鐵皮石斛組織培養(yǎng)

關(guān)于鐵皮石斛組織培養(yǎng)第1頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo鐵皮石斛的組織培養(yǎng)鐵皮石斛，為蘭科多年生附生草本植物。生于海拔達(dá)1600米的山地半陰濕的巖石上，喜溫暖濕潤(rùn)氣候和半陰半陽的環(huán)境，不耐寒。一般均能耐－5℃的低溫。石斛可分為黃草、金釵、馬鞭等數(shù)十種，鐵皮石斛為石斛之極品，它因表皮呈鐵綠色而得名。第2頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo鐵皮石斛的組織培養(yǎng)技術(shù)路線外植體叢生芽培養(yǎng)基生根發(fā)育完整植株第3頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo蔗糖：30g瓊脂：6.8g初代培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)誘導(dǎo)培養(yǎng)基

MS+BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖3%+瓊脂6.8%【pH值5.2~5.6】MS母液：I-V50ml,5ml,5ml,5ml5ml。激素母液：BA10ml,NAA5ml第4頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo蔗糖：30g瓊脂：6.8g土豆汁150ml繼代培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)增殖培養(yǎng)基

MS+BA0.5ml+NAA0.2+土豆汁10%~20%【pH值5.2~5.6】取MS母液：IV50ml,5ml,5ml,5ml,5ml;激素母液：BA5ml,NAA2ml第5頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六CompanyLogoNAABAIAA增殖培養(yǎng)將建立的無菌系中的小苗轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)。增殖培養(yǎng)基以MS為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑BA、NAA、IAA、IBA及土豆汁和香蕉汁等附加物。土豆汁香蕉汁IBA第6頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo蔗糖：30g瓊脂：6.8g香蕉汁：200ml活性炭：20g生根培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)生根培養(yǎng)基1/2MS+NAA0.2~0.5mg/L+香蕉汁20%+活性炭2.0%【pH值5.2~5.6】取MS母液：IV25ml,5ml,5ml,5ml,5ml;激素母液：NAA2~5ml第7頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六CompanyLogoYourTexthere生根培養(yǎng)將叢生芽無菌操作切下單株放在生根培養(yǎng)基中于適宜條件下培養(yǎng)，約1~2周后即生根，以長(zhǎng)成完整植株。第8頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo優(yōu)選1年生鐵皮石斛植株上生長(zhǎng)健壯的莖段外植體的選擇接種小芽苗多易于在苗基部形成叢生芽。苗的高度為1～2cm時(shí),叢生芽增殖倍數(shù)最高數(shù)。生長(zhǎng)發(fā)育健壯苗優(yōu)先123第9頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo外植體的處理Text1Text2Text3摘去葉片和膜質(zhì)葉鞘，剪成約2cm長(zhǎng)帶節(jié)的小段。用洗潔劑清洗后置流水下沖20~30

min。在超凈工作臺(tái)上用75%的酒精消30s0.1%HgCl2滅菌5min后，用無菌水沖洗5~6次，放入墊有干無菌濾紙的培養(yǎng)皿中，以吸去多余水分，莖段兩端各切0.2~0.3cm。第10頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo接種實(shí)驗(yàn)一、接種準(zhǔn)備工作1、超凈工作臺(tái)開紫外燈照射10-20min送風(fēng)2、外植體消毒（繼代培養(yǎng)采用已建立的無菌培養(yǎng)物作為材料）3、工具消毒二、接種操作1、用消毒工具、器皿，切取鐵皮石斛幼莖段2cm2、接種環(huán)燒紅，沾一下培養(yǎng)基3、鑷取莖段插于培養(yǎng)基中4、封口、標(biāo)記第11頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo各時(shí)期的培養(yǎng)條件莖段的誘導(dǎo)時(shí)間在5~11天之間培養(yǎng)溫度23~25℃，光照強(qiáng)度2000lx，光照時(shí)間10h/d第12頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo參考文獻(xiàn)[1]鄭寬瑜,鄧君浪,趙培快繁技術(shù)體系研究[J].云南農(nóng)業(yè)科技,2009,(S2):57-59。[2]周根余,謝薇,程磊.影響鐵皮石斛原球莖生長(zhǎng)的若干因素[J].江西科學(xué),1999,17(4):231-235.[3]葉紀(jì)溝.鐵皮石斛試管苗的人工栽培研究[J].中國(guó)藥業(yè),2001,10(1):53。[4]李銘宗.鐵皮石斛的生物學(xué)特性和人工栽培[J].福建熱作科技,1999,24(1):29-31。[5]張明,夏鴻西,朱利泉,等