水質(zhì) 丙烯酰胺的測定 方法驗證報告

方法驗證報告方法名稱：水質(zhì)丙烯酰胺的測定氣相色譜法方法編號：HJ697-2014驗證單位：***********有限公司驗證日期：*****年***月***日1、目的本方法驗證主要依據(jù)HJ168-2020環(huán)境監(jiān)測分析方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂技術(shù)導(dǎo)則編制的要求，從設(shè)備、環(huán)境條件、人員能力、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及試劑，以及檢出限、精密度和準(zhǔn)確度（參照HJ168-2020），以驗證實驗室能力滿足HJ697-2014的要求。2、方法簡介2.1適用范圍本本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測定水中丙烯酰胺的氣相色譜法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于地表水、地下水、工業(yè)廢水和生活污水中丙烯酰胺的測定。2.2方法原理在pH為1~2條件下，丙烯酰胺與新生溴發(fā)生加成反應(yīng)，生成a,卩-二溴丙酰胺。用乙酸乙酯萃取a,卩-二溴丙酰胺，萃取液經(jīng)無水硫酸鈉干燥、濃縮、定容后，用帶有電子捕獲檢測器的氣相色譜儀進(jìn)行分離和檢測，根據(jù)保留時間定性，外標(biāo)法定量。2.3儀器條件（實際驗證條件）進(jìn)樣口：250°C；分流比：10；進(jìn)樣量：1.0yL；柱溫：100C保持1min,以30C/min升溫至220C，保持5min,以20C/min升溫至240C，保持5min。載氣：氮氣；色譜柱流量：1.5mL/min。電子捕獲檢測器（ECD）：250Co2.4樣品采集與保存用潔凈的磨口玻璃瓶或具特氟龍材質(zhì)隔墊的棕色螺紋口玻璃瓶采集250mL樣品，于2C~5C下保存，7d內(nèi)完成萃取，萃取液可保存30do本次用于方法驗證采集的樣品編號為FS21YL110101。2.5分析步驟2.5.1校準(zhǔn)曲線取每次分析樣品時，均應(yīng)使用丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液（5.2）繪制工作曲線。取6只250mL碘量瓶，各加入100mL純水，分別加入適量的丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)使用溶液，配制成丙烯酰胺質(zhì)量濃度分別為0.20卩g/L,0.80卩g/L,3.00卩g/L,20.0卩g/L,70.0卩g/L,120卩g/L的標(biāo)準(zhǔn)系列。按照試樣的制備（2.5.2）步驟進(jìn)行處理，定容至10mL，按推薦的色譜條件進(jìn)行測定，以處理定容后的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列的濃度（卩g/L）為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的色譜峰響應(yīng)值（峰面積/峰高）為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線。2.5.2試樣的制備2.5.2.1量取100.0mL樣品置于250mL碘量瓶中，加入6.0mL硫酸溶液，混勻，2C~5C下放置30min。2.522取出碘量瓶，加入15.0g溴化鉀，溶解后加入10mL溴酸鉀溶液混勻，2°C?5°C下放置2h。2.5.2.3取出碘量瓶，邊振蕩邊逐滴加入硫代硫酸鈉溶液，直至溶液變成無色為止。2.524向碘量瓶中加入磁力攪拌子，在磁力攪拌器劇烈攪拌下緩慢加入30g無水硫酸鈉，待完全溶解后，加塞靜置10min。注1：在加入無水硫酸鈉過程中，不能使無水硫酸鈉結(jié)塊。2.5.2.5轉(zhuǎn)移上述試液至250mL分液漏斗，向分液漏斗中加入25mL乙酸乙酯，置于振蕩器上劇烈振蕩5min，靜置分層，重復(fù)萃取2次，取有機相。2.5.2.6用硅酸鎂凈化柱和無水硫酸鈉脫水凈化后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀和氮吹儀將萃取液濃縮至5mL左右，用乙酸乙酯定容至10.0mL，待測。2.6結(jié)果計算樣品中目標(biāo)物的含量按以下公式進(jìn)行計算：式中：C 樣品中丙烯酰胺的質(zhì)量濃度，yg/L；P—從工作曲線上查得的試樣中丙烯酰胺的質(zhì)量濃度，yg/L；V1 萃取液體積，mL；V——水樣體積，mL。3、儀器設(shè)備驗證情況標(biāo)準(zhǔn)要求實驗室配備氣相色譜儀：具電子捕獲檢測器。島津GC-2014，ECD檢測器。色譜柱1：石英毛細(xì)管柱，30mx0.32mm,內(nèi)涂聚乙二醇，膜厚0.25ym。色譜柱2：石英毛細(xì)管柱，30mx0.32mm,內(nèi)涂35%苯基-甲基聚硅氧烷，膜厚0.25ym?；蚱渌刃?xì)管色譜柱OV-1701,30m*0.32mm*0.5ym。振蕩器。水平振蕩器濃縮裝置：旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、氮吹儀或其他同等性能的設(shè)備。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、氮吹儀實驗室配備的儀器和設(shè)備滿足標(biāo)準(zhǔn)要求。4、環(huán)境條件驗證情況環(huán)境條件符合控制要求，詳見《環(huán)境監(jiān)控記錄表》，儀器房內(nèi)設(shè)有溫度濕度計及記錄表，分析測試人員每日對溫度濕度進(jìn)行監(jiān)控，監(jiān)控范圍為溫度：15-35C，濕度：20%-80%。

5、人員能力驗證情況該項目目前配備3名專業(yè)技術(shù)人員，通過培訓(xùn)考核并持證上崗，見表1。表1參加驗證人員情況登記表姓名所學(xué)專業(yè)從事分析工作年限職稱姓名所學(xué)專業(yè)從事分析工作年限職稱考核記錄詳見人員培訓(xùn)檔案及《質(zhì)量考核結(jié)果評價表》6、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及試劑驗證情況標(biāo)準(zhǔn)要求實驗室配備乙酸乙酯：農(nóng)殘級乙酸乙酯：分析純。溴化鉀（KBr）。溴化鉀（KBr），分析純。溴酸鉀溶液：c（KBrO3）=0.1mol/L溴酸鉀（KBrO3），分析純。無水硫酸鈉，在400°C灼燒4ho無水硫酸鈉，分析純，在400C灼燒4ho丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液（ch2chconh2）：p=100mg/L，溶劑為甲醇。市售有證甲醇中丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，p100mg/Lo硫代硫酸鈉溶液：c（Na2S2O3）=1.0mol/Lo硫代硫酸鈉（Na2S2O3），優(yōu)級純。硫酸溶液：c(H2SO4)~3mol/Lo硫酸（H2SO4），優(yōu)級純。實驗室配備的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及試劑滿足標(biāo)準(zhǔn)要求。7、檢出限、精密度和準(zhǔn)確度（參照HJ168-2020）檢出限、精密度和準(zhǔn)確度實驗原始測試數(shù)據(jù)詳見附表《檢出限、精密度、準(zhǔn)確度原始數(shù)據(jù)匯總表》。7.1檢出限取編號為FS21YL110101J1的樣品7份，按照樣品分析的全部步驟（2.5），進(jìn)行7次平行測定。計算7次平行測定的標(biāo)準(zhǔn)偏差，按以下公式計算方法檢出限。MDL=I（r_lj0i99）XS式中：MDL—方法檢出限；n—樣品的平行測定次數(shù)；t—自由度為n-1，置信度為99%時的t分布（單側(cè)）；S—n次平行測定的標(biāo)準(zhǔn)偏差。其中，當(dāng)自由度為n-1，置信度為99%時的t值可參考表2表2t表值

平行測定次數(shù)（n）自由度（n-1）E(n-LA99)763.143872.998982.8961092.82111102.76416152.60221202.528MDL值計算出來后，需判斷其合理性：按照樣品分析的全部步驟，對濃度或含量為估計方法檢出限2~5倍的樣品進(jìn)行n（n>7）次平行測定。計算n次平行測定的標(biāo)準(zhǔn)偏差，按照上式計算方法檢出限。對于針對單一組分的分析方法，如果樣品濃度超過計算出的方法檢出限10倍，或者樣品濃度低于計算出的方法檢出限，則都需要調(diào)整樣品濃度重新進(jìn)行測定。選擇比值在3~5之間的MDL作為該化合物的MDL。本次方法驗證檢出限詳見附表1。7.2測定下限以4倍檢出限作為測定下限，本次方法驗證測定下限詳見附表1。7.3精密度分別對地下水樣品（樣品編號為FS21YL110101）加標(biāo)的方式開展精密度測定，加標(biāo)濃度分別為低、中、高三個不同濃度系列（見表3）。加標(biāo)樣品按照樣品分析的全部步驟，進(jìn)行6次平行測定。計算不同濃度樣品的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差等各項參數(shù)。表3不同濃度地下水樣中濃度值 單位：yg/L濃度水平樣品編號濃度水平低濃度/（yg/L）FS21YL110101J1平行(1?6)0.200中濃度/(yg/L)FS21YL110101J2平行(1?6)1.80高濃度/（yg/L）FS21YL110101J3平行(1?6)10.0對某一水平濃度的樣品在實驗室內(nèi)進(jìn)行6次平行測定，實驗室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差按如下公式（2）、（3）、（4）進(jìn)行計算：（2）RSD,=nRSD,=(3)(4)式中：xk—實驗室內(nèi)對某一濃度水平樣品進(jìn)行的第k次測試結(jié)果；x—實驗室對某一濃度水平樣品測試的平均值；S—實驗室對某一濃度水平樣品測試的標(biāo)準(zhǔn)偏差；RSD—實驗室對某一濃度水平樣品測試的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。本次方法驗證精密度詳見附表2。7.4準(zhǔn)確度7.4.1實際樣品加標(biāo)測試對樣品編號為FS21YL110101的實際樣品加標(biāo)，分別進(jìn)行6次平行測定。實際樣品加標(biāo)后目標(biāo)物濃度值見表4。分別計算樣品的加標(biāo)回收率，加標(biāo)回收率按如下公式（5）進(jìn)行計算表4實際樣品加標(biāo)濃度值 單位：yg/L濃度水平樣品編號濃度水平低濃度/（yg/L）FS21YL110101J1平行（1?6）0.200中濃度/（yg/L）FS21YL110101J2平行（1?6）1.80高濃度/（yg/L）FS21YL110101J3平行（1?6）100E——第i個實驗室對加標(biāo)樣品測試的平均值；// 加標(biāo)量T￡——第r牛實驗室的力II標(biāo)回收率；本次方法驗證準(zhǔn)確度詳見附表3。7?5實際樣品測試對樣品編號為FS21YL110101的實際樣品測試，結(jié)果見表5。表5實際樣品測試結(jié)果FS21YL110FS21YL110ZYTDX2021ZYTDX2021方法檢單位101101P001J2平行1001J3平行1出限丙烯酰胺NDND1.4885.50.05yg/L8、結(jié)論從設(shè)備、環(huán)境條件、人員能力、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及試劑，以及檢出限、精密度和準(zhǔn)確度的驗證結(jié)果說明實驗室已具備《水質(zhì)丙烯酰胺的測定氣相色譜法HJ697-2014》方法的測試能力。

9、附件附表檢出限、精密度、準(zhǔn)確度原始數(shù)據(jù)匯總表編制 日期 編制 日期 批準(zhǔn) 日期 附表檢出限、精密度、準(zhǔn)確度原始數(shù)據(jù)匯總表1、方法檢出限、測定下限測試數(shù)據(jù)表1-1方法檢出限、測定下限測試數(shù)據(jù)表平行樣品編號丙烯酰胺/////測定結(jié)果（昭/L）10.198/////20.193/////30.207/////40.213/////50.216/////60.188/////70.226/////平均值'x；（ug/L）0.203-////標(biāo)準(zhǔn)偏差S；（ug/L）0.0136-////t值（無量綱）3.143-////檢出限（ug/L）0.05-////標(biāo)準(zhǔn)方法檢出限（ug/L）0.07-////測定下限（Ug/L）0.20-////標(biāo)準(zhǔn)方法測定下限（ug/L）0.28-////判定：驗證結(jié)果滿足標(biāo)準(zhǔn)要求2、方法精密度測試數(shù)據(jù)表2-1精密度測試數(shù)據(jù)平行樣品編號丙烯酰胺///備注plp2p3/////////10.1981.4885.5//////////20.1931.858&5//////////測定結(jié)果30.2071.5295.2//////////（ug/L）40.2131.47100//////////50.2161.6986.9//////////60.1881.6896.9//////////標(biāo)準(zhǔn)偏差Si（ug/L）0.01130.1515.98//////////平均值'xi（ug/L）0.2031.6292.2//////////相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSDi（%）5.69.36.5//////////標(biāo)準(zhǔn)方法RSD（%）要求<20///判定驗證結(jié)果滿足標(biāo)準(zhǔn)要求

3、方法準(zhǔn)確度測試數(shù)據(jù)表3-1加標(biāo)測試數(shù)據(jù)平行樣品編號阿特拉津加標(biāo)量濃度1濃度2濃度3(gg)樣品加標(biāo)樣品樣品加標(biāo)樣品樣品加標(biāo)樣品低中高測定結(jié)果（gg/L）10.000.1980.001.480.0085.50.0200.18010.020.000.1930.001.850.0088.50.0200.18010.030.000.2070.001.520