實(shí)驗(yàn)脯氨酸含量電導(dǎo)率的測定

實(shí)驗(yàn)脯氨酸含量電導(dǎo)率的測定第一頁，共十五頁，2022年，8月28日植物對脅迫的響應(yīng)機(jī)制滲透調(diào)節(jié)（脯氨酸、甘氨酸甜菜堿、可溶性糖）活性氧代謝（抗氧化酶、抗氧化小分子）脅迫蛋白（熱激蛋白、抗凍蛋白等）離子平衡和區(qū)域化（鹽脅迫）水通道蛋白（鹽脅迫）類黃酮、苯丙氨酸（紫外脅迫）第二頁，共十五頁，2022年，8月28日脯氨酸含量的測定第三頁，共十五頁，2022年，8月28日前言

逆境條件下（干旱、鹽堿、熱、冷害、凍害）,植物體內(nèi)脯氨酸（proline,Pro）含量會顯著增加，并且積累指數(shù)與植物的抗逆性有關(guān)，因此脯氨酸可作為植物抗逆性的一項(xiàng)生化指標(biāo)。第四頁，共十五頁，2022年，8月28日

酸性條件下,茚三酮和脯氨酸反應(yīng)生成穩(wěn)定的紅色化合物,產(chǎn)物在520nm波長下具有最大吸收峰。用磺基水楊酸提取植物樣品時,脯氨酸便游離于磺基水楊酸的溶液中,然后用酸性茚三酮加熱處理后，溶液即成紅色,再用甲苯萃取，則色素全部轉(zhuǎn)移至甲苯中,顏色的深淺即表示脯氨酸含量的高低。實(shí)驗(yàn)原理第五頁，共十五頁，2022年，8月28日材料、儀器及試劑（一）、實(shí)驗(yàn)材料小麥幼苗：對照、100mM、200mMNaCl處理48h；5%、15%PEG-6000處理48h（二）、儀器設(shè)備天平，燒杯，分光光度計，研缽，容量瓶，具塞試管，移液管，膠頭滴管，水浴鍋第六頁，共十五頁，2022年，8月28日主要試劑1.3%磺基水楊酸；2.冰醋酸；3.甲苯；4.2.5%酸性茚三酮溶液（60ml冰醋酸、16.4ml磷酸加蒸餾水定容至100ml，再加入2.5g茚三酮，溶解后避光保存）；5.脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)母液：精確稱取25mg脯氨酸，倒入小燒杯內(nèi)，用少量蒸餾水溶解，然后倒入500ml容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，此標(biāo)準(zhǔn)液中脯氨酸濃度50μg/ml。第七頁，共十五頁，2022年，8月28日方法及步驟（一）樣品的測定

1．稱取不同處理的小麥葉片各0.5g，于2.5ml3%磺基水楊酸試管中，沸水浴中提取10min。

2．吸取1ml上清于另一試管中，加入1ml水、1ml冰乙酸、2ml2.5％的酸性茚三酮，混合液于沸水中顯色30min。第八頁，共十五頁，2022年，8月28日3.冷卻后加入4ml甲苯，搖蕩30S，萃取完全后用吸管輕輕吸取上層紅色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯為空白對照，在520nm比色。

4.用0.5-5μg/mlL-脯氨酸作標(biāo)準(zhǔn)曲線。第九頁，共十五頁，2022年，8月28日（二）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制1．標(biāo)準(zhǔn)液中脯氨酸濃度50μg/ml。2．取6個50ml容量瓶，分別加入脯氨酸原液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml，用蒸餾水定容至刻度并搖勻，各瓶的脯氨酸濃度分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0μg/ml。第十頁，共十五頁，2022年，8月28日3．分別吸取1ml系列標(biāo)準(zhǔn)濃度的脯氨酸溶液于6個試管中,加入1ml水、1ml冰乙酸、2ml2.5％的酸性茚三酮,于沸水浴中加熱30min。4．冷卻后準(zhǔn)確加入4ml甲苯,振蕩30S,靜置片刻,使色素全部轉(zhuǎn)至甲苯溶液。5．輕輕吸取各管上層甲苯溶液至比色杯中,以甲苯為空白對照,于520nm進(jìn)行比色。第十一頁，共十五頁，2022年，8月28日五、結(jié)果計算根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出脯氨酸的濃度,然后換算出樣品中脯氨酸的含量（μg脯氨酸/gFW）。脯氨酸含量（μg.g-1）＝c×(v／a)／wC為由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得脯氨酸含量μg；V為提取液總體積ml;a為測定液體積ml；W為樣品質(zhì)量g第十二頁，共十五頁，2022年，8月28日逆境脅迫對植物質(zhì)膜透性的影響

電導(dǎo)率法第十三頁，共十五頁，2022年，8月28日原理植物細(xì)胞膜對維持細(xì)胞的微環(huán)境和正常的代謝起著重要的作用。在正常情況下，細(xì)胞膜對物質(zhì)具有選擇透性能力。當(dāng)植物受到逆境影響時，如高溫或低溫，干旱、鹽漬、病原菌侵染后，細(xì)胞膜遭到破壞，膜透性增大，從而使細(xì)胞內(nèi)的電解質(zhì)外滲，電導(dǎo)率增大。膜透性增大的程度與逆境脅迫強(qiáng)度有關(guān)，也與植物抗逆性的強(qiáng)弱有關(guān)。第十四頁，共十五頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)步驟1、取0.2g對照和鹽或PEG6000處理的小麥葉片，切成約1cm小段；2、用雙蒸水沖洗3遍以除去表面粘附的電解質(zhì)；3、加10ml雙蒸水，25℃振蕩溫育1小時，期間經(jīng)常搖動，測定此時的電導(dǎo)率為C1；4、將盛有根的試管100℃煮沸15min，冷卻到室溫后，測定此時的電導(dǎo)率為C2；