動物急性毒性實驗報告

生物工程分解實驗動物急性毒性實驗實驗陳說集班級生工1411學(xué)號姓名姑蘇科技大學(xué)化學(xué)生物與資料工程學(xué)院2017年實驗室學(xué)生守則.嚴(yán)苛依如實驗室各項規(guī)章軌制和治理舉措,折服教師及實驗技巧人員的指點..嚴(yán)苛依據(jù)實驗懇求,做好實驗預(yù)習(xí),實驗以前5分鐘進(jìn)入實驗室,及時.精準(zhǔn)地達(dá)成實驗義務(wù),量力而為地達(dá)成實驗陳說,根絕故弄玄虛.三.嚴(yán)苛執(zhí)行操控劃定,愛惜儀器裝備及對象.凡不按教師的指點擅自操作惹起儀器.裝備損壞者,應(yīng)予賠償..愛惜實驗室公共財物,節(jié)儉水電.資料和試劑.未經(jīng)允許不得任意挪動非實驗需用的其余儀器,不得任意拆裝儀器或?qū)x器.對象帶至室外..持實驗室的嚴(yán)明寂靜,不得高聲鼓噪.嘻鬧,禁止在實驗室內(nèi)吸煙和吃器材..提防事變,保證實驗室安穩(wěn),發(fā)明平時情況,應(yīng)及時向相關(guān)教師和管理人員陳說.七.每次實驗停止后,自動整改好儀器裝備,清賬所借器材,關(guān)閉電源.姑蘇科技大學(xué)生物實驗中間學(xué)生實驗報告生物工程分解實驗水源,按指點先生的懇求做好實驗停止工作及室表里的潔凈衛(wèi)生工作,經(jīng)指點先生允許后,方可分開.姑蘇科技大學(xué)生物實驗中間學(xué)生實驗報告生物工程分解實驗預(yù)習(xí)報告名稱動物急性毒性實驗日期2017實驗?zāi)繕?biāo)和懇求：使學(xué)生懂得毒理學(xué)商討中動物實驗的常規(guī)操控方法和技巧;懂得和控制為了測定一種未知的情況化學(xué)物對有機(jī)體是不是安穩(wěn)的,一定進(jìn)行哪些實驗,獲取哪些須要的數(shù)據(jù);這些實驗的根本步伐是什么,實驗數(shù)據(jù)應(yīng)該奈何辦理.懂得和控制實驗動物的選擇.抓取.常規(guī)染毒和生物質(zhì)料的采集方法等內(nèi)容.深造和控制急性毒性實驗和生物指標(biāo)實驗的目標(biāo),道理,以及測定相關(guān)的參數(shù),如多半致去世劑量,發(fā)展控制效應(yīng)等所須要的方法和步伐.實驗資料：活環(huán)毛蚓重要儀器：人工氣象箱,分光光度計,冷凍離心計心情,試管13支,移液器,振蕩水浴鍋,燒杯,研缽等重要步伐：清腸：遴選必然命量擁有生殖環(huán)帶的健康蚯蚓,用蒸餾水沖洗,放于燒杯中,用保鮮膜封口,解剖針扎孔.將燒杯置于溫度為20±2℃,濕度約75%的人工氣象箱中清腸24h.溶液配制：在直徑18cm的造就皿(或以1000mL燒杯取代)底鋪襯濾紙,以恰好遮住皿底為宜.按準(zhǔn)備實驗一定的劑量,配制系列濃度,取適當(dāng)?shù)谷朐炀兔笾?以恰好淹沒濾紙為宜濾紙實驗(1).將清腸后的蚯蚓用去離子水沖刷潔凈,濾紙吸干體表水分(2).每組10條蚯蚓分別稱重,丈量體長,供試(3).每一造就皿放入10條蚯蚓(4).保鮮膜封口,解剖針扎孔.造就與不雅察將造就皿置于人工氣象箱中造就,設(shè)置尺度實驗前提：溫度為20±2℃,濕度為75±7%;光照為1333lx（間歇光照,即12h光照,12h陰暗）.籌算Cd2+流露后蚯蚓18h的LC50.24h的LC50.低濃度Cd2+急性毒性實驗(l).在一定蚯蚓的24hLC50后,進(jìn)行蚯蚓急性毒性實驗.設(shè)置空白對照組,空白對照組用去離子水取代受試物;染毒實驗前頻頻上述（1）步伐的清腸.(2).在蚯蚓的致去世規(guī)模內(nèi)設(shè)置4個濃度梯度（0.1/5LC50.1/3LC50.1/2LC50）進(jìn)行蚯蚓急性毒性實驗.每組8條.(3).實驗24h后取各濃度辦理組蚯蚓3條做平行實驗,洗凈剪取其環(huán)帶前部分,用磷酸緩沖液洗失意概略血液,用濾紙吸干水分,放入研缽加2mL磷酸緩沖液進(jìn)行研磨,再進(jìn)行離心（9,000r·min-1）10min,上清液即為粗酶液.(4).采納改進(jìn)鄰苯三酚自氧化法測定SOD活性.①鄰苯三酚自氧化速度的測定：取·L-1Tris-HCl（）緩沖液,4.2mL蒸餾水,混勻后在25℃水浴保溫20min,取出后馬上參加25℃預(yù)熱過的3mmolL-1鄰苯三酚0.3mL（以10mmol·L-1HCl配制,空白姑蘇科技大學(xué)生物實驗中間學(xué)生實驗報告生物工程分解實驗-1管用10mmol·LHCl取代鄰苯三酚的HCl溶液）,在25℃恒溫水浴鍋中水浴,矯捷搖勻倒入比色皿（光徑1cm）,每隔30s在325nm處測定吸光度A值1次,共測3min.籌算線性規(guī)模內(nèi)每分鐘A的增值,此即為鄰苯三酚的自氧化速度.②樣品中SOD酶活氣測定：參加鄰苯三酚前,先參加必然體積的SOD粗酶液（約0.2mL,需稀釋）,蒸餾水減少響應(yīng)體積（即粗酶液和蒸餾水整體積為4.2mL）,其余均與上述①中所述一致,籌算加粗酶液后鄰苯三酚自氧化速度.需稀釋至3min內(nèi)數(shù)值均有更改;數(shù)值大于1.③每毫升反響液中,每分鐘控制鄰苯三酚自氧化速度達(dá)50%的酶量界說為一個酶單位.酶活性單位的籌算公式以下：教師署名：姑蘇科技大學(xué)生物實驗中間學(xué)生實驗報告

生物工程分解實驗實驗陳說動物急性毒性實驗一、實驗?zāi)繕?biāo)：使學(xué)生懂得毒理學(xué)商討中動物實驗的常規(guī)操控方法和技巧;一種未知的情況化學(xué)物對有機(jī)體是不是安穩(wěn)的,一定進(jìn)行哪些實驗據(jù);這些實驗的根本步伐是什么,實驗數(shù)據(jù)應(yīng)該奈何辦理.二.實驗道理

懂得和控制為了測定,獲取哪些須要的數(shù)濾紙接觸法毒性實驗簡單易行

,實驗光陰短

,實驗成本較低

,可對受試物毒性進(jìn)行初篩.將蚯蚓與濕潤的濾紙上的受試物接觸,可測定泥土中受試物對蚯蚓的潛伏影響.動物機(jī)體中有一套實用的抗氧化防守系統(tǒng)（Antioxidantdefense）,包括過氧化物歧化酶（Superoxidedismutase,SOD）.谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathioneperoxidase,GPx）.過氧化氫酶（Catalase,CAT）等,它們可分化進(jìn)入生物體有傷害感動的異源氧化物.由于能反響多種污染物的毒性,而且其更改可定量檢測,是以抗氧化酶常被用作指導(dǎo)情況污染的初期預(yù)警

,是分子生態(tài)毒理學(xué)生物標(biāo)志物的商討熱點之.三.實驗資料與方法實驗資料與試劑：活環(huán)毛蚓氯化鎘,Tris-HCl溶液,鄰苯三酚,磷酸緩沖液實驗儀器：人工氣象箱,分光光度計,冷凍離心計心情,試管13支,移液器,振蕩水浴鍋,燒杯,研缽.實驗方法：清腸將直徑11cm的濾紙鋪于1000mL燒杯杯底（或造就皿）,加少許水,以剛淹沒濾紙為宜.遴選必然命量擁有生殖環(huán)帶的健康蚯蚓,用蒸餾水沖洗,放于燒杯中,用保鮮膜封口,解剖針扎孔.將燒杯置于溫度為20±2℃,濕度約75%的人工氣象箱中清腸24h.溶液配制在直徑18cm的造就皿(或以1000mL燒杯取代)底鋪襯濾紙,以恰好遮住皿底為宜.姑蘇科技大學(xué)生物實驗中間學(xué)生實驗報告生物工程分解實驗按準(zhǔn)備實驗一定的劑量,配制系列濃度,取適當(dāng)?shù)谷朐炀兔笾?以恰好淹沒濾紙為宜.濾紙實驗(1).將清腸后的蚯蚓用去離子水沖刷潔凈,濾紙吸干體表水分.(2).每組10條蚯蚓分別稱重,丈量體長,供試.(3).每一造就皿放入10條蚯蚓.(4).保鮮膜封口,解剖針扎孔.造就與不雅察(l).將造就皿置于人工氣象箱中造就,設(shè)置尺度實驗前提：溫度為20±2℃,度為75±7%;光照為1333lx（間歇光照,即12h光照,12h陰暗）.(2).在20±2℃情況造就.(3).18h.24h各計數(shù)1次,記錄去世亡數(shù),同時還有蚯蚓的病理癥狀和行動.體對針刺無反響判為去世亡.24h后每組活蚯蚓分別稱重,丈量體長.24h后停止實驗(4).籌算Cd2+流露后蚯蚓18h的LC50.24h的LC50.

濕蚓.低濃度Cd2+急性毒性實驗(l).在一定蚯蚓的24hLC50后,進(jìn)行蚯蚓急性毒性實驗.設(shè)置空白對照組,空白對照組用去離子水取代受試物;染毒實驗前頻頻上述（1）步伐的清腸.(2).在蚯蚓的致去世規(guī)模內(nèi)設(shè)置4個濃度梯度（0.1/5LC50.1/3LC50.1/2LC50）進(jìn)行蚯蚓急性毒性實驗.每組8條.(3).實驗24h后取各濃度辦理組蚯蚓3條做平行實驗,洗凈剪取其環(huán)帶前部分,用磷酸緩沖液洗失意概略血液,用濾紙吸干水分,放入研缽加2mL磷酸緩沖液進(jìn)行研磨,再進(jìn)行離心（9,000r?min-1）10min,上清液即為粗酶液.(4).采納改進(jìn)鄰苯三酚自氧化法測定SOD活性.①?L-1Tris-HCl（pH=8.2）緩沖液,4.2mL蒸餾水,混勻后在25℃水浴保溫20min,取出后馬上參加25℃預(yù)熱過的3mmolL-1鄰苯三酚0.3mL（以10mmol?L-1HCl配制,空白管用10mmol?L-1HCl取代鄰苯三酚的HCl溶液）,在25℃恒溫水浴鍋中水浴,矯捷搖勻倒入比色皿（光徑1cm）,每隔30s在325nm處測定吸光度A值1次,共測3min.籌算線性規(guī)模內(nèi)每分鐘A的增值,此即為鄰苯三酚的自氧化速度.②樣品中SOD酶活氣測定：參加鄰苯三酚前,先參加必然體積的SOD粗酶液（約0.2mL,需稀釋）,蒸餾水減少響應(yīng)體積（即粗酶液和蒸餾水整體積為4.2mL）,其余均與上述①中所述一致,籌算加粗酶液后鄰苯三酚自氧化速度.需稀釋至3min內(nèi)數(shù)值均有更改;數(shù)值大于1.四.實驗成就與解析：1.受試物的根本物化性質(zhì)

;實驗動物的豢養(yǎng)前提（包括溫度

.

濕度.

光照前提等）

.姑蘇科技大學(xué)生物實驗中間學(xué)生實驗報告

生物工程分解實驗氯化鎘：外不雅與性狀：無色單斜晶體熔點(℃)：568沸點(℃)：960融化性：易溶于水,溶于甲醇.乙醇.水溶液中的鎘離子可被硫離子積淀.蚯蚓的豢養(yǎng)前提：溫度18-22℃,光照,擔(dān)保濕度染毒辦理前后蚯蚓外不雅發(fā)展發(fā)育更改表（體重.體長.行動等）.表1Cd2+染毒辦理前蚯蚓外不雅發(fā)展發(fā)育更改表Cd2+辦理濃度（mgL-1）項目0(CK)12345數(shù)量（條）111111111312整體重（g）均勻體重（g）均勻體長(cm)行動正常蠕動正常蠕動正常蠕動正常蠕動正常蠕動正常蠕動表2Cd2+染毒辦理24h后蚯蚓外不雅發(fā)展發(fā)育更改表項目Cd2+辦理濃度（mgL-1）0(CK)12345數(shù)量（條）1111111040整體重（g）0均勻體重0（g）均勻體長0(cm)行動正常蠕動蠕動削弱蠕動削弱蠕動削弱蠕動削弱無解析：由表1,2可見除了全體去世亡的蚯蚓以外,在體重和體長方面,其余各組的蚯蚓整體重和均勻體重均減小,均勻體長均減小,濃度最高的一組減小的幅度最大.在蚯蚓的行動運動方面,染毒前蚯蚓活氣興盛,正常蠕動,Cd2+辦理24小時以后,除對照組里的蚯蚓正常蠕動以外,其余各組的蚯蚓的行動運動均遇到不合程度的影響,蠕動速度跟姑蘇科技大學(xué)生物實驗中間學(xué)生實驗報告生物工程分解實驗著Cd2+的濃度高升而漸漸削弱3.致去世時各組蚯蚓個其余形態(tài)息爭剖不雅察：不雅察成就重要部位（環(huán)狀帶）.解剖后蚯蚓的形態(tài)不雅察：1組為對照組,可清楚地不雅察到蚯蚓的體腔清楚透明,血管呈鮮紅色,腸道為正常的棕灰色,生殖腺呈白色球狀,對稱分布與雙側(cè),結(jié)構(gòu)完整.2組染毒濃度較低,與1組差距不大,但血管色彩稍微變深,腸道稍微發(fā)黑.從3組初步,隨著染毒濃度的高升,體色漸漸變淺,體腔漸漸渾濁,血管色彩變深發(fā)黑,腸道色彩發(fā)黑,和體腔粘合在一塊,生殖腺破碎化膿,色彩稍微發(fā)黃,不再是純白色的球狀.染毒18小時蚯蚓形態(tài)不雅察：1組為對照組,2-6組濃度梯度漸漸增加,由上圖不雅察得,除對照組體表正常,蠕動正常以外,2-4組未去世的蚯蚓消逝部分癥狀,蠕動才能明顯削弱,身材變軟萎縮,體色變淺,環(huán)帶腫大充血呈黃色,有黃色體液溢出.5組和6組兩個濃度梯度蚯蚓有斷裂現(xiàn)象,有的斷成多節(jié),呈串珠狀;濾紙上有血跡.染毒24小時蚯蚓形態(tài)不雅察：1組為對照組,由于18小時第6組全體去世亡,因此2-5組濃度梯度漸漸增加,對照組體表正常,但由于缺乏營養(yǎng),蠕動速度減慢,成團(tuán)會合在一路,2-3組正常存活,但上述癥狀加倍明顯,且成團(tuán)會合,4-5組消逝去世亡,去世亡的蚯蚓癥狀如上所述,而存活的蚯蚓體色明顯變淺,幾乎不蠕動,相同成團(tuán)會合.記錄不合受試物濃度對應(yīng)的去世亡情況,以劑量對數(shù)為橫坐標(biāo),去世亡百分率為縱坐標(biāo)作圖并求得多半致去世濃度LC50.表3Cd2+染毒辦理18h后蚯蚓的去世亡情況統(tǒng)計表Cd2+辦理濃度（mgL-1）項目0(CK)12345數(shù)量（條）111111111312去世亡數(shù)（條）0000712去世亡率（%）000053.8%100%均勻去世亡數(shù)（條）均勻去世亡率25.6%姑蘇科技大學(xué)生物實驗中間學(xué)生實驗報告生物工程分解實驗%）籌算出18h的LC50表4Cd2+染毒辦理24h后蚯蚓的去世亡情況統(tǒng)計表項目Cd2+辦理濃度（mgL-1）0(CK)12345數(shù)量（條）111111111312去世亡數(shù)（條）0001912去世亡率（%）0009.1%33.3%100%均勻去世亡數(shù)（條）均勻去世亡率29.7%（%）籌算出24h的LC50=姑蘇科技大學(xué)生物實驗中間學(xué)生實驗報告生物工程分解實驗籌算并解析Cd2+辦理對環(huán)毛蚓SOD酶活的影響.鄰苯三酚的自氧化速度Cd2+辦理對環(huán)毛蚓SOD酶活的影響遍地理樣品的鄰苯三酚的自氧化速度Cd2+辦理對環(huán)毛蚓SOD酶活的影響Cd2+辦理濃度（mgL-1）SOD酶活0(CK)1/5LC501/3LC501/2LC50123均勻酶活性姑蘇科技大學(xué)生物實驗中間學(xué)生實驗報告生物工程分解實驗解析：隨著Cd2+辦理濃度增加,環(huán)毛蚓SOD的均勻酶活性增加.由于SOD（超氧化物歧化酶）是生物體內(nèi)重要的抗氧化酶,擁有特其余心理活性,能消除生物體在新陳代謝進(jìn)度中產(chǎn)生的有害物質(zhì),因此隨著Cd2+濃度高升,環(huán)毛蚓體內(nèi)代謝有毒物質(zhì)的速度也愈來愈快,是以SOD酶活性愈來愈高.蛋白質(zhì)的測定Cd2+辦理濃度（mgL-1）0(CK)1/5LC501/3LC501/2LC50體重