湖北省恩施州清江外國語學校2023年高考生物倒計時模擬卷含解析

2023年高考生物模擬試卷注意事項：1．答題前，考生先將自己的姓名、準考證號填寫清楚，將條形碼準確粘貼在考生信息條形碼粘貼區(qū)。2．選擇題必須使用2B鉛筆填涂；非選擇題必須使用0．5毫米黑色字跡的簽字筆書寫，字體工整、筆跡清楚。3．請按照題號順序在各題目的答題區(qū)域內作答，超出答題區(qū)域書寫的答案無效；在草稿紙、試題卷上答題無效。4．保持卡面清潔，不要折疊，不要弄破、弄皺，不準使用涂改液、修正帶、刮紙刀。一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1．河豚毒素（TTX）是一種離子通道阻斷劑。用TTX處理突觸前神經(jīng)纖維，然后每隔5min對突觸前神經(jīng)纖維施加一次刺激，分別測量突觸前和突觸后神經(jīng)元的電位變化，結果如圖。河豚毒素的作用機理可能為（）A．TTX作用于鈉離子通道，阻斷突觸前神經(jīng)元Na+內流，抑制突觸前膜遞質釋放B．TTX作用于鈉離子通道，阻斷突觸后神經(jīng)元Na+內流，抑制神經(jīng)遞質對突觸后膜的作用C．TTX作用于鉀離子通道，阻斷突觸前神經(jīng)元K+外流，抑制突觸前膜遞質釋放D．TTX作用于鉀離子通道，阻斷突觸后神經(jīng)元K+外流，抑制神經(jīng)遞質對突觸后膜的作用2．下列有關科學史的敘述正確的是（）A．歐文頓提出：生物膜是由脂質和蛋白質組成的B．斯他林和貝利斯通過實驗證明小腸黏膜產生促胰液素并進入血液，隨血液到達胰腺，引起胰液的分泌C．卡爾文等用藍藻做實驗，探明了CO2中碳在光合作用中轉換成有機物中碳的途徑D．孟德爾用豌豆做實驗發(fā)現(xiàn)了兩大遺傳定律，提出性狀是由基因控制的3．關于細胞的生命歷程的敘述，正確的是（）A．楊樹根尖分生區(qū)細胞在分裂間期進行中心體和DNA的復制B．能合成ATP的細胞不一定發(fā)生了分化C．分泌旺盛的唾液腺細胞中不存在與細胞凋亡有關的基因D．細胞衰老導致細胞彼此之間的黏著性降低，易分散轉移4．下列有關實驗技術的敘述，錯誤的是（）A．用健那綠染色法觀察線粒體時，需保證細胞處于生活狀態(tài)B．證明光合作用產物中的氧氣來自水時利用了同位素標記法C．分離細胞中的各種細胞器常用差速離心法D．酶的保存應在最適溫度和最適pH條件下5．皮膚感受器接受刺激產生的興奮沿反射弧的傳入神經(jīng)纖維傳導，下列相關敘述正確的是（）A．興奮在傳入神經(jīng)纖維上的傳導是雙向的B．興奮部位膜內側的Na+濃度低于膜外側C．興奮在神經(jīng)纖維上以化學信號的形式傳導D．興奮在神經(jīng)纖維上的傳導不消耗能量6．離子泵是一種具有ATP水解酶活性的載體蛋白，能利用水解ATP釋放的能量跨膜運輸離子。下列敘述正確的是A．動物一氧化碳中毒會降低離子泵跨膜運輸離子的速率B．離子通過離子泵的跨膜運輸是順著濃度梯度進行的C．離子通過離子泵的跨膜運輸屬于協(xié)助擴散D．加入蛋白質變性劑會提高離子泵跨膜運輸離子的速率二、綜合題：本大題共4小題7．（9分）圖一為適宜情況下某植物幼苗葉綠體中某兩種化合物相對含量的變化。據(jù)所學知識回答下列問題。（1）植物光合作用中ATP的生成場所是_____________，有氧呼吸中[H]的生成場所是_____________、_____________。（2）圖一中，若T1時突然增加CO2濃度，則短時間內物質A、B相對含量均增加，A、B分別是指_____________、___________（[H]、ADP、C3或C5）；若T1時突然降低光照強度，則短時間內物質A、B相對含量也會增加，此時A、B分別是指_____________、_____________（[H]、ADP、C3或C5）。（3）某研究小組同學繪制的該植物在停止供水和恢復供水條件下，氣孔開度（氣孔開放程度）與光合速率的變化情況如圖二所示，停止供水時，氣孔開度下降直接導致光合作用中_____________反應受阻，使得光合速率迅速下降；停止供水一段時間后，葉片發(fā)黃，原因是_____________。8．（10分）生產中可利用植物細胞的全能性進行植物組織培養(yǎng)，圖是該技術的流程圖，據(jù)圖回答：（1）細胞全能性是指___________________________。（2）圖①中切下植物組織后首先要進行_______________。取材時一般需要切取含有_______________的部分，原因是這部分_____________________________________________。（3）圖中長成完整植株的過程，常分為兩種途徑：一是誘導幼苗先生根、后長芽，二是同時誘導幼苗生根、長芽。兩種途徑的分化培養(yǎng)基中，最主要的區(qū)別是______________________________的成分及比例不同。由“①”至“長成幼苗”的過程，又稱為細胞的_____________________________________________過程。9．（10分）擬南芥種子萌發(fā)時，下胚軸頂端形成彎鉤（頂勾，如圖1），在破土而出時起到保護子葉與頂端分生組織的作用。為研究生長素（IAA）與頂端彎曲的關系，科研人員進行了相關實驗。（1）擬南芥種子萌發(fā)時，頂端分生組織產生的IAA運輸至頂勾處，促進細胞的_________生長。由于IAA的作用具有_________性，低濃度促進生長，高濃度抑制生長，頂勾兩側細胞生長狀況不同，因而彎曲度發(fā)生改變。（2）科研人員發(fā)現(xiàn)一株TMK基因缺失的突變體（tmk突變體），用_________法將含TMK基因的T-DNA轉入tmk突變體中，分別測定三種不同擬南芥種子萌發(fā)時，頂勾處的彎曲度，得到圖2所示結果。實驗結果顯示_________。（3）科研人員進一步測定了三種植株頂勾彎曲處內外側（如圖3）的細胞長度，結果如圖4。據(jù)實驗結果推測，tmk突變體頂勾彎曲度改變的原因是其頂勾彎曲處_________。（4）科研人員推測，不同濃度的IAA可能通過TMK蛋白調控細胞生長（機理見圖5），在IAA濃度較高時，tmk突變體無法剪切TMK蛋白。一種從分子水平證實這一推測的思路是：測定并比較_________植株的頂勾彎曲處_________（填內側或外側）細胞的_________量。10．（10分）自然界里有多種微生物，將其進行合理的篩選、培養(yǎng)和應用，能給醫(yī)藥和化工等生產領域帶來巨大經(jīng)濟效益?；卮鹣铝袉栴}。（1）對培養(yǎng)基進行滅菌時，多采取____________法，而對接種環(huán)或涂布器滅菌時則用____________法，若要將微生物采用平板劃線法進行分離操作，在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)進行了5次劃線，則需要對接種環(huán)灼燒____________次。平板劃線在做第二次及其后的劃線操作時，要從上次劃線的____________開始劃線，最后一次劃的線不能與第一次劃的線____________。（2）將接種后的固體培養(yǎng)基和一個未接種的固體培養(yǎng)基放入恒溫箱中____________培養(yǎng)，以減少培養(yǎng)基中的水分揮發(fā)。其中，培養(yǎng)未接種的固體培養(yǎng)基是為了____________。長期保存菌種時，應將培養(yǎng)的菌液與____________充分混勻后，放在-20℃的冷凍箱中保存。（3）甲、乙兩組同學用稀釋涂布平板法測定某種微生物的數(shù)量，在同一稀釋倍數(shù)下每隔一段時間記錄數(shù)據(jù)（統(tǒng)計時間內微生物總數(shù)小于環(huán)境容納量），得到以下結果：培養(yǎng)時間(小時)24487296甲組菌落均值(個)18253632乙組菌落均值(個)20283832計數(shù)時最好取培養(yǎng)____________小時記錄的菌落數(shù)作為實驗結果，一方面是由于培養(yǎng)時間較短，會遺漏菌落數(shù)目，另一方面是由于____________。11．（15分）某植物的性別由兩對獨立遺傳的基因（T/t和D/d）控制，T_dd為雌株，ttD-為雄株，T-D-、ttdd為雌雄同株。葉片顏色深綠和淺綠是由另一對獨立遺傳的等位基因控制。研究人員用深綠雄株個體和淺綠雌株個體雜交，所得后代（F1）中，深綠雌雄同株個體和深綠雄株個體各占一半?；卮鹣铝袉栴}。（1）葉片顏色中顯性性狀是_。兩個親本中，雜合子親本是_。（2）單株隔離種植F1（只允許同株傳粉），所得后代（F2）中基因型有_（填數(shù)字）種，其中淺綠雌株個體所占比例是_。（3）甲、乙兩學習小組分別選用TtDd與ttdd雜交、TtDd自交的方法驗證兩對基因（T/t和D/d）遵循自由組合定律。若甲組的子代的性狀及比例為_，則能證明兩對基因遵循自由組合定律。同學們討論后認為，乙組所選方法優(yōu)于甲組，其理由是_。

參考答案一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1、A【解析】

適宜刺激使突觸前神經(jīng)元產生興奮，由突觸前膜釋放神經(jīng)遞質，作用于突觸后膜，引起突觸后膜發(fā)生電位變化。若突觸前膜不能釋放神經(jīng)遞質，則興奮不能傳遞到突觸后膜?！驹斀狻恳罁?jù)圖示可知，突觸后神經(jīng)元的興奮主要取決于突觸前神經(jīng)元的興奮，隨著刺激次數(shù)的增加，突觸前神經(jīng)元興奮明顯減弱，突觸后神經(jīng)元興奮也減弱甚至不興奮，主要原因是TTX作用于鈉離子通道，阻斷了Na+內流，導致突觸前動作電位變化明顯減弱，進而導致突觸前膜遞質釋放減少或不能釋放，使得突觸后膜難以興奮。綜上分析，A正確，BCD錯誤。故選A。2、B【解析】

19世紀末，歐文頓對細胞膜結構的研究結論是：膜是由脂質構成的。1925年，兩位荷蘭科學家用丙酮從人的紅細胞中提取脂質，在空氣-水界面上鋪成單分子層，測得單分子層的面積恰為紅細胞表面積的2倍，由此得出結論：細胞膜中的脂質分子必然排列為連續(xù)的兩層。1959年，羅伯特森利用電鏡觀察細胞膜的結構提出：所有的生物膜都是由蛋白質-脂質-蛋白質三層結構構成，他把生物膜描述為靜態(tài)的統(tǒng)一結構。1972年桑格和尼克森提出了膜的流動鑲嵌模型?！驹斀狻緼、歐文頓提出：生物膜是由脂質組成的，A錯誤；B、斯他林和貝利斯的實驗證明了胰液的分泌不受神經(jīng)調節(jié)控制，而是在鹽酸的作用下，小腸黏膜產生了一種化學物質（促胰液素）進入血液后，隨血流到達胰腺，引起胰液分泌的化學調節(jié)，B正確；C、卡爾文等用小球藻做實驗，探明了CO2中碳在光合作用中轉換成有機物中碳的途徑，C錯誤；D、孟德爾用豌豆做實驗發(fā)現(xiàn)了兩大遺傳定律，提出性狀是由遺傳因子控制的，D錯誤。故選B。3、B【解析】

1、細胞分化是指在個體發(fā)育中，由一個或一種細胞增殖產生的后代，在形態(tài)，結構和生理功能上發(fā)生穩(wěn)定性差異的過程。細胞分化的實質：基因的選擇性表達。2、細胞凋亡是由基因決定的細胞編程序死亡的過程。細胞凋亡是生物體正常的生命歷程，對生物體是有利的，而且細胞凋亡貫穿于整個生命歷程。3、衰老細胞的特征：（1）細胞內水分減少，細胞萎縮，體積變小，但細胞核體積增大，染色質固縮，染色加深；（2）細胞膜通透性功能改變，物質運輸功能降低；（3）細胞色素隨著細胞衰老逐漸累積；（4）有些酶的活性降低；（5）呼吸速度減慢，新陳代謝減慢。4、癌細胞的主要特征：（1）無限增殖；（2）形態(tài)結構發(fā)生顯著改變；（3）細胞表面發(fā)生變化，細胞膜上的糖蛋白等物質減少，易轉移。【詳解】A、楊樹根尖分生區(qū)細胞沒有中心體，A錯誤；B、細胞中絕大數(shù)需要能量的生命活動都是由ATP直接提供能量的，因此，能合成ATP的細胞不一定發(fā)生了分化，B正確；C、分泌旺盛的唾液腺細胞中存在與細胞凋亡有關的基因，只不過暫時沒有表達，C錯誤；D、細胞癌變導致細胞彼此之間的黏著性降低，易分散轉移，D錯誤。故選B。4、D【解析】

不同細胞器的重量不同，可以用差速離心法分離各種細胞器；健那綠是能使線粒體染成藍綠色的活體染色劑，可以用健那綠染液對線粒體進行染色、觀察；魯賓和卡門采用同位素標記法進行實驗證明光合作用釋放的O2來自水?！驹斀狻緼、健那綠是一種專一性染線粒體的活細胞染料，A正確；B、證明光合作用產生的氧氣來自水的實驗利用了同位素標記法，B正確；C、不同細胞器的重量不同，可以用差速離心法分離各種細胞器，C正確；D、酶應該在低溫條件下保存，D錯誤。故選D。5、B【解析】

神經(jīng)沖動的產生：靜息時，神經(jīng)細胞膜對鉀離子的通透性大，鉀離子大量外流，形成內負外正的靜息電位；受到刺激后，神經(jīng)細胞膜的通透性發(fā)生改變，對鈉離子的通透性增大，鈉離子內流，形成內正外負的動作電位。興奮部位和非興奮部位形成電位差，產生局部電流，興奮傳導的方向與膜內電流方向一致。

2、興奮在神經(jīng)元之間需要通過突觸結構進行傳遞，突觸包括突觸前膜、突觸間隙、突觸后膜，其具體的傳遞過程為：興奮以電流的形式傳導到軸突末梢時，突觸小泡釋放遞質（化學信號），遞質作用于突觸后膜，引起突觸后膜產生膜電位（電信號），從而將興奮傳遞到下一個神經(jīng)元?！驹斀狻緼、在生物體內，機體感受器產生的興奮沿反射弧傳導，即：感受器→傳入神經(jīng)→神經(jīng)中樞→傳出神經(jīng)→效應器，興奮在反射弧中的傳導是單向的，所以在傳入神經(jīng)上也是單向傳導的，A錯誤；B、神經(jīng)纖維靜息時，膜外Na+濃度高于膜內，K+濃度膜內高于膜外，興奮時，膜上的Na+通道開放，Na+內流，形成動作電位，此時膜外Na+濃度仍高于膜內，B正確；C、神經(jīng)纖維興奮部位與未興奮部位之間形成了電勢差，興奮以局部電流的方式沿神經(jīng)纖維傳導，C錯誤；D、興奮在神經(jīng)纖維上的傳導需要消耗能量，D錯誤。故選B?！军c睛】本題考查神經(jīng)沖動的產生和傳導，要求考生識記神經(jīng)沖動的產生過程，掌握神經(jīng)沖動在神經(jīng)纖維上的傳導過程及神經(jīng)沖動在神經(jīng)元之間的傳遞過程，能結合所學的知識準確判斷各選項，屬于考綱識記和理解層次的考查。6、A【解析】

1、小分子物質跨膜運輸?shù)姆绞胶吞攸c：名稱運輸方向載體能量實例自由擴散高濃度→低濃度不需不需水，CO2，O2，甘油，苯、酒精等協(xié)助擴散高濃度→低濃度需要不需紅細胞吸收葡萄糖主動運輸?shù)蜐舛取邼舛刃枰枰∧c絨毛上皮細胞吸收氨基酸，葡萄糖，K+，Na+等2、分析題文：離子通過離子泵的跨膜運輸需要載體和消耗能量，屬于主動運輸。【詳解】A、動物一氧化碳中毒減少能量的供應，進而會降低離子泵跨膜運輸離子的速率，A正確；B、離子通過離子泵的跨膜運輸屬于主動運輸，是逆著濃度階梯進行的，B錯誤；C、離子通過離子泵的跨膜運輸需要載體和消耗能量，屬于主動運輸，C錯誤；

D、離子的跨膜運輸需要載體蛋白，因此加入蛋白質變性劑會降低離子泵跨膜運輸離子的速率，D錯誤。故選A。二、綜合題：本大題共4小題7、葉綠體類囊體薄膜細胞質基質線粒體基質C3ADPADPC3暗葉綠素被分解（或合成速率變慢或停止），類胡蘿卜素的顏色顯露出來【解析】

植物在光照條件下進行光合作用，光合作用分為光反應階段和暗反應階段，光反應階段在葉綠體的類囊體薄膜上進行水的光解，產生ATP和[H]，同時釋放氧氣，ATP和[H]用于暗反應階段C3的還原，細胞的呼吸作用不受光照的限制，有光無光都可以進行，為細胞的各項生命活動提供能量。【詳解】（1）光合作用光反應中，ADP與Pi反應形成ATP的過程發(fā)生在葉綠體類囊體薄膜上，暗反應消耗ATP，發(fā)生的場所是葉綠體基質；有氧呼吸第一階段生成[H]場所為細胞質基質，第二階段生成是[H]場所為線粒體基質。（2）若T1時刻突然升高CO2濃度，CO2固定加快，C3生成增加，短時間內其去路不變，造成C3含量上升，C5含量下降，同時由于C3含量增加，還原加快，ATP消耗增加，ADP生成增多，故A、B分別是C3和ADP；若T1時突然降低光照強度，光反應減弱，生成[H]和ATP減少，ADP消耗下降而含量上升，故A表示ADP；光反應生成的[H]、ATP下降，C3還原下降，短時間內C3生成不變從而積累，故B為C3。（3）停止供水時，氣孔開度下降，植物吸收的CO2量減少，使圖中暗反應過程受阻，導致光合速率迅速下降；停止供水一段時間后，因為缺水，葉綠素的合成速率變慢（或停止或葉綠素被分解），類胡蘿卜素的顏色顯露出來，所以葉片發(fā)黃?！军c睛】本題以圖形為載體，考查了光合作用的影響因素，考查了學生識圖、析圖能力，運用所學知識分析和解決問題的能力，綜合理解能力。影響光合作用的環(huán)境因素有：光照強度、溫度、二氧化碳濃度等，其中光照強度主要影響光反應，二氧化碳濃度主要影響暗反應；影響光合作用的內在因素有：色素的含量、酶的數(shù)量、五碳化合物的含量等。8、已經(jīng)分化的細胞，仍然具有發(fā)育成完整個體的潛能消毒形成層易于誘導形成愈傷組織激素離體培養(yǎng)【解析】

植物組織培養(yǎng)的基本原理是細胞的全能性，離體的植物器官、組織或細胞先脫分化形成愈傷組織，愈傷組織的細胞排列疏松而無規(guī)則，是一種高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細胞；愈傷組織繼續(xù)進行培養(yǎng)，再分化成根或芽等器官，最終發(fā)育成完整的植物體?！驹斀狻浚?）細胞的全能性是指已分化的細胞具有的發(fā)育成完整生物個體的潛能。（2）圖中①中切下來的外植體（離體的植物組織、器官或細胞）需要先進行消毒；取材時一般需要切取含有形成層的部分，因為這部分易于誘導形成愈傷組織。（3）根據(jù)題意分析，植物組織培養(yǎng)的兩種途徑中，一個是先生根、后長芽，一個是同時生根、長芽，兩者主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度配比。由“①”至“長成幼苗”的過程為植物組織培養(yǎng)過程，又稱為細胞離體培養(yǎng)過程?！军c睛】植物組織培養(yǎng)應該注意的問題：（1）無菌：植物組織培養(yǎng)成功的關鍵是避免微生物的污染，所有實驗用具要嚴格滅菌，接種過程進行嚴格的無菌操作。（2）取材：外植體的遺傳特征、取材位置都會影響愈傷組織的再分化能力。（3）營養(yǎng)比：培養(yǎng)基中必須含有植物生長發(fā)育所需要的全部營養(yǎng)物質，其中生長素和細胞分裂素用量的比例對器官的生成起決定作用。（4）光照時期：愈傷組織培養(yǎng)最初避光培養(yǎng)，后期見光培養(yǎng)。（5）培養(yǎng)順序：試管苗培養(yǎng)，要先進行生芽培養(yǎng)，再進行生根培養(yǎng)，試管苗培養(yǎng)要在光照條件下進行。9、伸長兩重農桿菌轉化tmk突變體的頂勾彎曲減小，轉入TMK基因可部分恢復頂勾彎曲內側細胞生長加快tmk突變體和野生型內側TMK蛋白C端量、細胞核內磷酸化蛋白X和促進生長基因的表達【解析】

1、生長素類通常是通過促進細胞的伸長來促進植物生長的，在生產上的應用有促進扦插的枝條生根、促進果實發(fā)育、防止落花落果等。2、赤霉素的生理作用是促進細胞伸長，從而引起莖桿伸長和植物增高，此外它含有防止器官脫落和解除種子、塊莖休眠，促進萌發(fā)等作用。3、生長素的作用表現(xiàn)為兩重性：既能促進生長，也能抑制生長；既能促進發(fā)芽，也能抑制發(fā)芽；既能防止落花落果，也能疏花疏果。生長素所發(fā)揮的作用，因為濃度、植物細胞的成熟情況和器官的種類不同而有較大的差異。【詳解】（1）由分析可知，生長素是通過促進細胞伸長來促進生長的，可推測頂端分生組織產生的IAA運輸至頂勾處，促進細胞的伸長生長。在頂勾處，由于重力的影響，近地側生長素濃度高，遠地側生長素濃度低，由于IAA的作用具有兩重性，低濃度促進生長，高濃度抑制生長，頂勾兩側細胞生長狀況不同，因而彎曲度發(fā)生改變。（2）科研人員發(fā)現(xiàn)一株TMK基因缺失的突變體（tmk突變體），基因工程中將目的基因導入植物細胞通常用農桿菌轉化法實現(xiàn)，故此在這里用農桿菌轉化法將含TMK基因的T-DNA轉入tmk突變體中，然后分別測定三種不同擬南芥種子萌發(fā)時，頂勾處的彎曲度，根據(jù)圖2的結果可知tmk突變體的頂勾彎曲減小，轉入TMK基因可部分恢復頂勾彎曲。（3）圖4的實驗結果表明，轉基因前后頂勾處外側細胞伸長基本沒變化，只是缺失突變體頂勾處內側細胞伸長比轉基因后更快，故此得出結論，tmk突變體頂勾彎曲度改變的原因是其頂勾彎曲處內側細胞生長加快。（4）圖5顯示在IAA濃度較高時，TMK蛋白C端被剪切，然后TMK蛋白C端進入細胞促進了核內蛋白X的磷酸化，進而抑制了促進生長因子的表達，導致細胞伸長生長被抑制，而tmk突變體無法剪切TMK蛋白，故此頂勾內側細胞伸長比野生型快，為了驗證這一推測，需要測定并比較tmk突變體和野生型植株的頂勾彎曲處內側細胞的TMK蛋白C端量、細胞核內磷酸化蛋白X和促進生長基因的表達量，依次來驗證上述推測?！军c睛】能夠結合所學的關于生長素生理作用的知識，利用題中的相關信息進行合理的分析、推理和綜合是解答本題的關鍵！10、高壓蒸汽滅菌灼燒滅菌6末端相連（或相接、相交等意思正確）倒置作為對照組，排除培養(yǎng)基被雜菌污染甘油72培養(yǎng)時間過長，兩個或多個菌落連成一個菌落【解析】

1、微生物培養(yǎng)的關鍵是無菌操作技術，無菌操作過程中的滅菌方法主要有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌法滅菌。高壓蒸汽滅菌適用于對一般培養(yǎng)基和玻璃器皿的滅菌。干熱滅菌適用于空玻璃器皿的滅菌，凡帶有橡膠的物品和培養(yǎng)基，都不能進行干熱滅菌。無菌室緩沖間和接種箱常用紫外線燈作空氣滅菌。微生物接種時的金屬接種工具和試管口可以用灼燒滅菌。2、平板劃線操作的基本步驟是：（一）右手持接種環(huán)，經(jīng)火焰滅菌，待涼后，在火焰旁打開盛有菌液的試管棉塞，并將試管口通過火焰，將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液，沾取一環(huán)菌液，將試管口通過火焰并塞上棉塞。（二）左手斜持瓊脂平板，皿蓋打開一條縫，右手于火焰近處將接種環(huán)迅速伸入平板內，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋，接種環(huán)不應劃破培養(yǎng)基表面。（三）燒灼接種環(huán)，殺滅環(huán)上殘留菌液，待冷卻（是否冷卻，可先在培養(yǎng)基邊緣處試觸，若瓊脂溶化，表示未涼，稍等再試），從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)內劃線，重復以上操作，在第三四五區(qū)內劃線，注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。（四）將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。【詳解】（1）對培養(yǎng)基進行滅菌時，多采取高壓蒸汽滅菌法，而對接種環(huán)或涂布器滅菌時則用灼燒滅菌法。接種環(huán)在每次接種前都要灼燒滅菌，最后一次接種完也要滅菌，所以在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)進行了5次劃線，則需要對接種環(huán)灼燒6次。平板劃線在做第二次及其后的劃線操作時，要從上次劃線的末端開始劃線，使菌體的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終獲得由單個菌體形成的單個菌落。最后一次劃的線不能與第一次劃的線相連。（2）將接種后的固體培養(yǎng)基和一個未接種的固體培養(yǎng)基放入恒溫箱中倒置培養(yǎng)，以減少培養(yǎng)基中的水分揮發(fā)。培養(yǎng)未接種的固體培養(yǎng)基是為了作為對照組，排除培養(yǎng)基被雜菌污染。長期保存