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文檔簡介

血紅蛋白液制備

血紅蛋白電泳

，血紅蛋白電泳

HemoglobinElectrophoresis原理pH8.6血紅蛋白的等電點小于緩沖液的pH值時，血紅蛋白帶負(fù)電，在電場中，從負(fù)極向正極泳動由于不同血紅蛋白所帶電荷不同，分子量不同，其泳動的速度不同，可以分離出各自的區(qū)帶操作血紅蛋白液的制備√浸膜√pH8.5TEB緩沖液中浸透，用濾紙吸干點樣：用加樣器在膜的粗糙面加Hb液（10uL)，點樣距邊緣1.5cm,注意區(qū)分毛面，光面（示教）電泳：點樣線在負(fù)極一側(cè)，毛面向下，平衡10min后接電源調(diào)節(jié)電壓至220V電泳20min染色：用麗春紅S染色1分鐘，用酸洗液1分鐘，共漂洗3次，漂洗至底板顯白色后自然干燥結(jié)果觀察HJKAGDEAFA2CA異常正常－+慢速帶快速帶注意事項醋纖膜在加樣前應(yīng)把水分吸干，否則影響區(qū)帶分離的清晰度。電泳時間不宜太長，應(yīng)靈活掌握。以HbA和HbA2兩區(qū)帶分離清晰為電泳終止的時間。電流不能過大，否則會導(dǎo)致區(qū)帶過于集中，達不到分離效果。正常對照和已知異常Hb對照（質(zhì)控）。臨床意義與正常比較，發(fā)現(xiàn)異常血紅蛋白區(qū)帶。如HbH,HbE,Hb

Barts,HbS,HbD,HbC等。HbA2增多見于β-地貧，輕度增加亦可見于肝病、腫瘤和某些血液病。HbE病也在HbA2區(qū)帶位置增加，但含量很大（>10%）。HbA2HbA1快速帶制備血紅蛋白液：109mmol/L枸櫞酸鹽抗凝血1ml置于5ml離心管內(nèi)3000r/min離心10分鐘，棄血漿和白細(xì)胞層。以8倍RBC體積的生理鹽水洗滌RBC3次，每次3000r/min離心10分鐘，最后一次3000r/min離心15分鐘，棄上清。壓積RBC中沿管壁加入兩倍蒸餾水，棄上清，重復(fù)2次壓積RBC中沿管壁加入等量蒸餾水，置于振蕩器上震蕩5分鐘，使完全溶血，隨后加入RBC壓積1/2量四氯化碳，置于振蕩器上震蕩5

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