微量分光光度計(jì)

微量分光光度計(jì)第一頁(yè)，共十四頁(yè)，2022年，8月28日第二頁(yè)，共十四頁(yè)，2022年，8月28日內(nèi)容簡(jiǎn)介一.NanoDrop2000超微量分光光度計(jì)

(1)儀器描述及規(guī)格

(2)檢測(cè)原理及優(yōu)點(diǎn)二.軟件

(1)使用前準(zhǔn)備工作及軟件操作界面介紹三.應(yīng)用第三頁(yè)，共十四頁(yè)，2022年，8月28日NanoDrop2000分光光度計(jì)可以檢測(cè)0.5-2ul的樣本，而且檢測(cè)是非常高的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。樣本保留系統(tǒng)應(yīng)用了表面張力來(lái)把樣本保留在兩根檢測(cè)光纖中間，這使得儀器可以檢測(cè)較高濃度的樣本而不用稀釋。應(yīng)用這個(gè)技術(shù)，NanoDrop2000分光光度計(jì)檢測(cè)樣本的最高濃度是標(biāo)準(zhǔn)比色皿的200倍。樣品臂檢測(cè)基座一.NanoDrop2000超微量分光光度計(jì)(1)儀器描述第四頁(yè)，共十四頁(yè)，2022年，8月28日儀器類型：分光光度計(jì)最小樣品量：0.5ul波長(zhǎng)：1mm（可以自動(dòng)調(diào)整到0.05mm）光源：氙閃爍燈檢測(cè)器類型：2048—象素線型硅CCD陣列波長(zhǎng)范圍：190－840nm波長(zhǎng)準(zhǔn)確性：±1nm光譜分辨率：≤1.8nm吸收光精確性：0.002吸光值（1mm光程）吸收光準(zhǔn)確性：±2％（257nm波長(zhǎng)下，0.76個(gè)吸光值）吸光值范圍：0.02—300（等同于10mm光程時(shí)）檢測(cè)極限：2ng/uldsDNA最大檢測(cè)濃度：15,000ng/ul（dsDNA）檢測(cè)時(shí)間：<5秒儀器占地面積;14cm×20cm重量：2kg樣本基座材料：303不銹鋼以及石英光纖工作電壓;12V工作功率;12－18W（最大30W）軟件兼容性;WindowsXP和Vista（32bit儀器規(guī)格第五頁(yè)，共十四頁(yè)，2022年，8月28日(2)檢測(cè)原理利用表面張力保持樣本形態(tài)的專利技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。只需使用加樣器將1ul的樣品直接加在檢測(cè)表面上，而無(wú)需其他容器或檢測(cè)裝置。使用兩根光纖將樣本拉開(kāi)，形成固定光程的檢測(cè)通路，自動(dòng)進(jìn)行檢測(cè)。第六頁(yè)，共十四頁(yè)，2022年，8月28日優(yōu)點(diǎn)1.檢測(cè)所需樣微量，0.5-2ul，可以節(jié)省辛苦得到的樣品2.檢測(cè)范圍寬，比傳統(tǒng)的分光光度計(jì)的上限高200倍，吸光度0.02-300，對(duì)于多數(shù)樣品而言，無(wú)需稀釋3.無(wú)需檢測(cè)容器，日常消耗低，直接將樣品加在檢測(cè)面上，檢測(cè)完以后把檢測(cè)表面擦干凈即可，保證樣品間無(wú)交叉污染，也不干擾后續(xù)檢測(cè)4.全波長(zhǎng)190-840nm，分辨率1nm，對(duì)于任何一個(gè)樣品的測(cè)量，儀器都自動(dòng)給出全波長(zhǎng)的掃描結(jié)果190-840nm5.使用方便快速，1個(gè)樣品只需5秒6.無(wú)需預(yù)熱，直接測(cè)量第七頁(yè)，共十四頁(yè)，2022年，8月28日二.軟件(1)在使用儀器進(jìn)行樣品檢測(cè)前，需要使用USB連接線把儀器和電腦相連，把12V的電源線接到儀器背面的插口上，并連接電源。任務(wù)欄工具欄功能選擇第八頁(yè)，共十四頁(yè)，2022年，8月28日使用NanoDrop2000/2000c分光光度計(jì)可以方便的使用微量樣品進(jìn)行紫外－可見(jiàn)分光檢測(cè)。NanoDrop2000可以應(yīng)用于如下檢測(cè)：12345678910111.核酸的濃度和質(zhì)量2.篩選有效的熒光標(biāo)記雜交探針3.功能同普通的紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)4.檢測(cè)細(xì)胞懸液的光散射5.蛋白定量6.蛋白定量(主要檢測(cè)還有還原劑或去污劑的總蛋白含量)7.檢測(cè)非純蛋白的濃度8.蛋白的濃度和熒光染料的濃度9.蛋白A280檢測(cè)10.編輯新程序11.蛋白定量(區(qū)別于5，測(cè)試濃度較低)第九頁(yè)，共十四頁(yè)，2022年，8月28日例：核酸SampleID-輸出樣品名稱Type-DNA-50做dsDNA檢測(cè)，RNA-40做RNA檢測(cè)，，ssDNA-33做單鏈DNAConc-結(jié)果A260－顯示10mm光程下的260nm處的吸光值A(chǔ)280－顯示10mm光程下的280nm處的吸光值。260/280－260nm和280nm處的吸光值的比值（DNA1.8RNA2.0）第十頁(yè)，共十四頁(yè)，2022年，8月28日核酸濃度檢測(cè)1．在主菜單中選擇核酸模式，如果顯示波長(zhǎng)校準(zhǔn)窗口，放下基座臂點(diǎn)擊OK。2．選擇檢測(cè)的樣品類型，默認(rèn)的設(shè)定為DNA-50。3．選擇濃度單位，默認(rèn)的為ng/ul。4．默認(rèn)的校準(zhǔn)波長(zhǎng)為340nm，重新選擇一個(gè)校準(zhǔn)波長(zhǎng)或者去選擇Baseline來(lái)不選擇校準(zhǔn)波長(zhǎng)。5．選擇AddtoReport自動(dòng)把檢測(cè)結(jié)果添加到當(dāng)前報(bào)告中去，默認(rèn)設(shè)置是把每個(gè)樣品都添加到報(bào)告中。要把樣品數(shù)據(jù)保存到工作薄中，在檢測(cè)前必須選上Addtoreport。6．選擇Overlayspectra可以在同一時(shí)間顯示多個(gè)光譜。7．使用合適的液體建立空白對(duì)照，空白對(duì)照液體是溶解目標(biāo)分子的液體?？瞻讓?duì)照液體的pH值和離子濃度應(yīng)和檢測(cè)樣品一樣。第十一頁(yè)，共十四頁(yè)，2022年，8月28日注意：1.每次檢測(cè)的樣品都必須是新加的。2.使用干凈的無(wú)塵紙擦干凈上下基座，這樣儀器就可以進(jìn)行下一個(gè)樣品檢測(cè)了。第十二頁(yè)，共十四頁(yè)，2022年，8月28日OligoCalc

用來(lái)計(jì)算特定核酸序列的分子量，消光系數(shù)，濃度因子要使用OligoCalc：1.使用如下方法來(lái)輸入一個(gè)堿基序列：使用堿基序列顯示框下的按鍵。鍵盤（僅僅能使用A，C，G，T，和U來(lái)輸入堿基）復(fù)制和粘貼一個(gè)序列到顯示框（僅僅能使用A，C，G，T，和U來(lái)輸入堿基）清除堿基序列框中的序列，點(diǎn)擊序列框右側(cè)的Clear鍵，單個(gè)可以手動(dòng)來(lái)刪除。2.選擇磷酸化程度，可以選擇：DNA單磷酸化，RNA單磷酸化和三