǎo)劑后才會表達(dá)，誘導(dǎo)劑一般是該酶所催化反響的底物或產(chǎn)物。野生型微生物經(jīng)過遺傳改造后變?yōu)楦弋a(chǎn)酶菌株的方法：物理誘變育種化學(xué)誘變育種基因工程構(gòu)建1.優(yōu)良菌種的條件繁殖快、產(chǎn)酶量高、酶的性質(zhì)符合使用要求，而且最好能產(chǎn)生分泌到胞外的酶，產(chǎn)生的酶容易別離純化。菌種不易變異退化，產(chǎn)酶性能穩(wěn)定，不易受噬菌體的感染侵襲易于培養(yǎng)，能夠利用廉價的原料進(jìn)行酶的生產(chǎn)，并且發(fā)酵周期短。菌種不是致病菌，在系統(tǒng)發(fā)育上與病原體無關(guān)，不產(chǎn)生有毒物質(zhì)和其他生理活性物質(zhì)。不產(chǎn)或盡量少產(chǎn)蛋白酶。三、酶的生產(chǎn)菌2.生產(chǎn)菌的來源a、菌種保藏機(jī)構(gòu)和有關(guān)研究部門獲得；b、大量要從自然界中別離篩選；自然界是產(chǎn)酶菌種的主要來源，土壤、深海、溫泉、火山、森林等都是菌種采集地。篩選產(chǎn)酶菌的方法：采集、菌種的別離初篩、純化、復(fù)篩和生產(chǎn)性能檢定等。菌種改進(jìn)的途徑：應(yīng)用遺傳學(xué)原理進(jìn)行基因突變、基因轉(zhuǎn)移和基因克隆。目前常用的產(chǎn)酶微生物及所產(chǎn)生的酶四、酶在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用1、在疾病診斷方面的應(yīng)用葡萄糖氧化酶----葡萄糖酸和過氧化氫----過氧化氫酶---水和原子氧-----無色的化合物氧化成有色的化合物

2、在疾病治療方面的應(yīng)用溶菌酶--分解病原菌的細(xì)胞壁--抗菌和消炎作用；尿激酶；SOD

3、在藥物生產(chǎn)方面的應(yīng)用：青霉素酰化酶4、在分析檢測方面的應(yīng)用：多酚氧化酶傳感器

第二節(jié)酶和細(xì)胞固定化酶直接參加至溶液中，酶自身的空間結(jié)構(gòu)不發(fā)生改變，保持自己的生物特性。優(yōu)點(diǎn)：酶解效率高、使用比較方便，特別是在大批量樣品處理時。缺點(diǎn)：不能重復(fù)使用、自身酶解、壽命短自由酶(FreeEnzyme)第二節(jié)酶和細(xì)胞固定化一、固定化酶的制備⒈固定化酶〔immobilizedenzyme〕：指限制或固定于特定間位置的酶，具體來說，是指經(jīng)物理或化學(xué)方法處理，使酶變成不易隨水流失即運(yùn)動受到限制，而又能發(fā)揮催化作用的酶制劑。〔細(xì)胞固定化、固定化細(xì)胞〕水溶性酶水不溶性載體固定化技術(shù)固定化酶（水不溶性酶）⒉固定化酶的特點(diǎn)具有生物催化劑及固相催化劑的功能?！?〕可以屢次使用，酶的穩(wěn)定性提高；〔2〕反響后，酶與底物和產(chǎn)物易于分開，產(chǎn)物中無殘留酶，易于純化?！?〕反響條件易于控制，可實現(xiàn)轉(zhuǎn)化反響的連續(xù)化和自動控制；〔4〕酶的利用率高，單位酶催化的底物量增加，用酶量少；〔5〕比水溶性酶更適合于多酶反響。優(yōu)點(diǎn)固定化酶的缺點(diǎn)：(1)酶固定化時酶的活力有所損失。同時也增加了固定化的本錢，使工廠開始投資大。(2)比較適應(yīng)水溶性底物和小分子底物。(3)與完整細(xì)胞比較，不適于多酶反響，特別是需要輔因子的反響，同時對胞內(nèi)酶需經(jīng)別離后才能固定化。酶和細(xì)胞固定化：定義:通過載體等將酶限制或固定于特定的空間位置，使酶變成不易隨水流失即運(yùn)動受到限制，而又能發(fā)揮催化作用的酶制劑。固定化方法：1.載體結(jié)合法2.交聯(lián)法3.包埋法4.選擇性熱變性法⒊酶和細(xì)胞固定化方法

酶和細(xì)胞固定化方法

載體結(jié)合法交聯(lián)法包埋法

網(wǎng)格型微囊型物理吸附法離子結(jié)合法共價結(jié)合法熱處理〔細(xì)胞〕⒊酶和細(xì)胞的固定化方法〔1〕載體結(jié)合法：將酶結(jié)合于不溶性載體上的固定化方法。A、物理吸附法：用物理方法將酶吸附于不溶性載體上的固定化方法。優(yōu)點(diǎn)：操作簡單，可選用不同電荷和不同形狀的載體，有可能固定化和純化過程同時實現(xiàn)，酶失活后載體仍可再生。缺點(diǎn)：最適吸附酶量無規(guī)律可循，吸附量與酶活力不一定呈平行關(guān)系，酶與載體結(jié)合力不強(qiáng)，酶易于脫落，導(dǎo)致酶活下降并污染產(chǎn)物。B、離子結(jié)合法：

酶通過離子鍵結(jié)合于具有離子交換基的水不溶性載體上。優(yōu)點(diǎn)：操作簡單，處理條件溫和，酶的高級結(jié)構(gòu)和活性中心的氨基酸殘基不易被破壞。缺點(diǎn)：載體和酶的結(jié)合力弱，易受緩沖液種類或pH的影響，離子強(qiáng)度高時，酶易脫落。⒊酶和細(xì)胞的固定化方法C、共價結(jié)合法：酶以共價鍵結(jié)合于載體上。即將酶分子上非活性部位功能團(tuán)與載體外表反響基團(tuán)進(jìn)行共價結(jié)合的方法。優(yōu)點(diǎn)：酶與載體結(jié)合牢固，穩(wěn)定性好，不易脫落。缺點(diǎn)：載體要活化，反響條件苛刻，操作復(fù)雜，反響條件劇烈，酶易失活和產(chǎn)生空間位阻效應(yīng)。⒊酶和細(xì)胞的固定化方法〔2〕交聯(lián)法：用雙功能或多功能試劑使酶與酶或細(xì)胞與細(xì)胞之間交聯(lián)的方法。分為：交聯(lián)酶法、酶與輔助蛋白交聯(lián)法、吸附交聯(lián)法和載體交聯(lián)法。常用的交聯(lián)劑：戊二醛、雙重氮聯(lián)苯胺-2、2-二磺酸、1,5-二氟-2,4-二硝基苯?！?〕包埋法：A、網(wǎng)格型：將酶或細(xì)胞包埋在高分子凝膠細(xì)微網(wǎng)格中。常用合成高分子化合物有聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、光敏樹脂。天然高分子化合物有淀粉、明膠、膠原、海藻膠、角叉菜膠。多用于固定化細(xì)胞。⒊酶和細(xì)胞的固定化方法B、微囊型：將酶或細(xì)胞包埋在高分子半透膜中。通常為直徑幾微米到幾百微米的球狀體。顆粒比網(wǎng)格型要小得多，比較有利于底物與產(chǎn)物的擴(kuò)散，但反響條件要求高，制備本錢也高?！?〕選擇性熱變性法：將細(xì)胞在適當(dāng)溫度下處理使細(xì)胞膜蛋白變性但不使酶變性而使酶固定于細(xì)胞內(nèi)的方法。此法專用于細(xì)胞固定化。

⒊酶和細(xì)胞的固定化方法⑴載體結(jié)合法①物理吸附法②離子結(jié)合法③共價結(jié)合法⑵載體結(jié)合法⑶包埋法①網(wǎng)格型②微囊型⑷選擇性熱變性法方法總結(jié)方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)吸附法制作條件溫和、簡便、成本低、載體再生、可反復(fù)使用結(jié)合力弱，對pH、離子強(qiáng)度、溫度等因素敏感，酶易脫落，酶的裝載容量較小共價法載體與偶聯(lián)方法可選擇性大；酶的結(jié)合力強(qiáng)，非常穩(wěn)定偶聯(lián)條件激烈，易引起酶失活；成本高，某些偶聯(lián)試劑有一定毒性交聯(lián)法可用的交聯(lián)試劑多，技術(shù)簡易，酶的結(jié)合力強(qiáng)，穩(wěn)定性高交聯(lián)條件激烈，機(jī)械性能差包埋法包埋材料、包埋方法可選余地大，固定化酶的使用面廣，包埋條件溫和僅可用于低分子量的底物，不適用于柱系統(tǒng)，常有擴(kuò)散限制問題各種酶固定化方法的比較酶的固定化方法圖7－11酶分子之間共價交聯(lián)和與水不溶性載體共價偶聯(lián)酶分子；〔a〕酶分子之間用雙功能基團(tuán)的化學(xué)交聯(lián)試劑相互交聯(lián)成水不溶性的固定化酶；〔b〕酶分子被偶聯(lián)到水不溶性載體上形成水不溶性的固定化酶膠格包埋法首先被采用的膠格包埋法是：固定化胰蛋白酶木瓜蛋白酶

－淀粉酶Enzyme+N,N-甲叉雙丙稀酰胺,丙稀酰胺引發(fā)劑－－inactiationMasaruKato,etal.Anal.Chem.2005,77,1813-1818CoatingoftheSilicaMonolithwithTrypsin-EncapsulatedGel.SynthesizesilicamonolithsMixwithtrypsinandafullyorpartiallyhydrolyzedsilane,SiOH4-n(OMe)n.包埋法(Entrapment)4、酶和細(xì)胞的固定化載體〔1〕吸附載體：無機(jī)物和有機(jī)物，見P224表6-1。〔2〕包埋載體：卡拉膠、海藻膠〔3〕共價結(jié)合載體：纖維素、瓊脂、瓊脂糖。載體應(yīng)具備的條件：〔1〕固定化過程中不引起酶變性；〔2〕對酸堿有一定的耐受性；〔3〕有一定的機(jī)械強(qiáng)度；〔4〕有一定的親水性和穩(wěn)定性；〔5〕有一定的疏松網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，顆粒均勻；〔6〕共價結(jié)合時有可活化基團(tuán)；〔7〕有耐受酶和微生物細(xì)胞的能力：〔8〕廉價易得。5、固定化酶的制備技術(shù)

〔1〕吸附法制備技術(shù)：將酶的水溶液與具有高度吸附能力的載體混合，然后洗去雜質(zhì)和未吸附的酶即得固定化酶?！?〕包埋法制備技術(shù)：凝膠包埋：先將凝膠材料與水混合，加熱使之溶解，再降至其凝固點(diǎn)以下的溫度，然后假設(shè)預(yù)保穩(wěn)的酶液，混合均勻，最后冷卻凝固成型和破碎即成固定化酶。

5、固定化酶的制備技術(shù)

微囊化包埋：將酶定位于具有半透膜的微小囊內(nèi)。半透膜厚約20nm，膜孔徑40nm,其外表積與體積比很大，包埋酶量也多。〔3〕交聯(lián)法制備技術(shù)：向酶液中參加多功能試劑，在一定的條件下使酶分子內(nèi)或酶分子間彼此連接成網(wǎng)格人結(jié)構(gòu)而形成固定化酶。反響速度與酶的濃度、試劑的濃度、PH、離子強(qiáng)度、溫度和反響時間有關(guān)。如：0.2%的木瓜蛋白酶和0.3%的戊二醛在，0°C，24h即完成反響。酶和細(xì)胞固定化模式

二、固定化細(xì)胞的制備

⒈固定化細(xì)胞的定義將細(xì)胞限制或定位于特定空間位置的方法稱為細(xì)胞固定化技術(shù)。被限制或定位于特定空間位置的細(xì)胞稱為固定化細(xì)胞。⒉固定化細(xì)胞的特點(diǎn)有細(xì)胞特性，生物催化劑功能，固相催化劑特點(diǎn)。①無須進(jìn)行酶的別離純化②保持酶的原始狀態(tài)，酶回收率高③比固定化酶穩(wěn)定性高④細(xì)胞內(nèi)酶附助因子可再生⑤細(xì)胞本身含多酶體系⑥抗污染能力強(qiáng)優(yōu)點(diǎn)固定化細(xì)胞的缺點(diǎn)：(1)必須保持菌體的完整，防止菌體自溶，否那么，將影響產(chǎn)品純度。(2)必須防止細(xì)胞內(nèi)蛋白酶對所需酶的分解，同時，需抑制胞內(nèi)其他酶的活性止副產(chǎn)物的形成。(3)細(xì)胞膜、壁會阻礙底物滲透和擴(kuò)散。⒊固定化細(xì)胞的制備技術(shù)⑴載體結(jié)合法

是將細(xì)胞懸液直接與水不溶性的載體相結(jié)合的固定化方法。

載體：主要為陰離子交換樹脂、陰離子交換纖維素、聚氯乙烯。

優(yōu)點(diǎn)：操作簡單，符合細(xì)胞的生理條件，不影響細(xì)胞的生長及酶活性。缺點(diǎn)：吸附容量小結(jié)合強(qiáng)度低。⑵包埋法將細(xì)胞定位于凝膠網(wǎng)格內(nèi)的技術(shù)。與包埋酶法相同。⑶交聯(lián)法

用多功能試劑對細(xì)胞進(jìn)行交聯(lián)的固定化方法。交聯(lián)劑戊二醛等對細(xì)胞有毒性，很少用。⑷無載體法

靠細(xì)胞自身的絮凝作用制備固定化細(xì)胞的技術(shù)。通過助凝劑或選擇性熱變性的方法實現(xiàn)細(xì)胞的固定化。三、固定化方法與載體的選擇依據(jù)⒈固定化方法的選擇⑴固定化酶應(yīng)用的平安性：按照藥物和食品檢驗標(biāo)準(zhǔn)檢查。試劑是否有毒性和殘留。盡可能選擇無毒性試劑。⑵固定化酶在操作中的穩(wěn)定性：在選擇固定化方法時要求固定化酶在操作過程中十分穩(wěn)定，能長期反復(fù)使用，在經(jīng)濟(jì)上有極強(qiáng)的競爭力。⑶固定化的本錢：包括酶、載體、試劑的費(fèi)用，也包括水、電、氣、設(shè)備和勞務(wù)投資等。⒉載體的選擇：最好選擇工業(yè)化生產(chǎn)中已大量應(yīng)用的廉價材料為載體。四、固定化酶的形狀與性質(zhì)⒈固定化酶的形狀⑴顆粒狀固定化酶：方法簡單，比外表積大，轉(zhuǎn)化效率高，適用各種反響器。如酵母酶銖。⑵纖維狀固定化酶：比外表積大，轉(zhuǎn)化效率高，但只適用于填充床反響器。⑶膜狀固定化酶：通過共價結(jié)合的方法將酶偶聯(lián)在濾膜上。酶膜比外表積大，滲透阻力小，可用于酶電極，破碎后也可用于填充床。⑷管狀固定化酶：酶管的機(jī)械強(qiáng)度大，切短后可用于填充床反響器，也可組裝成列管式反響器。⒉固定化酶的性質(zhì)〔1〕酶活力的變化：活力大都下降。主要是酶活性中心的重要氨基酸與載體發(fā)生結(jié)合，酶的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變化或酶與底物結(jié)合時存在空間位阻效應(yīng)?！?〕酶穩(wěn)定性的變化：對溫度、pH、蛋白酶變性劑和抑制劑的耐受程度。穩(wěn)定性提高，有效壽命延長。A、操作穩(wěn)定性：能否實際應(yīng)用的關(guān)鍵因素，半衰期到達(dá)1個月以上時，即具有工業(yè)應(yīng)用價值。B、貯藏穩(wěn)定性：一般不能長期貯存。C、熱穩(wěn)定性：熱穩(wěn)定性越高，工業(yè)化意義越大。熱穩(wěn)定性高可以提高反響溫度和反響速度，提高效率。D、對蛋白酶的穩(wěn)定性：蛋白酶的耐受力有所提高。原因是由于空間位阻效應(yīng)使蛋白酶不能進(jìn)入固定化酶內(nèi)部。〔3〕酶學(xué)特性的變化A、底物專一性：對底物的專一性下降。B、最適pH：最適pH可能變大，也可能變小。C、最適溫度：一般升高。原因是固定化后空間結(jié)構(gòu)更為穩(wěn)定。D、米氏常數(shù)(Km)：Km值均發(fā)生變化，有的增加很小，有的增加很大，但不會變小。E、最大反響速度〔Vm〕：變化很小或不變。定義：以酶或固定化酶作為催化劑進(jìn)行酶促反響的裝置稱為酶反響器(Enzymereactor)。作用：以盡可能低的本錢，按一定的速度由規(guī)定的反響物制備特定的產(chǎn)物。與化學(xué)反響器相比：在低溫、低壓下發(fā)揮作用，反響時的耗能和產(chǎn)能較少。與發(fā)酵反響器相比：不表現(xiàn)自催化方式〔即細(xì)胞的連續(xù)再生〕。第三節(jié)固定化酶和固定化

細(xì)胞的反響器一、反響器的類型和特點(diǎn)〔一〕攪拌罐型〔StirredTankReacter,STR〕由反響罐、攪拌器和保溫裝置組成。1.分類：1〕分批攪拌罐式反響器(BatchStirredTankReactor,BSTR)適用的酶：游離酶、固定化酶2〕連續(xù)流攪拌罐反響器(ContinuousFlowStirredTankReactor,CSTR)適用的酶：固定化酶〔二〕固定床型〔也稱填充床，PackedBedReactor,PBR〕把顆粒狀或片狀等固定化酶填充于固定床內(nèi)，底物按一定方向以恒定速度通過反響床?！踩沉骰残?FludizedBedReactor,FBR)適用于：固定化酶。各種反響器的示意圖一、酶化學(xué)修飾的概念酶的化學(xué)修飾〔chemicalmodification〕：通過化學(xué)基團(tuán)的引入或除去，使蛋白質(zhì)共價結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。第四節(jié)酶的化學(xué)修飾二、酶化學(xué)修飾的目的1.研究酶的結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。〔50年代末〕2.人為改變天然酶的某些性質(zhì)，擴(kuò)大酶的應(yīng)用范圍?！?0年代末之后〕1〕提高酶的生物活性〔酶活力〕。2〕增強(qiáng)酶的穩(wěn)定性〔熱穩(wěn)定性、體內(nèi)半衰期〕。3〕消除抗原性〔針對特異性反響降低生物識別能力〕。4〕產(chǎn)生新的催化能力。三、酶化學(xué)修飾的種類酶的外表化學(xué)修飾〔一〕大分子修飾〔大分子結(jié)合修飾〕是目前應(yīng)用最廣的酶分子修飾方法。1.定義：利用水溶性大分子與酶結(jié)合，使酶的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生某些精細(xì)的改變，從而改變酶的特性與功能的方法。2.修飾劑：聚乙二醇〔PEG〕、右旋糖酐〔dextran〕、肝素〔heparin〕、蔗糖聚合物〔Ficoll〕等。修飾方法：修飾前活化，然后在一定條件下與酶分子共價結(jié)合?！捕承》肿有揎棥裁傅鞍讉?cè)鏈基團(tuán)修飾〕定義：通過選擇性的試劑或親和標(biāo)記試劑與酶分子側(cè)鏈上特定的功能基團(tuán)發(fā)生化學(xué)反響。側(cè)鏈基團(tuán)：組成蛋白質(zhì)氨基酸殘基上的功能團(tuán)。主要有：氨基、羧基、胍基、巰基、酚基、咪唑基。側(cè)鏈基團(tuán)修飾劑：采用的各種小分子化合物。20種不同氨基酸的側(cè)鏈基團(tuán)中只有極性氨基酸的側(cè)鏈易被修飾，它們一般具有親核性?！踩辰宦?lián)修飾〔交聯(lián)法〕用雙功能基團(tuán)試劑(如戊二醛)，與酶分子內(nèi)不同肽鏈局部共價交聯(lián)，使酶分子空間構(gòu)象更加穩(wěn)定?！菜摹彻潭ɑ揎棥补矁r偶聯(lián)法〕通過酶外表的酸性或堿性殘基，將酶共價連接到惰性載體上，由于酶所處的微環(huán)境發(fā)生改變，使酶的最適pH、最適溫度和穩(wěn)定性發(fā)生改變。酶分子內(nèi)部修飾1、蛋白主鏈修飾〔肽鏈有限水解修飾〕蛋白主鏈修飾采用酶法〔用專一性較強(qiáng)的蛋白酶或肽酶為修飾劑〕。2、金屬離子置換修飾改變酶分子中所含的金屬離子，使酶的特性和功能發(fā)生改變的方法。

3、氨基酸置換修飾將肽鏈上的某一個氨基酸換成另一個氨基酸，引起酶蛋白空間構(gòu)象的改變，從而改變酶的某些特性和功能的方法。通過兩個途徑實現(xiàn)：化學(xué)修飾法：由于