多花木藍鹽脅迫生理響應實驗方案

多花木藍鹽脅迫的生理響應試驗方案材料和樣品：多花木蘭種子、NaCl、完全培育液〔硝酸鈣1克、磷酸二氫鉀0.25克、硫酸鎂0.250.250.25克、蒸餾水。溶液培育皿設置：設置5組不同培育條件，選擇飽滿、均勻、外觀良好的種子，放入溶液培育皿中，每皿30粒，別離參加一樣量的完全培育液及6mll〔濃度梯度：L、2L、4L、8L、2L，1、2、3、4、513將培育皿置于溫室中培育，每天下午3時適當補充蒸發(fā)水分，以維持鹽分濃度的穩(wěn)固。培育一樣時長，待多花木藍長出幼苗后，別離測定5組多花木藍幼苗的各項指標。一、多花木藍幼苗生長特性指標測定高、莖粗、最大側根長。材料、設備儀器及試劑〔一〕材料：水培的多花木藍根系?！捕硟x器設備：分光光度計；分析天平〔感量g；電子頂載天平〔感量g；溫箱；研缽；三角瓶lll；刻度〔三〕1〕乙酸乙酯〔分析純2〕次硫酸鈉4，分析純，粉100ml，歷4〔l·1pH7l·1000ml；6〕0.4mol·L-14.72g，100ml三、試驗步驟TTC標準曲線的制作：取0.4%TTC0.2ml10mlNa2S2O40.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml10ml、200μg的標準比色系列，以空白作參比，在485nm波長下測定吸光度，繪制標準曲線。稱取5組根尖樣品各0.5g，每組取三次，別離編號11、12、13，21、22、23，31、32、33，41、42、43，51、52、5310ml0.4%TTC10ml，把根充分浸沒在溶液內(nèi)，37℃下暗保溫1～3h，此后參加1mol·L-12ml〔與此5。3～4ml10ml，485nm比色，以空白試驗作參比測出吸光度，查標準曲線，即可求出四氮唑復原量。四、結果計算四氮唑復原強度〔mg.g-1h-1〕＝四氮唑復原量〔mg〕/根重〔g〕×時刻〔h〕材料、儀器設備及試劑〔一〕材料：穎的多花木藍葉片。〔二〕儀器設備〔g；4.棕色容量瓶；5.小漏斗；6.定量濾紙；7.吸水紙；8.擦境紙；9.滴管?！踩吃噭?％乙醇〔0％丙酮三、試驗步驟取穎多花木藍葉片，擦凈組織外表污物，剪碎〔去掉中脈，混勻。2～3ml95％乙醇，研成均漿，再加乙醇10ml，連續(xù)研磨至組織變白。靜3～5min。1路倒入漏斗中。25ml，搖勻。1cm95％乙醇為空白，在波665nm、649nmCa=13.95A665－6.88A649Cb=24.96A649－7.32A665abb，二者之和為總葉綠素的濃度。最終依照下式可進一步求出植物組織中葉綠素的含量：干重。二、多花木藍幼苗生理指標測定SOD(NBT)比色法材料、儀器設備及試劑〔一〕材料：多花木藍幼苗的葉片〔二〕儀器設備：1.高速臺式離心機；2.分光光度計；3.微量進樣器；4.熒光燈〔x；試管或指形管數(shù)支。〔三〕試劑 .L磷酸緩沖液pH7.8.L甲硫氨酸t(yī)lL0.06133gNBT100ml，避光保存；4.1000ml試驗步驟酶液提取 研缽中，1ml預冷的磷酸緩沖液在冰浴上研磨成漿，加緩沖液使終體積為5ml。取1.5～2ml于1000rpm下離心20min，上清液即為SOD粗提液。顯色反映 取5ml指形管〔要求透亮度好〕4支，2支為測定管，另2支為試劑〔酶〕試劑〔酶〕終濃度〔比色時〕0.05mol/L磷酸緩沖 1.5液130mmol/LMet0.313mmol/L750μmol/LNBT0.375μmol/L100μmol/LEDTA－Na20.310μmol/L20μmol/L核黃素0.32.0μmol/L酶液0.052蒸餾水0.25總體積3.014000Lx20min〔要求各管受光情形全都，溫度高時刻縮短，低時延長?；钚詼y定與計算 終止后，以不照光的比照管做空白，別離測定其它各管的吸光度。結果計算NBT50SODSOD＝(Ack－AE)×V/(Ack×0.5×W×Vt)式中：AckAEVl〕t〔l，Wmg／g材料、儀器設備及試劑20mL×4，離心機。試劑：55%硫代巴比妥酸〔5%三氯醋酸溶解定容；0.05mol·L–1pH7.8。試驗步驟取小麥植株上不同葉位的葉片3~50.5cm段，混勻。0.32mL0.05mol·L-13mL0.05mol·L-15mL0.5%硫代巴比妥酸溶液，搖勻。將試管放入滾水浴中煮沸0〔時。到時刻后，當馬上試管掏出并放入冷水浴中。待試管內(nèi)溶液冷卻后，3000×g15min，取上清液并量其體積。0.5532nm、600nm450nm處的消光3．計算含量MDmm-F=6.45D532

D600

0.559D450

VVVWtt：提取液整體積L：測定用提取液體積lW：樣品鮮重。葉綠素含量測定:丙酮比色法葉片細胞電導率：將葉片樣本在蒸餾水中浸泡8-10小時，再用電導率儀測定。材料、儀器設備及試劑〔一〕材料：小麥、女貞葉片;〔二〕6〕恒溫水浴鍋；7〕注射器。試劑：NaCl試驗步驟NaCl0102040、60、80、100μg/ml的標準液，在20～25℃恒溫下用電導儀測定，可讀出電導度。選取小麥或其他植物在必定部位上生長葉齡相像的葉子假設干，剪下后，先2g。3〕一份插入小杯中放在40℃恒溫箱內(nèi)萎蔫0.5～1h，另一份插入水杯中放在m〔大小以夠容電極為度，并用玻棒或干凈尼龍網(wǎng)壓住，在杯中準確參加蒸餾水20ml，浸沒葉片。4〕放入真空枯燥器，用抽氣機抽氣7～8min以抽出細胞間隙中的空氣；從頭緩緩放入空氣，水即被壓入組織中而使葉下沉。片，在20～25℃恒溫下，用電導儀測定溶液電導率。6〕測過電導率的以后，再，放入100℃滾水浴中15min10min20～25℃恒溫下測其煮沸電導率?！参杼幹门c比照〕的葉片細胞透性的轉變情形，記錄結果，并加說明。/煮沸電導率可溶性糖含量:80%乙醇提取后用蒽酮比色法測定器材與試劑試驗儀器 分光光度計，恒溫水浴，電子天平，烘箱，刻度試管，漏斗試驗試劑 活性炭，乙醇1000mlml100μg1g蒽酮，溶解于1000ml〔760ml1000ml〕溶液中，置于棕色瓶中，當日配置利用。試驗材料 或種子試驗步驟可溶性糖的提取110℃15min70℃留宿。干葉片磨碎后10ml4ml8080℃水40min2ml80210ml，過濾后取濾液測定。繪制標準曲線20ml10min〔水浴重沸后計時，掏出，當即用水冷卻至室溫，在m波長下，別離測量各管的光密度值，用0號管調(diào)零。以光密度為縱坐標，葡萄糖含量為橫坐標，繪制標準曲線。管號 0123456〔ml〕00.10.20.40.60.81.080%乙醇〔ml〕1.00.90.80.60.40.20〔μg〕010204060801003.測定nmOD0ml5mg酶(POD)活性測定:以愈創(chuàng)木酚作底物 ,721型可見分光光度計在720nm下測吸光值Cd7d試劑：L〔pH6.0，L〔pH7.0〕愈創(chuàng)木酚；H2O2。試驗步驟2〔wgFW〕+pH7.05mL，研磨，離心n，上清液即為粗酶液。2、配制反映：1mol/L磷酸緩沖液〔pH6.0〕50ml+28uL+19uLH2O2(30%)。一樣臨用前配制，冰箱內(nèi)短時間保存。3.酶反映：3mL+0.2mL3mLL0，010SOD>1.000計算酶活性OD以每分鐘D值轉變1作為1個過氧化物酶活力單位U。酶活力=活力單位(U)/ w(gFW)W=W〔gFW)*V(mL)/V游離脯氨酸(Proline)含量測定:茚三酮比色法一、原理上查出〔或用回歸方程計算〕脯氨酸的含量。二、材料、儀器設備及試劑〔一〕材料：待測植物〔水稻、小麥、玉米、高粱、大豆等〕葉片。：17222.研缽；3100ml4.容量瓶；5.大試管；6.一般試管；7.移液管；8.注射器；9.水浴鍋；10.漏斗；11.漏斗架；12.濾紙；13剪子。〔三〕1.酸性茚三酮溶液：將1.25g30ml20ml6mol/L〔70℃〕溶解，貯于冰箱中；23％磺基水楊酸：3g100ml；3.冰醋酸；4.甲苯。三、試驗步驟標準曲線的繪制〔1〕在分析天平上精準稱取25mg250ml0.5，1.0，1.5，2.0，2.53.0ml，用蒸餾水定容至刻度，搖勻，各瓶的脯氨酸濃度別離為1，2，3，4，5及6μg/ml。〔3〕取6支2ml2ml2ml30min?！?〕冷卻后各試管準確參加4ml甲〔5〕用注射器輕輕吸取520nm〔Y〕〔X〕2ml含量〔μg/2ml〕。別離置大管中，然后向各管別離參加5ml3％的磺基水楊酸溶液，在滾水浴中提10min，〔提取進程中要常常搖動〕，冷卻后過濾于干凈的試管中，濾液即為脯氨酸的提取液?！?〕2ml2ml2m