化妝品微生物指標(biāo)檢驗

化妝品微生物指標(biāo)檢驗第1頁/共32頁化妝品因含有水分，油脂，蛋白質(zhì)，多元醇等，為微生物的生長創(chuàng)造了良好的條件，造成產(chǎn)品變質(zhì)。為了抑制微生物的繁殖和消費者使用過程中的產(chǎn)品污染，往往在化妝品中加入防腐劑，但不能過量。因此，化妝品一方面為微生物的生長繁殖提供了良好的環(huán)境；另一方面由于防腐劑的應(yīng)用又可抑制微生物的生長。第2頁/共32頁化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)第3頁/共32頁微生物檢驗方法GB/T7918.1-1987化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法總則菌落總數(shù)（化妝品衛(wèi)生規(guī)范-2007年）

GB/T7918.2-1987化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法細菌總數(shù)測定

糞大腸菌群：GB/T7918.3-1987化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法糞大腸菌群銅綠假單胞菌（化妝品衛(wèi)生規(guī)范-2007年）

GB/T7918.4-1987化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法綠膿桿菌金黃色葡萄球菌GB/T7918.5-1987化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法金黃色葡萄球菌霉菌和酵母菌：（化妝品衛(wèi)生規(guī)范-2007年）第4頁/共32頁總則微生物檢驗的基本要求微生物檢驗樣品的采集、保存及制備適用范圍第5頁/共32頁總則1、具有代表性

隨機抽取相應(yīng)數(shù)量的包裝單位。應(yīng)從批的整體中各部位抽取，如從四角+中間；分上、中、下層；或上、中上、中、中下、下層；梅花點式等。所有接觸樣品的工具、容器都必須保持清潔。

樣品的采集第6頁/共32頁2、抽/采樣數(shù)量按照抽樣批及抽樣方案JJF1070－2005定量包裝商品凈含量計量檢驗規(guī)則第7頁/共32頁3、檢驗量

檢驗時，應(yīng)分別從兩個包裝單位以上的樣品中共取10g或10mL。包裝量小于20g的樣品，采樣量可適當(dāng)增加樣品包裝數(shù)量。

第8頁/共32頁樣品的制備液體樣品膏、霜、乳劑半固體狀樣品固體樣品樣品的制備注意事項無菌容器、材料及操作樣品的均一性第9頁/共32頁樣品的檢驗及保管

及時檢驗樣品應(yīng)放在室溫陰涼干燥處樣品先進行微生物檢驗，再做其他指標(biāo)須防止微生物的再污染和擴散如檢出糞大腸菌群或其它致病菌，自報告發(fā)出之日起該菌種及被檢樣品應(yīng)保存一個月第10頁/共32頁菌落總數(shù)檢驗菌落總數(shù)（Aerobicbacterialcount）是指化妝品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后（如培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間、pH值、需氧性質(zhì)等），1g（1mL）檢樣中所含菌落的總數(shù)。所得結(jié)果只包括一群本方法規(guī)定的條件下生長的嗜中溫的需氧性菌落總數(shù)。測定菌落總數(shù)便于判明樣品被細菌污染的程度，是對樣品進行衛(wèi)生學(xué)總評價的綜合依據(jù)。第11頁/共32頁數(shù)據(jù)處理混合平板的制備細菌的培養(yǎng)檢查結(jié)果、觀察與計數(shù)供試液的制備書寫檢驗記錄單第12頁/共32頁化妝品中防腐劑抑制細菌的生長.含卵磷脂、吐溫80營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基進行中和。對尼泊金類、苯甲酸類、六氯酚類等有效，但對卡松類的防腐劑的中和效果有限。第13頁/共32頁卡松的中和劑半胱氨酸,可較好的中和卡松的抑菌效果。因此,檢測時不同的防腐劑加入不同的中和劑第14頁/共32頁為便于區(qū)別化妝品中的顆粒與菌落，可在每100mL卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂中加入1mL

0.5％的TTC溶液，如有細菌存在，培養(yǎng)后菌落呈紅色，而化妝品的顆粒顏色無變化。第15頁/共32頁在膏霜類化妝品中,微生物都是吸附或附著于顆粒狀的原料中,檢測時不易洗脫下來,因此,需要驗證檢測方法的有效性。第16頁/共32頁糞大腸菌群糞大腸菌群（Fecalcoliforms）系一群需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌，在44.5℃±0.5℃培養(yǎng)24h～48h能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣。該菌直接來自糞便，是重要的衛(wèi)生指示菌。第17頁/共32頁產(chǎn)酸：黃色產(chǎn)氣：氣泡產(chǎn)酸產(chǎn)氣書寫檢驗記錄單不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣增菌培養(yǎng)供試液的制備配培養(yǎng)基和稀釋液檢查結(jié)果判斷44±0.5℃24~28h分離培養(yǎng)蛋白胨水培養(yǎng)最終結(jié)果判斷44±0.5℃24±2h靛基質(zhì)特征菌落36±1℃18~24h雙倍膽鹽乳糖MEMB瓊脂液面玫瑰紅色紫黑色★糞大腸菌群檢查流程圖第18頁/共32頁銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa）屬于假單胞菌屬，為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶陽性，能產(chǎn)生綠膿菌素。此外還能液化明膠，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在42℃±1℃條件下能生長。該菌對人有致病力，可使傷處化膿，引起敗血癥等。第19頁/共32頁最終結(jié)果判斷增菌培養(yǎng)供試液的制備書寫檢驗記錄單分離純化無菌落或無特征菌落配培養(yǎng)基和稀釋液革蘭染色、鏡檢→氧化酶試驗綠膿菌素試驗生化試驗硝酸鹽還原試驗

42℃生長試驗明膠液化試驗★銅綠假單胞菌檢查流程圖SCDLP培養(yǎng)基十六烷三甲基溴化銨瓊脂36±1℃18~24h36±1℃18~24h特征菌落灰白色、扁平、周圍有水溶性藍綠色素第20頁/共32頁十六烷三甲基溴化銨平板SCDLP培養(yǎng)基黃綠色菌膜灰白色濕潤氧化酶試驗粉紅/紫紅色第21頁/共32頁綠膿菌素試驗鹽酸層呈粉紫色氯仿層呈藍綠色硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗N2明膠液化試驗明膠培養(yǎng)基（高層）明膠液化第22頁/共32頁金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄狀排列，無芽胞，無莢膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽性。該菌是葡萄球菌中對人類致病力最強的一種，能引起人體局部化膿性病灶，嚴(yán)重時可導(dǎo)致敗血癥。第23頁/共32頁革蘭染色、鏡檢→生化試驗:血漿凝固酶試驗甘露醇發(fā)酵試驗最終結(jié)果判斷增菌培養(yǎng)供試品的處理書寫檢驗記錄單分離純化無菌落或無特征菌落配培養(yǎng)基和稀釋液36±1℃36±1℃SCDLP培養(yǎng)基或7.5%NaCl肉湯24±2hBairdParker’s或血瓊脂24~48h特征菌落★金黃色葡萄球菌檢查流程圖第24頁/共32頁BairdParker’s平板灰/黑色甘露醇發(fā)酵試驗血漿凝固酶試驗血漿凝塊液態(tài)血漿第25頁/共32頁霉菌和酵母菌霉菌和酵母菌數(shù)測定（Determinationofmoldsandyeastcount）是指化妝品檢樣在一定條件下培養(yǎng)后，1g或1mL化妝品中所污染的活的霉菌和酵母菌數(shù)量，藉以判明化妝品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般衛(wèi)生狀況。第26頁/共32頁檢驗結(jié)果正確的保證設(shè)備方面：恒溫培養(yǎng)設(shè)備高壓滅菌器超凈工作臺均質(zhì)器天平顯微鏡第27頁/共32頁材料要求：無菌容器及溶液；材料充足；

培養(yǎng)基的制備與質(zhì)量控制；第28頁/共32頁人員操作方面：無菌操作