動物細胞培養(yǎng)

關(guān)于動物細胞培養(yǎng)第1頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三動物細胞工程常用的技術(shù)手段動物細胞培養(yǎng)—基礎(chǔ)動物細胞融合生產(chǎn)單克隆抗體核移植納歸題問第2頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三2.2.1動物細胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)第3頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三一、動物細胞培養(yǎng)為什么要進行動物細胞培養(yǎng)？材料一：在治療燒傷病人時，通常是取病人的健康皮膚進行自體移植。對于大面積燒傷的病人，自體健康皮膚非常有限，使用他人皮膚來源又不足，且會產(chǎn)生排斥反應(yīng)。怎樣才能獲得大量的自體健康皮膚呢？材料二：許多動物細胞能分泌蛋白質(zhì)，如抗體等。但是，單個細胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)很少，怎樣才能獲得大量的分泌蛋白呢？境情設(shè)創(chuàng)第4頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三１、什么是動物細胞培養(yǎng)？２、具體培養(yǎng)過程（1）為什么要把動物組織分散成單個細胞？完成44頁兩個問號。（2）什么叫細胞貼壁？什么叫接觸抑制？（3）什么叫原代培養(yǎng)？什么叫傳代培養(yǎng)？（4）總結(jié)出具體的培養(yǎng)過程？習(xí)學(xué)主自任務(wù)：閱讀教材第44-46頁第一段時間：4分鐘問題：第5頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三就是從動物機體中取出相關(guān)組織，將它分散成單個細胞，然后,放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和繁殖。1、概念：一、動物細胞培養(yǎng)納歸題問第6頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三2、培養(yǎng)過程：納歸題問為什么要把動物組織分散成單個細胞？怎樣分散成單個細胞的？完成44頁兩個問號成塊的組織中細胞與細胞靠在一起，彼此限制了細胞的生長和增殖。另外，單個細胞所需的營養(yǎng)容易供應(yīng)，其代謝廢物容易排出。所以分散成單個細胞后培養(yǎng)。第7頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三

用胰蛋白酶分散細胞，說明細胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)。胃蛋白酶作用的適宜pH約為2，當(dāng)pH大于6時，胃蛋白酶就會失去活性。胰蛋白酶作用的適宜環(huán)境pH為7.2～8.4。多數(shù)動物細胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2～7.4，胃蛋白酶在此環(huán)境中沒有活性，而胰蛋白酶在此環(huán)境中活性較高，因此胰蛋白酶適宜用于細胞培養(yǎng)時的消化。

44頁兩個小問題的答案

胰蛋白酶除了可以消化細胞間的蛋白外，長時間的作用也會消化細胞膜蛋白，對細胞有損傷作用，因此必須控制好胰蛋白酶的消化時間。

納歸題問第8頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三3、幾個重要的概念細胞貼壁懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上(單層)。要求：培養(yǎng)瓶（皿）內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。納歸題問第9頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三接觸抑制當(dāng)貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的接觸抑制。納歸題問第10頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)貼滿瓶壁的細胞需要重新用胰蛋白酶等處理讓細胞繼續(xù)培養(yǎng)，這樣的培養(yǎng)過程通常被稱為傳代培養(yǎng)。（即從原培養(yǎng)瓶內(nèi)轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)瓶內(nèi)過程。）通常將動物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。納歸題問第11頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三細胞株傳到40-50代后有部分細胞遺傳物質(zhì)發(fā)生了變化，具有癌細胞的特點，失去接觸抑制，可能在培養(yǎng)條件下無限制的傳代下去。從原代培養(yǎng)細胞群中篩選出進行傳代培養(yǎng)的細胞，能傳到40-50代，其遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生變化。細胞系納歸題問注意目前使用的細胞通常為10代以內(nèi)，以保持細胞正常的二倍體核型。第12頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細胞加培養(yǎng)液細胞懸浮液10代細胞部分細胞“癌變”，無限傳代動物細胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成動物體50代細胞原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細胞貼壁剝離、分瓶細胞培養(yǎng)過程：分化程度低，增殖能力強去掉組織間蛋白第13頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三細胞懸浮液10代細胞50代細胞無限傳代原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細胞株細胞系細胞貼壁生長隨細胞增多，出現(xiàn)接觸抑制部分細胞癌變，失去接觸抑制，無限傳代納歸題問第14頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三動物細胞培養(yǎng)都需要滿足什么條件？習(xí)學(xué)主自任務(wù)：閱讀教材第46頁黑體字后面時間：4分鐘問題：第15頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三4、動物細胞培養(yǎng)條件無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清、微量元素等）溫度和PH溫度36.5+0.5度，pH7.2～7.4氣體環(huán)境O2和CO2（95%空氣和5%CO2）離體培養(yǎng)的細胞對微生物和有毒物質(zhì)沒有防御能力。保證細胞順利的生長增殖納歸題問第16頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三CO2培養(yǎng)箱

哺乳動物離體細胞培養(yǎng)和體內(nèi)細胞一樣,需要在恒足溫度下才能生存,溫差變化一般不應(yīng)超過0.5度，因此培養(yǎng)箱對溫度應(yīng)具有較高靈敏度。CO2培養(yǎng)箱的優(yōu)點在于能恒定地供應(yīng)一定量的CO2,一般5%即可維持培養(yǎng)液PH值穩(wěn)定。培養(yǎng)基的類型天然培養(yǎng)基：合成培養(yǎng)基：營養(yǎng)價值高，成分復(fù)雜。成分明確，便于控制試驗條件。納歸題問第17頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三5、動物細胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用（1）生產(chǎn)蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等；（4）用于檢測有毒物質(zhì)；（2）獲得大量自身的皮膚細胞，用于植皮；（3）作為基因工程的受體細胞。（5）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)；納歸題問第18頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三6、植物細胞和動物細胞培養(yǎng)的比較比較項目植物組織培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)原理培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)目的獲得細胞或細胞分泌蛋白細胞的全能性細胞株、細胞系植物體快速繁殖、培育無病毒植株等葡萄糖、動物血清促生長因子蔗糖、植物激素液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基細胞增殖第19頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三結(jié)小堂課第20頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三動物細胞培養(yǎng)特點原理概念：貼壁生長，接觸抑制動物組織胰蛋白酶剪碎單個細胞加培養(yǎng)液細胞懸液分瓶培養(yǎng)10代細胞50代細胞不死細胞原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細胞株細胞系適宜條件培養(yǎng)條件無菌無毒，營養(yǎng)，溫度、PH，氣體環(huán)境過程細胞增殖第21頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三1、在動物細胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細胞是（）

A．細胞系B．細胞株C．原代細胞D．傳代細胞2、動物細胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是（）

A.動物細胞融合B.單克隆抗體C.胚胎移植D.動物細胞培養(yǎng)AD習(xí)練饋反第22頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三3、用于動物細胞培養(yǎng)的組織和細胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細胞（）

A.容易產(chǎn)生各種變異B.具有更強的全能性

C.取材十分方便D．分裂增殖的能力強D習(xí)練饋反4.動物細胞培養(yǎng)與植物