人教動(dòng)物細(xì)胞工程課前練

人教動(dòng)物細(xì)胞工程課前練第1頁(yè)/共28頁(yè)（一）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)概念：從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的

，將它分散成

，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞

。組織單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖過(guò)程：第2頁(yè)/共28頁(yè)

從健康動(dòng)物體內(nèi)取出

，

，用

酶或

酶處理一段時(shí)間，這樣組織就會(huì)分散成

。然后，用

將分散的細(xì)胞稀釋制成

，再將其放入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，置于適宜環(huán)境中培養(yǎng)。懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為

。這要求培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面

、

，易于貼附。當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互

，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，該現(xiàn)象稱為

。組織塊剪碎胰蛋白膠原蛋白單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)液細(xì)胞懸液細(xì)胞貼壁光滑無(wú)毒接觸接觸抑制第3頁(yè)/共28頁(yè)通常將動(dòng)物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為

。貼滿瓶壁的細(xì)胞需要重新用

等處理，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，讓細(xì)胞繼續(xù)增殖，這樣的培養(yǎng)過(guò)程稱為

培養(yǎng)，這樣的細(xì)胞一般傳至

代后就不易傳下去了。一般來(lái)說(shuō)，細(xì)胞傳至

代左右時(shí)，增殖會(huì)逐漸

，以至于完全

，這時(shí)部分細(xì)胞的

可能會(huì)發(fā)生變化。繼續(xù)培養(yǎng)時(shí)，少部分細(xì)胞獲得

，朝等同于癌細(xì)胞的方向發(fā)展。目前使用的或冷凍保存的正常細(xì)胞為

代以內(nèi)，以保持正常的

。原代培養(yǎng)胰蛋白酶?jìng)鞔?010—50緩慢停止細(xì)胞核型不死性10二倍體核型第4頁(yè)/共28頁(yè)過(guò)程小結(jié)：動(dòng)物的組織器官細(xì)胞懸浮液10代、細(xì)胞核型發(fā)生改變剪碎制成傳代培養(yǎng)遺傳物質(zhì)改變胰蛋白酶原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)分散成單個(gè)細(xì)胞（或膠原蛋白酶）第5頁(yè)/共28頁(yè)條件：1、

、

環(huán)境2、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)水、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、葡萄糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、動(dòng)物血清等無(wú)毒無(wú)菌對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行

處理；還要在培養(yǎng)液中添加一定量的

，以防止污染。無(wú)菌抗生素還應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，以便清除代謝產(chǎn)物。第6頁(yè)/共28頁(yè)3、溫度和PH4、氣體環(huán)境PH:95%空氣和5%CO2溫度：36.5+0.50C7.2~7.4供給細(xì)胞代謝所必需的O2維持培養(yǎng)液的PH第7頁(yè)/共28頁(yè)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用１、大規(guī)模生產(chǎn)有重要價(jià)值的生物制品。２、解決為大面積燒傷病人移植皮膚問(wèn)題。３、檢測(cè)有關(guān)物質(zhì)毒性。４、用于基因工程。疫苗、干擾素、單克隆抗體等第8頁(yè)/共28頁(yè)比較動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目原理培養(yǎng)基結(jié)果培養(yǎng)目的植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖固體培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、植物激素等液體培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、血清、血漿等植物體細(xì)胞快速繁殖，培育無(wú)病毒植株等獲得細(xì)胞的產(chǎn)物或細(xì)胞等第9頁(yè)/共28頁(yè)也稱_________，是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程，融合后形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為_______。（二）動(dòng)物細(xì)胞融合概念：細(xì)胞雜交雜交細(xì)胞第10頁(yè)/共28頁(yè)物理法化學(xué)法生物法：動(dòng)物細(xì)胞A動(dòng)物細(xì)胞B雜種細(xì)胞誘導(dǎo)融合滅活的病毒過(guò)程:（最常用）第11頁(yè)/共28頁(yè)原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性優(yōu)點(diǎn):突破了

方法的局限，使

_______雜交成為可能應(yīng)用：制造

.意義：研究細(xì)胞

、細(xì)胞

、腫瘤和生物新品種

等的重要手段。有性雜交遠(yuǎn)緣單克隆抗體遺傳免疫育種第12頁(yè)/共28頁(yè)

長(zhǎng)期以來(lái)，人們?yōu)榱双@得抗體，采用的方法是向動(dòng)物體內(nèi)注射某種

，使動(dòng)物產(chǎn)生

，然后從動(dòng)物血清中分離所需的抗體。這種方法不僅產(chǎn)量

、純度

，而且制備的抗體特異性

。抗體抗原低低差（三）單克隆抗體第13頁(yè)/共28頁(yè)

哺乳動(dòng)物感染

（如病毒、細(xì)菌等），體內(nèi)會(huì)形成相應(yīng)的

細(xì)胞，這種細(xì)胞能分泌抗體，凝聚和殺死這些病原體。動(dòng)物在免疫反應(yīng)的過(guò)程中，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性

種類可達(dá)百萬(wàn)種以上，但是每一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌

特異性抗體，而且B淋巴細(xì)胞是

無(wú)限增殖的。病原體B淋巴抗體一種不可能第14頁(yè)/共28頁(yè)第15頁(yè)/共28頁(yè)小鼠培養(yǎng)的骨髓瘤細(xì)胞Ｂ淋巴細(xì)胞融合篩選培養(yǎng)基培養(yǎng)注射抗原骨髓瘤細(xì)胞多種雜交

細(xì)胞篩選能產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)單克隆抗體注射制備單克隆抗體的過(guò)程第16頁(yè)/共28頁(yè)

用

對(duì)小鼠進(jìn)行注射，使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)，從免疫反應(yīng)小鼠的脾臟細(xì)胞中提取相應(yīng)的

細(xì)胞，再設(shè)法與骨髓瘤細(xì)胞融合，再用特定的

培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。在該培養(yǎng)基上，

的親本細(xì)胞和

具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死亡，只有融合的

細(xì)胞才能生長(zhǎng)。這種

細(xì)胞的特點(diǎn)是既能迅速大量

，又能產(chǎn)生

?？乖瑽淋巴選擇性未融合融合的雜種雜種繁殖專一的抗體第17頁(yè)/共28頁(yè)

對(duì)上述經(jīng)選擇性培養(yǎng)的_____細(xì)胞，還需進(jìn)行_____培養(yǎng)和____檢測(cè)，經(jīng)多次篩選，就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需____的細(xì)胞。最后，將______細(xì)胞在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng)，或注射到小鼠的腹腔內(nèi)增殖，這樣，就可以提取出大量的______________.雜交瘤克隆化抗體抗體雜交瘤抗體單克隆第18頁(yè)/共28頁(yè)應(yīng)用：1、作為體外

試劑；特點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高，并可大量制備。特點(diǎn)：診斷準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速

由于純度高、特異性強(qiáng)，所以能準(zhǔn)確地識(shí)別各種抗原物質(zhì)的細(xì)微差異，并跟一定的抗原發(fā)生特異性結(jié)合。

利用__________的單克隆抗體，在特定的組織中______的技術(shù)，可定為診斷腫瘤、心血管畸形等疾病。同位素標(biāo)記成像第19頁(yè)/共28頁(yè)2、用于治療

和運(yùn)載

；“生物導(dǎo)彈”：疾病藥物具有選擇性具有殺傷力主要用于_____治療癌癥單克隆抗體+放射性同位素、化學(xué)藥物或細(xì)胞毒素第20頁(yè)/共28頁(yè)（四）動(dòng)物細(xì)胞核移植概念：是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的______，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的_____細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的_____，這個(gè)新______的最終發(fā)育為_________。（克隆動(dòng)物）細(xì)胞核卵母胚胎胚胎動(dòng)物個(gè)體第21頁(yè)/共28頁(yè)過(guò)程：（以奶牛為例）將胚胎移入受體母牛體內(nèi)高產(chǎn)奶牛體細(xì)胞采集卵母細(xì)胞，并培養(yǎng)到減Ⅱ中期減Ⅱ中期卵母細(xì)胞去核供體細(xì)胞培養(yǎng)將供體細(xì)胞核注入去核卵母細(xì)胞構(gòu)建重組胚胎生出犢牛（克隆牛）(用物理或化學(xué)方法，如電脈沖、鈣離子載體、乙醇、蛋白酶合成抑制劑等，激活受體細(xì)胞，完成分裂和發(fā)育）第22頁(yè)/共28頁(yè)種類：胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植（難度高）

由于動(dòng)物胚胎細(xì)胞分化程度___，恢復(fù)其全能性相對(duì)_____，而動(dòng)物體細(xì)胞分化程度____，恢復(fù)其全能性十分_____，因此，動(dòng)物___細(xì)胞核移植的難度也就明顯高于_____細(xì)胞核移植。低容易高體胚胎困難第23頁(yè)/共28頁(yè)應(yīng)用前景：

在畜牧業(yè)生產(chǎn)中，可以加速家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群_____；在保護(hù)瀕危物種方面，可望利用________________增加這些動(dòng)物的存活數(shù)量。繁育體細(xì)胞核移植技術(shù)第24頁(yè)/共28頁(yè)

在醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域，轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物可以作為____反應(yīng)器，生產(chǎn)許多珍貴的醫(yī)用_____；在治療人類疾病時(shí)，轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物細(xì)胞、組織和器官可以作為異種移植的_____；人的__________