微生物發(fā)酵產(chǎn)酶

關(guān)于微生物發(fā)酵產(chǎn)酶第1頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四酶的生產(chǎn)方法提取分離法(Extraction)生物合成(Biosynthesis)化學(xué)合成(chemicalsynthesis)SOD-bloodPapain-PapayaChymotrypsin-Pancrea……organ/tissue/cellAmylasefromBacillusProteasefromBacillusPhosphatasefromBacillusGlucoamylasefromAspergillus……PlantcellcultureAnimalcellcultureFewexample第2頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四一酶生物合成過程（一）中心法則-CentralDogma（二）RNA的生物合成-Transcription（三）蛋白質(zhì)的生物合成-Translation（四）酶生物合成的調(diào)節(jié)-Regulation第3頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四（一）中心法則-CentralDogmaReversetranscription第4頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四Replication復(fù)制：親代DNA或RNA在一系列酶的作用下，生成與親代相同的子代DNA或RNA的過程。Transcription轉(zhuǎn)錄：以DNA為模板，按照堿基配對原則將其所含的遺傳信息傳給RNA，形成一條與DNA鏈互補的RNA的過程。Translation翻譯：亦叫轉(zhuǎn)譯，以mRNA為模板，將mRNA的密碼解讀成蛋白質(zhì)的AA順序的過程。Reversetranslation逆轉(zhuǎn)錄：以RNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，生成DNA的過程。（一）中心法則-CentralDogma第5頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四（二）RNA的生物合成-Transcription細(xì)胞內(nèi)RNA的生物功能(1)某些RNA病毒，其所含的雙鏈RNA作為遺傳信息的載體。(2)在蛋白質(zhì)生物合成過程中，各種RNA起著重要的作用。其中，tRNA作為氨基酸載體，并由其上的反密碼子識別mRNA分子上的密碼子；mRNA作為蛋白質(zhì)合成的模板，由其分子上的三聯(lián)體密碼控制蛋白質(zhì)分子中氨基酸的排列順序；rRNA與蛋白質(zhì)一起組成核糖核蛋白體（核糖體），作為蛋白質(zhì)生物合成的場所。(3)某些RNA具有生物催化活性，屬于核酸類酶，在一定條件下，可以催化有關(guān)的生化反應(yīng)。(4)各小分子RNA在分子修飾和代謝調(diào)節(jié)等方面有重要作用。第6頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四轉(zhuǎn)錄過程起始位點的識別recognition轉(zhuǎn)錄起始initiation鏈的延伸elongation轉(zhuǎn)錄終止termination轉(zhuǎn)錄后加工modification第7頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四TheE.coliRNApolymeraseholoenzymeconsistsofsixsubunits:a2bb’s.PossiblecatalyticsubunitsPromoterspecificityEnzymeassembly,promoterrecognition,activatorbindingRoleunknown(notneededinvitro)36.5kDa15115511kDa(32-90kDa)第8頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四第9頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四（三）蛋白質(zhì)的生物合成-Translation翻譯:以RNA中mRNA為模板，按照其核苷酸順序所組成的密碼指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成的過程。mRNA蛋白質(zhì)翻譯

各種信息

各種蛋白質(zhì)（核苷酸排列順序）

（氨基酸排列順序）第10頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四蛋白質(zhì)合成的幾個要素-mRNA(模板，template)mRNA是帶有DNA遺傳信息指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成的直接模板。以mRNA為模板，合成一定結(jié)構(gòu)的多肽鏈的過程(翻譯)，就是將mRNA分子中的核苷酸排列順序轉(zhuǎn)變成蛋白質(zhì)分子中的氨基酸排列順序。第11頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四蛋白質(zhì)合成的幾個要素-遺傳密碼,nucleotidetripletcodonmRNA分子中，每三個相鄰的核苷酸組成的三聯(lián)體代表某種氨基酸或其它信息，稱為密碼子或三聯(lián)密碼。四種核苷酸編成三聯(lián)體可形成64個密碼子。其中：一個起始密碼:AUG三個終止密碼:UAAUGAUAG多數(shù)氨基酸擁有2-4個密碼第12頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四第13頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四蛋白質(zhì)合成的幾個要素-轉(zhuǎn)運RNA(transporter)tRNA是氨基酸的轉(zhuǎn)運工具，攜帶活化的氨基酸到核蛋白體。tRNA有特異性，至少有20種。每種tRNA的反密碼環(huán)頂端均有由三個核苷酸組成的反密碼，能與mRNA上相應(yīng)的密碼互補結(jié)合。第14頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四酪5’5’AUGGUUUACACA酪氨酰-tRNA反密碼mRNA密碼(codon)與反密碼(anticodon)的堿基配對第15頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四核糖體（或稱核糖核蛋白體）由蛋白質(zhì)和rRNA組成。是存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的微小顆粒。蛋白質(zhì)合成的幾個要素-核糖體，ribosome第16頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四其他輔助因子工具酶蛋白質(zhì)合成的幾個要素-其他因子和酶第17頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四蛋白質(zhì)的合成過程肽鏈合成的起始initiation肽鏈合成的延伸elongation肽鏈合成的終止與釋放terminationandrelease合成多肽的輸送和加工transportandmodification蛋白質(zhì)分子的折疊folding第18頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四（四）酶生物合成的調(diào)節(jié)-Regulation基因水平的表達控制酶含量的調(diào)節(jié)操縱子（operon）：是一組功能上相關(guān)，受同一調(diào)控區(qū)控制的基因組成的一個遺傳單位。第19頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四基因操縱子調(diào)節(jié)系統(tǒng)示意圖

調(diào)節(jié)基因

啟動基因操縱基因結(jié)構(gòu)基因

DNA

轉(zhuǎn)錄

（-）

RNA聚合酶（+）轉(zhuǎn)錄

翻譯

mRNA

翻譯

阻遏蛋白

蛋白質(zhì)

誘導(dǎo)劑

控制區(qū)信息區(qū)操縱子第20頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四ABEX底物水平的調(diào)節(jié)酶水平的調(diào)節(jié)

酶活性的調(diào)節(jié)酶含量的調(diào)節(jié)酶的定位調(diào)節(jié)輔助因子調(diào)節(jié)生長發(fā)育的不同時期外界環(huán)境變化酶合成與分解速度的變化（基因表達調(diào)控）產(chǎn)物調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)酶的調(diào)控模式第21頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四酶在細(xì)胞內(nèi)的含量取決于酶的合成速度和分解速度。細(xì)胞根據(jù)自身活動需要，嚴(yán)格控制細(xì)胞內(nèi)各種酶的合理含量，從而對各種生物化學(xué)過程進行調(diào)控。酶濃度調(diào)節(jié)的化學(xué)本質(zhì)是基因表達的調(diào)節(jié)。在細(xì)胞內(nèi)，所合成的酶的種類及數(shù)量是由特殊的基因信息決定的。DNA所攜帶的酶蛋白遺傳信息，需要通過轉(zhuǎn)錄和翻譯而合成酶蛋白。在細(xì)胞內(nèi)進行的轉(zhuǎn)錄或翻譯過程都有特定的調(diào)節(jié)控制機制，其中轉(zhuǎn)錄的調(diào)控占主導(dǎo)地位。因此，基因表達的調(diào)控主要在轉(zhuǎn)錄水平上進行。第22頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四

酶合成調(diào)節(jié)的類型①誘導(dǎo)(induction)

組成酶：細(xì)胞固有的酶類。誘導(dǎo)酶：是細(xì)胞為適應(yīng)外來底物或其結(jié)構(gòu)類似物而臨時合成的一類酶。②阻遏(repression)分解代謝物阻遏(cataboliterepression)反饋阻遏(feedbackrepression)第23頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四3酶合成的調(diào)節(jié)機制

①酶合成的誘導(dǎo)加進某種物質(zhì)，使酶生物合成開始或加速進行。酶合成誘導(dǎo)的現(xiàn)象：已知分解利用乳糖的酶有：

-半乳糖苷酶；-半乳糖苷透過酶；硫代半乳糖苷轉(zhuǎn)乙酰酶。實驗：（1）大腸桿菌生長在葡萄糖培養(yǎng)基上時，細(xì)胞內(nèi)無上述三種酶合成；（2）大腸桿菌生長在乳糖培養(yǎng)基上時，細(xì)胞內(nèi)有上述三種酶合成；（3）表明菌體生物合成的經(jīng)濟原則：需要時才合成。第24頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四調(diào)節(jié)基因操縱基因乳糖結(jié)構(gòu)基因PLacZLacYLacamRNA

阻遏蛋白（有活性）基因關(guān)閉啟動子ORPLacZLacYLaca調(diào)節(jié)基因操縱基因乳糖結(jié)構(gòu)基因啟動子ORmRNAZmRNAYmRNAa

阻遏蛋白（無活性）基因表達mRNAA、乳糖操縱子的結(jié)構(gòu)

B、乳糖酶的誘導(dǎo)

乳糖

阻遏蛋白（有活性）誘導(dǎo)第25頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四②末端產(chǎn)物阻遏

由某代謝途徑末端產(chǎn)物的過量累積引起的阻遏。

酶合成阻遏的現(xiàn)象：

實驗：

（1）大腸桿菌生長在無機鹽和葡萄糖的培養(yǎng)基上時，檢測到細(xì)胞內(nèi)有色氨酸合成酶的存在；

（2）在上述培養(yǎng)基中加入色氨酸，檢測發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)色氨酸合成酶的活性降低，直至消失。

（3）表明色氨酸的存在阻止了色氨酸合成酶的合成，體現(xiàn)了菌體生長的經(jīng)濟原則:不需要就不合成。第26頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四

色氨酸操縱子——酶的阻遏調(diào)節(jié)基因操縱基因結(jié)構(gòu)基因mRNA酶蛋白阻遏蛋白不能與操縱基因結(jié)合，結(jié)構(gòu)基因表達調(diào)節(jié)基因操縱基因結(jié)構(gòu)基因輔阻遏物代謝產(chǎn)物與阻遏蛋白結(jié)合，使之構(gòu)象發(fā)生變化與操縱基因結(jié)合，結(jié)構(gòu)基因不能表達第27頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四酶的誘導(dǎo)和阻遏操縱子模型B.有活性阻遏蛋白加誘導(dǎo)劑A.有活性阻遏蛋白C.無活性阻遏蛋白D.無活性阻遏蛋白加輔阻遏劑操縱基因啟動基因調(diào)節(jié)基因結(jié)構(gòu)基因

阻遏蛋白(有活性)阻遏蛋白阻擋操縱基因結(jié)構(gòu)基因不表達誘導(dǎo)物誘導(dǎo)物與阻遏蛋白結(jié)合,使阻遏蛋白不能起到阻擋操縱基因的作用,結(jié)構(gòu)基因可以表達酶蛋白mRNA阻遏蛋白不能跟操縱基因結(jié)合,結(jié)構(gòu)基因可以表達阻遏蛋白(無活性)酶蛋白mRNA代謝產(chǎn)物與阻遏蛋白結(jié)合,從而使阻遏蛋白能夠阻擋操縱基因,結(jié)構(gòu)基因不表達代謝產(chǎn)物第28頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四調(diào)控方式阻遏蛋白添加物與操縱基因結(jié)合阻遏效應(yīng)舉例酶的誘導(dǎo)有活性－＋不轉(zhuǎn)錄，繼而不翻譯誘導(dǎo)物－轉(zhuǎn)錄，繼而翻譯乳糖操縱子酶的阻遏無活性－阻遏物＋不轉(zhuǎn)錄，繼而不翻譯色氨酸操縱子酶合成的誘導(dǎo)與阻遏操縱子模型調(diào)控作用對比第29頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四③分解代謝物阻遏指細(xì)胞內(nèi)同時有兩種分解底物（碳源或氮源）存在時，利用快的那種分解底物會阻遏利用慢的底物的有關(guān)酶合成的現(xiàn)象。分解代謝物的阻遏作用，并非由于快速利用的甲碳源本身直接作用的結(jié)果，而是通過甲碳源（或氮源等）在其分解過程中所產(chǎn)生的中間代謝物所引起的阻遏作用。第30頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四分解代謝物阻遏現(xiàn)象：實驗：細(xì)菌在含有葡萄糖和乳糖的培養(yǎng)基上生長，優(yōu)先利用葡萄糖。待葡萄糖耗盡后才開始利用乳糖，產(chǎn)生了兩個對數(shù)生長期中間隔開一個生長延滯期的“二次生長現(xiàn)象”(diauxie或biphasicgrowth）。

這一現(xiàn)象又稱葡萄糖效應(yīng)，產(chǎn)生的原因是由于葡萄糖降解物阻遏了分解乳糖酶系的合成。此調(diào)節(jié)基因的產(chǎn)物是環(huán)腺苷酸受體蛋白（CRP）,亦稱降解物基因活化蛋白（CAP）。第31頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四分解代謝物阻遏RLacZLacYLacamRNAmRNAZmRNAYmRNAa基因表達CAP基因結(jié)構(gòu)基因TCAPOCAP結(jié)合部位RNA聚合酶TcAMP-CAPP葡萄糖分解代謝產(chǎn)物腺苷酸環(huán)化酶磷酸二酯酶ATPcAMP5'-AMP抑制激活葡萄糖降解物與cAMP的關(guān)系cAMPCAP：降解物基因活化蛋白（catabolicgeneactivationprotein）降低cAMP濃度使CAP呈失活狀態(tài)第32頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四二常見產(chǎn)酶微生物（一）基本要求：不是致病菌發(fā)酵周期短,產(chǎn)酶量高不易變異退化最好是產(chǎn)生胞外酶的菌種,利于分離。對醫(yī)藥和食品用酶,還應(yīng)考慮安全性：凡從可食部分或食品加工中傳統(tǒng)使用的微生物生產(chǎn)的酶,安全!由非致病微生物制取的酶,需作短期毒性實驗。非常見微生物制取酶,需做廣泛毒性實驗,包括慢性中毒實驗。第33頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四（二）常見產(chǎn)酶微生物1.大腸埃希氏桿菌2.醋酸桿菌（Acetobacter）3.枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）4.根霉（Rhizopus）5.曲霉（Aspergillus）第34頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四1.大腸埃希氏桿菌簡稱大腸桿菌，是最為著名的原核生物。Escherich屬菌株和大多數(shù)大腸桿菌是無害，但也有些大腸桿菌是致病的，會引起腹瀉和尿路感染。大腸桿菌：易在實驗室操作、生長迅速，而且營養(yǎng)要求低。應(yīng)用：作為宿主供大量細(xì)菌病毒生長繁殖是最早用作基因工程的宿主菌生產(chǎn)谷氨酸脫羧酶、天冬酰胺酶和制備天冬氨酸、蘇氨酸及纈氨酸。第35頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四2.醋酸桿菌（Acetobacter）應(yīng)用：有機酸(食醋等）；葡萄糖異構(gòu)酶(高果糖漿)；山梨糖(維C中間體）。菌體從橢圓至桿狀，單個、成對或成鏈，革蘭氏陰性，運動（周毛）或不運動，不生芽孢。好氣。在含糖、乙醇和酵母膏的培養(yǎng)基上生長良好。第36頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四3.枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）直狀、近直狀的桿菌，周生或側(cè)生鞭毛，革蘭氏陽性，無莢膜，芽孢0.5×1.51.8m，中生或近中生?？莶菅挎邨U菌是工業(yè)發(fā)酵的重要菌種之一。生產(chǎn)淀粉酶、蛋白酶、5’-核苷酸酶、某些氨基酸及核苷。第37頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四4.根霉（Rhizopus）因有假根（Rhizoid）而得名。分布于土壤、空氣中，常見于淀粉食品上，可引起霉腐變質(zhì)和水果、蔬菜的腐爛。應(yīng)用：根霉能產(chǎn)生一些酶類，如淀粉酶、果膠酶、脂肪酶等；在釀酒工業(yè)上常用做糖化菌；有些能產(chǎn)生乳酸、延胡索酸等有機酸。第38頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四5.曲霉（Aspergillus）分布：廣泛分布于土壤、空氣和谷物上，可引起食物、谷物和果蔬的霉腐變質(zhì)，有的產(chǎn)生致癌性黃曲霉毒素。代表種：黑曲霉Asp.Niger、黃曲霉Asp.flavus應(yīng)用：是制醬、釀酒、制醋的主要菌種；是生產(chǎn)酶制劑（蛋白酶、淀粉酶、果膠酶）的菌種；生產(chǎn)有機酸（如檸檬酸、葡萄糖酸等）；用作生產(chǎn)糖化飼料的菌種。第39頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四酵母(1)啤酒酵母(Saccharomycescerevisiae)啤酒酵母是啤酒工業(yè)上廣泛應(yīng)用的酵母。細(xì)胞由圓形、卵形、橢圓形到臘腸形。在麥芽汁培養(yǎng)基上，菌落為白色，有光澤，平滑，邊緣整齊。營養(yǎng)細(xì)胞可以直接變?yōu)樽幽?，每個子囊含有1～4個圓形光亮的子囊孢子。啤酒酵母除了主要用于啤酒、酒類的生產(chǎn)外，還可以用于轉(zhuǎn)化酶、丙酮酸脫羧酶、醇脫氫酶等的生產(chǎn)。(2)假絲酵母(Candida)假絲酵母的細(xì)胞圓形，卵形或長形。無性繁殖為多邊芽殖，形成假菌絲，也有真菌絲，可生成無節(jié)孢子、子囊孢子、冬孢子或擲孢子。不產(chǎn)生色素。在麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基上，菌落呈乳白色或奶油色。假絲酵母可以用于生產(chǎn)脂肪酶、尿酸酶、尿囊素酶、轉(zhuǎn)化酶、醇脫氫酶等。具有較強的17-羥基化酶，可以用于甾體轉(zhuǎn)化。第40頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四（三）產(chǎn)酶微生物的分離和篩選樣品的采集:從富含該酶作用底物的場所采集樣品富集培養(yǎng):投其所好，取其所抗分離：獲得微生物的純培養(yǎng)（pureculture）。初篩：選出產(chǎn)酶菌種，以多為主。復(fù)篩：選出產(chǎn)酶水平相對較高的菌株，以質(zhì)為主。1.方法：第41頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四第42頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四2.產(chǎn)酶微生物優(yōu)良菌種的選育

誘變育種原生質(zhì)體融合育種基因工程育種第43頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四3.微生物發(fā)酵產(chǎn)酶方法（1）固體培養(yǎng):特別適合于霉菌培養(yǎng)（2）液體培養(yǎng):目前酶發(fā)酵生產(chǎn)的主要方式（3）固定化細(xì)胞:需要特殊的固定化細(xì)胞反應(yīng)器第44頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四（四）微生物酶的類型1.胞外酶：大多是水解酶（如淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶、果膠酶），是微生物為了利用環(huán)境中的大分子而釋放到細(xì)胞外的，即使胞外濃度很高，胞內(nèi)也能維持較低水平，受到的調(diào)節(jié)控制少。

2.胞內(nèi)酶：指合成后仍留在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用的酶，酶活性和濃度受到中間產(chǎn)物和終產(chǎn)物的調(diào)控。第45頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四

植物、動物、微生物細(xì)胞的特性比較細(xì)胞種類植物細(xì)胞微生物細(xì)胞動物細(xì)胞細(xì)胞大小/um200～3001～1010～100倍增時間/h﹥120.3-6﹥15營養(yǎng)要求簡單簡單復(fù)雜光照要求大多數(shù)要求不要求不要求對剪切力敏感大多數(shù)不敏感非常敏感主要產(chǎn)物色素、藥物、香精、酶等醇、有機酸、氨基酸、抗生素、核苷酸、酶等疫苗、激素、單克隆抗體、酶等第46頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四三酶的發(fā)酵工藝條件及控制第47頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四三酶的發(fā)酵工藝條件及控制（一）培養(yǎng)基（二）發(fā)酵條件及控制（三）提高產(chǎn)酶的措施第48頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四（一）培養(yǎng)基第49頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四1.培養(yǎng)基的設(shè)計原則選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì)，營養(yǎng)物的濃度及配比合適物理、化學(xué)條件適宜，經(jīng)濟節(jié)約精心設(shè)計、試驗比較培養(yǎng)不同的微生物必須采用不同的培養(yǎng)條件；培養(yǎng)目的不同，原料的選擇和配比不同；不同階段，培養(yǎng)條件也有所差異。第50頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四任何培養(yǎng)基都應(yīng)該具備微生物生長所需要五大營養(yǎng)要求；培養(yǎng)基（medium）是人工配制的，適合微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)基幾乎是一切對微生物進行研究和利用工作的基礎(chǔ)；五大要素：碳源、氮源、無機鹽、生長因子、水。1.培養(yǎng)基的設(shè)計原則第51頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四水是微生物最基本的組成分（70%~95%）水是微生物體內(nèi)和體外的溶劑（吸收營養(yǎng)成分和代謝廢物）水是細(xì)胞質(zhì)組分，直接參與各種代謝活動調(diào)節(jié)細(xì)胞溫度和保持環(huán)境溫度的穩(wěn)定（比熱高，傳熱快）水第52頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四常用碳源：糖類、醇類、脂類、有機酸、烴類、蛋白質(zhì)及其降解物異養(yǎng)微生物：糖類是最好碳源（葡萄糖最為通用）碳源選擇合適碳源，以適應(yīng)目的酶的合成調(diào)節(jié)機制對于一些特殊的產(chǎn)酶菌需要特殊的碳源，如利用黃青霉生產(chǎn)葡萄糖氧化酶，以甜菜作碳源就達不到產(chǎn)酶目的，而以蔗糖為碳源時產(chǎn)酶量顯著提高；第53頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)和代謝產(chǎn)物中氮素（不能用作能源）氮源有機氮源蛋白胨、酵母膏、牛肉膏無機氮源銨鹽、硝酸鹽氮源需要注意合適的碳氮比一般生產(chǎn)蛋白酶、淀粉酶多用豆餅、花生餅等有機氮源，原因是高分子氮對酶的誘導(dǎo)作用；而生產(chǎn)纖維素酶時多用無機氮源，因為有機氮會促進菌體的生長繁殖，對產(chǎn)酶不利。第54頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四不同的細(xì)胞對氮源有不同的要求。應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞的營養(yǎng)要求進行選擇和配置。一般說來，動物細(xì)胞要求有機氮源；植物細(xì)胞主要使用無機氮源；微生物細(xì)胞中，異養(yǎng)型細(xì)胞要求有機氮源，自養(yǎng)型細(xì)胞可以采用無機氮源。碳和氮兩者的比例，即碳氮比（C/N），對酶的產(chǎn)量有顯著影響。所謂碳氮比一般是指培養(yǎng)基中碳元素（C）的總量與氮元素（N）總量之比。第55頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四參與酶的組成、構(gòu)成酶活性基團、激活酶活性維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，調(diào)節(jié)細(xì)胞滲透壓控制細(xì)胞的氧化還原電位有時可作某些微生物生長的能源物質(zhì)常用：硫酸鹽、磷酸鹽、氯化物及鉀、鈉、鈣、鎂、鐵等元素的化合物。無機鹽一般的無機鹽在低濃度情況下有利于酶產(chǎn)量的提高，而高濃度對產(chǎn)酶有抑制作用第56頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四生長因子生長因子是指某些微生物不能用普通的碳源、氮源物質(zhì)進行合成，而必須另外加入少量的生長需求的有機物質(zhì)。分類：依據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)分成維生素、氨基酸、嘌呤（或嘧啶）及衍生物和類脂成分等四類。功能：以輔酶與輔基的形式參與代謝中的酶促反應(yīng)實驗室中常用酵母膏、蛋白胨、牛肉膏等作為各種生長因子的需要，麥芽汁、米曲汁等天然培養(yǎng)基中本身含有各種生長因子。第57頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四在酶的發(fā)酵生產(chǎn)中，一般在培養(yǎng)基中添加含有多種生長因素的天然原料的水解物，如酵母膏、玉米漿、麥芽汁、麩皮水解液等，以提供細(xì)胞所需的各種生長因素。也可以加入某種或某幾種提純的有機化合物，以滿足細(xì)胞生長繁殖之需。第58頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四細(xì)菌：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（或簡稱普通肉湯培養(yǎng)基）；放線菌：高氏1號合成培養(yǎng)基培養(yǎng)；酵母菌：麥芽汁培養(yǎng)基；霉菌：查氏合成培養(yǎng)基；2.實驗室的常用培養(yǎng)基第59頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四例如枯草芽孢桿菌：一般培養(yǎng)：肉湯培養(yǎng)基或LB培養(yǎng)基；自然轉(zhuǎn)化：基礎(chǔ)培養(yǎng)基；觀察芽孢：生孢子培養(yǎng)基；產(chǎn)蛋白酶：以玉米粉、黃豆餅粉為主的產(chǎn)酶培養(yǎng)基；2.實驗室的常用培養(yǎng)基第60頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四枯草桿菌BF7658α-淀粉酶發(fā)酵培養(yǎng)基：玉米粉8%，豆餅粉4%，磷酸氫二鈉0.8%，硫酸銨0.4%，氯化鈣0.2%，氯化按0.15%（自然pH）。枯草桿菌AS1.398中性蛋白酶發(fā)酵培養(yǎng)基：玉米粉4%，豆餅粉3%，麩皮3.2%,糠1%,磷酸氫二鈉0.4%,磷酸二氫鉀0.03%（自然pH）。黑曲霉糖化酶發(fā)酵培養(yǎng)基：玉米粉10%，豆餅粉4%，麩皮1%（pH4.4～5.0）。地衣芽孢桿菌2709堿性蛋白酶發(fā)酵培養(yǎng)基：玉米粉5.5%,豆餅4%,磷酸氫二鈉0.4%,磷酸二氫鉀0.03%(pH8.5)。黑曲霉AS3.350酸性蛋白酶發(fā)酵培養(yǎng)基:玉米粉6%,豆餅粉4%,玉米漿0.6%,氯化鈣0.5%,氯化銨1%,磷酸氫二鈉0.2%(pH5.5)。2.實驗室的常用培養(yǎng)基第61頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四游動放線菌葡萄糖異構(gòu)酶發(fā)酵培養(yǎng)基：糖蜜2%，豆餅粉2%，磷酸氫二鈉0。1%，硫酸鎂0。05%(pH7.2)。桔青霉磷酸二酯酶發(fā)酵培養(yǎng)基：淀粉水解糖5%，蛋白胨0.5%,硫酸鎂0.05%,氯化鈣0.04%,磷酸氫二鈉0.05%,磷酸二氫鉀0.05%(自然pH)。黑曲霉AS3.396果膠酶發(fā)酵培養(yǎng)基:麩皮5%,果膠0.3%,硫酸銨2%,磷酸二氫鉀0.25%,硫酸鎂0.05%,硝酸鈉0.02%,硫酸亞鐵0.001%(自然pH)?？莶輻U菌AS1.398堿性磷酸酶發(fā)酵培養(yǎng)基:葡萄糖0.4%,乳蛋白水解物0.1%,硫酸銨1%,氯化鉀0.1%,氯化鈣0.1mmol/L,氯化鎂1.0mmol/L,磷酸氫二鈉20mol/L(用pH7.4Tris-HCl緩沖液配制)第62頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四（二）發(fā)酵條件及控制培養(yǎng)基的pH必須控制在一定的范圍內(nèi)，以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物。為了維持培養(yǎng)基pH的相對恒定，通常在培養(yǎng)基中加入pH緩沖劑，或在進行工業(yè)發(fā)酵時補加酸、堿。1.pH值的控制第63頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四通常培養(yǎng)條件：細(xì)菌與放線菌：pH7-7.5酵母菌和霉菌：pH4.5-6范圍內(nèi)生長細(xì)胞發(fā)酵產(chǎn)酶最適pH與生長最適pH值往往有所不同。細(xì)胞生產(chǎn)某種酶的最適pH通常接近于該酶催化反應(yīng)的最適pH。有些細(xì)胞可同時產(chǎn)生若干種酶，在生產(chǎn)過程中，通過控制培養(yǎng)基的pH值，往往可以改變各種酶之間的產(chǎn)量比例。1.pH值的控制第64頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四例如，采用米曲霉發(fā)酵生產(chǎn)蛋白酶時，當(dāng)培養(yǎng)基的pH值為堿性時，主要生產(chǎn)堿性蛋白酶；培養(yǎng)基的pH值為中性時，主要生產(chǎn)中性蛋白酶；而在酸性的條件下，則以生產(chǎn)酸性蛋白酶為主。隨著細(xì)胞的生長繁殖和新陳代謝產(chǎn)物的積累,培養(yǎng)基的pH值往往會發(fā)生變化。這種變化的情況與細(xì)胞特性有關(guān)，也與培養(yǎng)基的組成成分以及發(fā)酵工藝條件密切相關(guān)。第65頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四◆含糖量高的培養(yǎng)基，由于糖代謝產(chǎn)生有機酸，會使pH值向酸性方向移動；◆含蛋白質(zhì)、氨基酸較多的培養(yǎng)基，經(jīng)過代謝產(chǎn)生較多的胺類物質(zhì)，使pH值向堿性方向移動；◆以硫酸銨為氮源時，隨著銨離子被利用，培養(yǎng)基中積累的硫酸根會使pH值降低；◆以尿素為氮源的，隨著尿素被水解生成氨，而使培養(yǎng)基的pH值上升，然后又隨著氨被細(xì)胞同化而使pH值下降；◆磷酸鹽的存在，對培養(yǎng)基的pH值變化有一定的緩沖作用?！粼谘鯕夤?yīng)不足時，由于代謝積累有機酸，可使培養(yǎng)基的pH值向酸性方向移動。第66頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四通常在生物學(xué)范圍內(nèi)每升高10℃，生長速度加快一倍，溫度直接影響酶反應(yīng)，對于微生物來說，溫度直接影響其生長和合成酶。2.溫度的控制有些細(xì)胞發(fā)酵產(chǎn)酶的最適溫度與細(xì)胞生長最適溫度有所不同，而且往往低于生長最適溫度。這是由于在較低的溫度條件下，可以提高酶所對應(yīng)的mRNA的穩(wěn)定性，增加酶生物合成的延續(xù)時間，從而提高酶的產(chǎn)量?？莶輻U菌的最適生長溫度為34～37℃黑曲霉的最適生長溫度為28～32℃第67頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四在細(xì)胞生長和發(fā)酵產(chǎn)酶過程中，由于細(xì)胞的新陳代謝作用，會不斷放出熱量，使培養(yǎng)基的溫度升高，同時，由于熱量的不斷擴散，會使培養(yǎng)基的溫度不斷降低。為此必須經(jīng)常及時地對溫度進行調(diào)節(jié)控制，使培養(yǎng)基的溫度維持在適宜的范圍內(nèi)?！魷囟鹊恼{(diào)節(jié)一般采用熱水升溫、冷水降溫的方法。為了及時地進行溫度的調(diào)節(jié)控制，在發(fā)酵罐或其他生物反應(yīng)器中，均應(yīng)設(shè)計有足夠傳熱面積的熱交換裝置，如排管、蛇管、夾套、噴淋管等，并且隨時備有冷水和熱水，以滿足溫度調(diào)控的需要。第68頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四3.溶解氧的控制在酶的發(fā)酵生產(chǎn)過程中，處于不同生長階段的細(xì)胞，其細(xì)胞濃度和細(xì)胞呼吸強度各不相同，致使耗氧速率有很大的差別。因此必須根據(jù)耗氧量的不同，不斷供給適量的溶解氧。培養(yǎng)液中溶解氧的量，決定于在一定條件下氧氣的溶解速度。溶氧速率與通氣量、氧氣分壓、氣液接觸時間、氣液接觸面積以及培養(yǎng)液的性質(zhì)等有密切關(guān)系。一般說來，通氣量越大、氧氣分壓越高、氣液接觸時間越長、氣液接觸面積越大，則溶氧速率越大。培養(yǎng)液的性質(zhì)，主要是黏度、氣泡、以及溫度等對于溶氧速率有明顯影響。第69頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四3.溶解氧的控制調(diào)節(jié)通氣量調(diào)節(jié)氧的分壓調(diào)節(jié)氣液接觸時間調(diào)節(jié)氣液接觸面積改變培養(yǎng)液的性質(zhì)控制溶氧方法第70頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四調(diào)節(jié)氣液接觸面積

為了增大氣液兩相接觸面積，應(yīng)是通過培養(yǎng)液的空氣盡量分散成小氣泡。

在發(fā)酵容器的底部安裝空氣分配管，使氣體分散成小氣泡進入培養(yǎng)液中，是增加氣液接觸面積的主要方法。

裝設(shè)攪拌裝置或增設(shè)擋板等可以使氣泡進一步打碎和分散，也可以有效地增加氣液接觸面積，從而提高溶氧速率。第71頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四酶發(fā)酵生產(chǎn)的一般工藝流程

第72頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四（三）提高產(chǎn)酶的措施1.添加誘導(dǎo)物對于誘導(dǎo)酶的發(fā)酵生產(chǎn)，在發(fā)酵過程中的某個適宜的時機，添加適宜的誘導(dǎo)物，可以顯著提高酶的產(chǎn)量。例如，乳糖誘導(dǎo)β-半乳糖苷酶，纖維二糖誘導(dǎo)纖維素酶，蔗糖甘油單棕櫚酸誘導(dǎo)蔗糖酶的生物合成等。誘導(dǎo)物可以分3類：

酶的作用底物：青霉素是青霉素?；傅恼T導(dǎo)物；

酶的催化反應(yīng)產(chǎn)物：纖維二糖可誘導(dǎo)纖維素酶的產(chǎn)生；

底物的類似物：IPTG對β-半乳糖苷酶的效果要好于乳糖。第73頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四2.控制阻遏物的濃度據(jù)機理不同阻遏作用分為兩種：產(chǎn)物阻遏和分解代謝物阻遏。a.產(chǎn)物阻遏作用是由酶催化作用的產(chǎn)物或者代謝途徑的末端產(chǎn)物引起的阻遏作用。b.分解代謝物阻遏作用是由分解代謝物（葡萄糖等和其它容易利用的碳源等物質(zhì)經(jīng)過分解代謝而產(chǎn)生的物質(zhì)）引起的阻遏作用?？刂谱瓒粑锏臐舛仁墙獬瓒?、提高酶產(chǎn)量的有效措施。例如在β-半乳糖苷酶生產(chǎn)中，只有在培養(yǎng)基中不含有葡萄糖時才能夠大量誘導(dǎo)產(chǎn)酶。第74頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四2.控制阻遏物的濃度為了減少或者解除分解代謝物阻遏作用，應(yīng)當(dāng)控制培養(yǎng)基中葡萄糖等容易利用的碳源的濃度。采用其他較難利用的碳源，如淀粉等采用補料、分次流加碳源添加一定量的環(huán)腺苷酸（cAMP）對于受代謝途徑末端產(chǎn)物阻遏的酶，可以通過控制末端產(chǎn)物的濃度的方法使阻遏解除。第75頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四3.添加表面活性劑表面活性劑可以與細(xì)胞膜相互作用，增加細(xì)胞的透過性，有利于胞外酶的分泌，從而提高酶的產(chǎn)量。將適量的非離子型表面活性劑，如吐溫（Tween）、特里頓(Triton)等添加到培養(yǎng)基中，可以加速胞外酶的分泌，而使酶的產(chǎn)量增加。如霉菌發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶時，加1%吐溫可使酶產(chǎn)量提高數(shù)倍。由于離子型表面活性劑對細(xì)胞有毒害作用，尤其是季胺型表面活性劑（如‘新潔而滅’等）是消毒劑，對細(xì)胞的毒性較大，不能在酶的發(fā)酵生產(chǎn)中添加到培養(yǎng)基中。第76頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四4.添加產(chǎn)酶促進劑產(chǎn)酶促進劑是指可以促進產(chǎn)酶、但是作用機理未闡明清楚的物質(zhì)。例如，添加一定量的植酸鈣鎂，可使霉菌蛋白酶或者桔青霉磷酸二酯酶的產(chǎn)量提高1～20倍；添加聚乙烯醇可以提高糖化酶的產(chǎn)量。產(chǎn)酶促進劑對不同細(xì)胞、不同酶的作用效果各不相同，現(xiàn)在還沒有規(guī)律可循，要通過試驗確定所添加的產(chǎn)酶促進劑的種類和濃度。第77頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四酶生產(chǎn)過程的動力學(xué)1、酶生物合成的模式2、酶生產(chǎn)過程中細(xì)胞生長動力學(xué)3、酶生產(chǎn)過程中產(chǎn)酶動力學(xué)GoGoGo本章目錄第78頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四1、酶生物合成的模式細(xì)胞在一定條件下培養(yǎng)生長，其生長過程一般經(jīng)歷調(diào)整期、生長期、平衡期和衰退期等4個階段通過分析比較細(xì)胞生長與酶產(chǎn)生的關(guān)系,可以把酶生物合成的模式分為4種類型。即同步合成型，延續(xù)合成型，中期合成型和滯后合成型。

第79頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四同步合成型

酶的生物合成與細(xì)胞生長同步進行的一種酶生物合成模式。該類型酶的生物合成速度與細(xì)胞生長速度緊密聯(lián)系，又稱為生長偶聯(lián)型。屬于該合成型的酶，其生物合成伴隨著細(xì)胞的生長而開始；在細(xì)胞進入旺盛生長期時，酶大量生成；當(dāng)細(xì)胞生長進入平衡期后，酶的合成隨著停止。

大部分組成酶的生物合成屬于同步合成型，有部分誘導(dǎo)酶也按照此種模式進行生物合成。例如米曲霉在含有單寧或者沒食子酸的培養(yǎng)基中生長，在單寧或沒食子酸的誘導(dǎo)作用下，合成單寧酶（tanaseEC3.1.1.20）。細(xì)胞濃度mg/ml酶濃度U/ml總細(xì)胞濃度活細(xì)胞濃度胞外酶濃度胞內(nèi)酶濃度第80頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四延續(xù)合成型

酶的生物合成在細(xì)胞的生長階段開始，在細(xì)胞生長進入平衡期后，酶還可以延續(xù)合成一段較長時間。屬于該類型的酶可以是組成酶，也可以是誘導(dǎo)酶。例如，在黑曲霉在以半乳糖醛酸或果膠為單一碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，可以誘導(dǎo)聚半乳糖醛酸酶（Polygalacturonase，EC3.2.1.15）的生物合成。細(xì)胞濃度mg/ml酶濃度U/ml細(xì)胞濃度mg/ml酶濃度U/ml以半乳糖醛酸為誘導(dǎo)物以含有葡萄糖的果膠為誘導(dǎo)物第81頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四中期合成型

該類型的酶在細(xì)胞生長一段時間以后才開始，而在細(xì)胞生長進入平衡期以后，酶的生物合成也隨著停止。例如，枯草桿菌堿性磷酸酶（Alkalinephophatase，EC3.1.3.1)的生物合成模式屬于中期合成型。這是由于該酶的合成受到其反應(yīng)產(chǎn)物無機磷酸的反饋阻遏，而磷又是細(xì)胞生長所必不可缺的營養(yǎng)物質(zhì)，培養(yǎng)基中必須有磷的存在。這樣，在細(xì)胞生長的開始階段,培養(yǎng)基中的磷阻遏堿性磷酸酶的合成，只有當(dāng)細(xì)胞生長一段時間，培養(yǎng)基中的磷幾乎被細(xì)胞用完（低于0.01mmol/L）以后，該酶才開始大量生成。又由于堿性磷酸酶所對應(yīng)的mRNA不穩(wěn)定，其壽命只有30min左右，所以當(dāng)細(xì)胞進入平衡期后，酶的生物合成隨著停止。細(xì)胞濃度mg/ml酶濃度U/ml第82頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四滯后合成型

此類型酶是在細(xì)胞生長一段時間或者進入平衡期以后才開始其生物合成并大量積累。又稱為非生長偶聯(lián)型。許多水解酶的生物合成都屬于這一類型。

屬于滯后合成型的酶，之所以要在細(xì)胞生長一段時間甚至進入平衡期以后才開始合成，主要原因是由于受到培養(yǎng)基中存在的阻遏物的阻遏作用。只有隨著細(xì)胞的生長，阻遏物幾乎被細(xì)胞用完而使阻遏解除后，酶才開始大量合成。若培養(yǎng)基中不存在阻遏物，該酶的合成可以轉(zhuǎn)為延續(xù)合成型。該類型酶所對應(yīng)的mRNA穩(wěn)定性很好，可以在細(xì)胞生長進入平衡期后的相當(dāng)長的一段時間內(nèi)，繼續(xù)進行酶的生物合成。黑曲霉羧基蛋白酶生物合成放線菌素D對產(chǎn)酶的影響細(xì)胞濃度mg/ml酶濃度U/ml酶濃度U/ml酶濃度U/ml30℃22℃不加加入不加加入第83頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四理想的酶合成模式酶所對應(yīng)的mRNA的穩(wěn)定性以及培養(yǎng)基中阻遏物的存在是影響酶生物合成模式的主要因素。其中，mRNA穩(wěn)定性好的，可以在細(xì)胞生長進入平衡期以后，繼續(xù)合成其所對應(yīng)的酶；mRNA穩(wěn)定性差的，就隨著細(xì)胞生長進入平衡期而停止酶的生物合成；不受培養(yǎng)基中存在的某些物質(zhì)阻遏的，可以伴隨著細(xì)胞生長而開始酶的合成；受到培養(yǎng)基中某些物質(zhì)阻遏的，則要在細(xì)胞生長一段時間甚至在平衡期后，酶才開始合成并大量積累。在酶的發(fā)酵生產(chǎn)中，為了提高產(chǎn)酶率和縮短發(fā)酵周期，最理想的合成模式應(yīng)是延續(xù)合成型。因為屬于延續(xù)合成型的酶，在發(fā)酵過程中沒有生長期和產(chǎn)酶期的明顯差別。細(xì)胞一開始生長就有酶產(chǎn)生，直至細(xì)胞生長進入平衡期以后，酶還可以繼續(xù)合成一段較長的時間。對于其他合成模式的酶，可以通過基因工程\細(xì)胞工程等先進技術(shù),選育得到優(yōu)良的菌株,并通過工藝條件的優(yōu)化控制,使他們的生物合成模式更加接近于延續(xù)合成型。其中對于同步合成型的酶，要盡量提高其對應(yīng)的mRNA的穩(wěn)定性，為此適當(dāng)降低發(fā)酵溫度是可取的措施；對于滯后合成型的酶，要設(shè)法降低培養(yǎng)基中阻遏物的濃度，盡量減少甚至解除產(chǎn)物阻遏或分解代謝物阻遏作用，使酶的生物合成提早開始；而對于中期合成型的酶，則要在提高mRNA的穩(wěn)定性以及解除阻遏兩方面下功夫，使其生物合成的開始時間提前，并盡量延遲其生物合成停止的時間?；乇竟?jié)第84頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四2、酶生產(chǎn)過程中細(xì)胞生長動力學(xué)細(xì)胞在控制一定條件的培養(yǎng)基中生長的過程中,其生長速度受到細(xì)胞內(nèi)外各種因素的影響,變化比較復(fù)雜，情況各不相同。細(xì)胞生長動力學(xué)主要研究細(xì)胞生長速度以及外界環(huán)境因素對細(xì)胞生長速度影響的規(guī)律。1950年，法國的莫諾德(Monod)首先提出了表述微生物細(xì)胞生長的動力學(xué)方程。在培養(yǎng)過程中，細(xì)胞生長速率與細(xì)胞濃度成正比假設(shè)培養(yǎng)基中只有一種限制性基質(zhì)，而不存在其他生長限制因素時，μ為這種限制性基質(zhì)濃度的函數(shù)。KS

為莫諾德常數(shù)，是指比生長速率達到最大比生長速率一半時的限制性基質(zhì)濃度。第85頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四回本節(jié)限制性基質(zhì)的物料平衡式莫諾德方程是基本的細(xì)胞生長動力學(xué)方程。在發(fā)酵過程優(yōu)化以及發(fā)酵過程控制方面具有重要的應(yīng)用價值。不少學(xué)者從不同的情況出發(fā)或運用不同的方法，對莫諾德方程進行了修正，得出了適用于不同情況的各種動力學(xué)模型。連續(xù)培養(yǎng)時的方程變化形式第86頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四3、產(chǎn)酶動力學(xué)

產(chǎn)酶動力學(xué)主要研究細(xì)胞產(chǎn)酶速率以及各種環(huán)境因素對產(chǎn)酶速率的影響規(guī)律。產(chǎn)酶動力學(xué)的研究可以從整個發(fā)酵系統(tǒng)著眼，研究群體細(xì)胞的產(chǎn)酶速率及其影響因素，這稱為宏觀產(chǎn)酶動力學(xué)或這稱為非結(jié)構(gòu)動力學(xué)。也可以從細(xì)胞內(nèi)部著眼，研究細(xì)胞中酶合成速率及其影響因素，這謂之微觀產(chǎn)酶動力學(xué)或稱為結(jié)構(gòu)動力學(xué)。第87頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四在酶的發(fā)酵生產(chǎn)中，酶的產(chǎn)量高低，是發(fā)酵系統(tǒng)中群體細(xì)胞產(chǎn)酶的集中體現(xiàn)，宏觀產(chǎn)酶動力學(xué)的研究表明，產(chǎn)酶速率與細(xì)胞比生長速率、細(xì)胞濃度以及細(xì)胞產(chǎn)酶模式有關(guān)。

與生長相關(guān)與生長部分相關(guān)與生長無關(guān)第88頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四回本節(jié)常用的幾種模型第89頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四五動、植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶與微生物細(xì)胞相比，動物細(xì)胞和植物細(xì)胞具有各自不同的特性，需采用各自不同的培養(yǎng)工藝。

第90頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四動物細(xì)胞模式圖第91頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)第92頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四

植物、動物、微生物細(xì)胞的特性比較細(xì)胞種類植物細(xì)胞微生物細(xì)胞動物細(xì)胞細(xì)胞大小/um200～3001～1010～100倍增時間/h﹥120.3-6﹥15營養(yǎng)要求簡單簡單復(fù)雜光照要求大多數(shù)要求不要求不要求對剪切力敏感大多數(shù)不敏感非常敏感主要產(chǎn)物色素、藥物、香精、酶等醇、有機酸、氨基酸、抗生素、核苷酸、酶等疫苗、激素、單克隆抗體、酶等第93頁，共108頁，2023年，2月20日，星期四三者之間的差異主要有：植物細(xì)胞>動物細(xì)胞>微生物細(xì)胞。動物細(xì)胞、植物細(xì)胞的生產(chǎn)周期比微生物長。植物細(xì)胞和微生物細(xì)胞的營養(yǎng)要求較簡單。植物細(xì)胞的生長以及次級代謝物的生產(chǎn)要求一定的光照。植物細(xì)胞和動物細(xì)胞