EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用

EB病毒感染試驗室診療方法及合理利用EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第1頁兒童EBV感染診治中存在問題? EBV試驗室診療方法選擇和結(jié)果解讀存在誤區(qū)? IM抗病毒治療較為混亂重癥EBV相關(guān)疾?。–AEBV、EBV-HLH）等診療和治療缺乏經(jīng)驗EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第2頁Epstein–Barr

virus(EBV)?1964年發(fā)覺，DNA病毒，皰疹病毒?人群感染率高，終生潛伏感染，含有感染-潛伏-活化特征?腫瘤相關(guān)病毒，每年EBV相關(guān)腫瘤死亡病例達(dá)15-20萬?與很多疾病相關(guān)，幾乎可引發(fā)全部臟器和組織相關(guān)疾病?細(xì)胞免疫非常主要KhanGetal.InfectiousAgentsandCancer,,

9:38.EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第3頁EB病毒連續(xù)感染示意圖? 原發(fā)感染后，EBV在人體B淋巴細(xì)胞建立潛伏感染，只表達(dá)潛伏抗原，受感染者成為終生病毒攜帶者? EBV健康攜帶者咽部不定時排毒?在機(jī)體免疫功效下降和一些原因觸發(fā)下，潛伏EBV可以被再激活，引發(fā)病毒復(fù)制及臨床癥狀Rev.Med.Virol.;18:305–319EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第4頁EBV感染流行病學(xué)? 在我國，EBV原發(fā)感染高峰年紀(jì)在兒童，10歲時90%以上血清陽性轉(zhuǎn)化0.200.60.4EBV血清抗體陽性轉(zhuǎn)化率10.80-3m≥10y3m-1y 1y-3y 3y-6y6y-10y年紀(jì)百分率CA-IgGNA-IgG

CA-IgM中華試驗和臨床病毒雜志，,22（1）：30-32北京兒童醫(yī)院資料EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第5頁傳染性單核細(xì)胞增多癥（Infectiousmononucleosis，IM）慢性活動性EB病毒感染（ChronicactiveEBVinfection，CAEBV）EB病毒相關(guān)性嗜血細(xì)胞綜合征（EBV-associatedhemophagocyticsyndrome,EBVAHS)? 伴性淋巴增殖綜合征（X-linkedlymphoproliferativesyndrom）鼻咽癌（Nasopharyngealcarcinoma）Burkitt’s淋巴瘤（Burkitt’slymphoma）何奇金淋巴瘤（Hodgkin’slymphoma）? 其它：腦炎，腎炎，間質(zhì)性肺炎，肝炎，多發(fā)性硬化…EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第6頁臨床實踐診療EBV感染時需要回答問題?是否感染EBV??EBV感染時相？?是否EBV活動性感染？?組織或器官中EBV感染細(xì)胞定位怎樣？EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第7頁EBV感染相關(guān)試驗室指標(biāo)? 血常規(guī)：淋巴細(xì)胞百分比＞50%（學(xué)齡以上兒童）? 嗜異凝集抗體? 異型淋巴細(xì)胞? EBV特異性抗體? 熒光定量PCR檢測EBV核酸? EBERs原位雜交試驗：EBV感染受累組織學(xué)證據(jù)特異性指標(biāo)非特異性指標(biāo)EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第8頁試驗室指標(biāo)一：嗜異凝集抗體? 血清嗜異凝集抗體檢測也稱“Monospot”試驗，1932年引入臨床實踐診療傳染性單核細(xì)胞增多癥該為IgM抗體，在病程第1～2周出現(xiàn)，連續(xù)約6個月在青少年原發(fā)性EBV感染中其陽性率可達(dá)80％-90％，約10％青少年缺乏對嗜異性抗體陽性反應(yīng)小于12歲者，EBV感染IM患者該試驗陽性率為25%-50%JApplClinPediatr,

,22(22)NEnglJMed.

;362:1993-EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第9頁試驗室指標(biāo)二：異型淋巴細(xì)胞? 外周血異型淋巴細(xì)胞百分比≥10%1、在西方國家，其診療IM敏感性為75%，特異性為92%2、學(xué)齡前兒童異型淋巴細(xì)胞百分比較低。外周血異型淋巴細(xì)胞百分比≥10%病例在學(xué)齡前兒童EBV-IM中只有41.8%；對于較大年紀(jì)兒童異型淋巴細(xì)胞診療意義更大NEnglJMed.;362:1993-WorldJPediatr,,7(1):45-49EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第10頁試驗室指標(biāo)三:

EBV特異性抗體EBV-CA-IgM檢測1、近期EBV感染指標(biāo)，廣泛應(yīng)用于臨床2、EBV感染血清學(xué)反應(yīng)復(fù)雜多樣，有病例抗EBV-CA-IgM產(chǎn)生延遲，有連續(xù)缺失或長時間存在3、12%-17%大于16歲青少年原發(fā)EBV感染后不能檢測到CA-IgM抗體，且4歲以下幼兒CA-IgM抗體水平低，連續(xù)時間短，易見假陰性結(jié)果GaoLiwei,etal.ChinJEvidBasedPediatr,,6(6):467-470.RobertsonP,JMedVirol,,70(4):617-623EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第11頁單份血清VCA-IgM在診療

小年紀(jì)兒童原發(fā)性EBV感染IM不足PediatricsInternational()52,

536–540EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第12頁原發(fā)EBV感染體液免疫? 原發(fā)性EBV感染過程中首先產(chǎn)生針對衣殼抗原（capsidantigen，CA）IgG和IgM（抗CA-IgG/IgM）?在急性感染晚期，抗早期抗原（earlyangtigen，EA）抗體出現(xiàn)? 在恢復(fù)期晚期，抗核抗原（nuclearantigen，NA）抗體產(chǎn)生抗CA-IgG和抗NA-IgG可連續(xù)終生JMD,,

10(4):279-292不一樣時間段抗體譜不一樣EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第13頁5%EBV新近感染抗CA抗（IgM）陰性在罕見病例中抗CA抗體(IgM)會連續(xù)陽性20-30%EBV新近感染抗EA抗體（IgG）陰性抗EBNA抗體(IgG)陰性體液免疫特殊情況EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第14頁試驗室指標(biāo)四：EBV病毒核酸檢測? Real-timePCR是當(dāng)前最主要監(jiān)測EBV載量方法，能夠指導(dǎo)治療和判斷療效，如PTLD/EBV-HLH/CAEBV等? 樣本：血樣本（包含全血、單個核細(xì)胞、或血清/血漿），非鼻咽拭子或鼻咽吸收液，不一樣疾病所需適宜樣本不一樣注意：Real-timePCR陽性，只能提醒機(jī)體存在活動性EBV感染或病毒活動性復(fù)制，不能判別是原發(fā)EBV感染還是既往EBV感染再激活，如淋巴瘤患者、免疫抑制患者、HIV感染者，所以，單純Real-timePCR陽性在IM診療中價值有限EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第15頁試驗室指標(biāo)五：EBERS原位雜交試驗?EBV潛伏感染細(xì)胞含有大量EBER1/EBER2（EBERS）轉(zhuǎn)錄子?每個EBV潛伏感染細(xì)胞含有大約106拷貝EBERS，被認(rèn)為EBV潛伏感染最好標(biāo)志物?原位雜交試驗檢測腫瘤細(xì)胞中EBERS是診療腫瘤是否EBV相關(guān)金標(biāo)準(zhǔn)EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第16頁陽性對照陰性對照EBV-EBERS陽性樣本陰性樣本EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第17頁不一樣EB病毒相關(guān)腫瘤中EBERS檢出情況Rev.Med.Virol.;18:

305–319.EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第18頁?是否感染EBV??EBV感染時相？臨床實踐需要回答問題（一）EBV血清抗體譜檢測EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第19頁HHBalfour,etal.Clinical&TranslationalImmunology,,4(2),

e33.EBV抗體譜檢測，能夠初步判斷是否感染EBV，以及感染大致時間

如EBNA-IgG陽性，提醒機(jī)體最少已感染EBV近2-3個月EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第20頁免疫功效正?；颊逧BV血清學(xué)特點(diǎn)抗EBV抗體VCA-IgMVCA-IgGEBNA-IgG解釋陰性陰性陰性無免疫反應(yīng)陽性陰性陰性急性感染或非特異反應(yīng)1陽性陽性陰性急性感染陰性陽性陽性既往感染陰性陽性陰性急性感染或既往感染1陽性陽性陽性原發(fā)感染晚期或再激活1陰性陰性陽性既往感染或非特異反應(yīng)注：1

有待深入確定WorldJ

Virol,,1(1):31-43.EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第21頁CAEBV患者EBV抗體檢測ChinMedJ;

122(3):262-266.CAEBV患者EBV抗體譜展現(xiàn)各種類型，多數(shù)患者EA-IgG陽性，提醒活動性感染EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第22頁EBV-HLH患者EBV抗體檢測ChinMedJ.;123(11)

:1426-1430.EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第23頁臨床實踐需要回答問題（二）?機(jī)體是否存在EBV活動性感染？——EBV核酸檢測?何種標(biāo)本送檢？血清/血漿？全血？PBMC?——不一樣疾病需要送檢標(biāo)本不一樣EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第24頁JMolDiagn.

,10(4):279-92.EBV既往感染健康人群，血清/低血漿中檢測不到EBV-DNA；但全血/PBMC標(biāo)本中常有拷貝EBV-DNAEB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第25頁Rev.Med.Virol.;18:

305–319不一樣EBV相關(guān)疾病中，EBV核酸在外周血中存在區(qū)間不一樣EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第26頁ExpertRev.Clin.Immunol.,9(2),

139–151.EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第27頁?IM患者外周血中EBV載量在2周內(nèi)到達(dá)峰值，至病程14天，多數(shù)IM患者血清中已檢測不到病毒核酸，病程22天后，全部IM血清中均檢測不到EBV核酸JMedVirol,,70(4):617-623? 但外周血單個核細(xì)胞中EBV核酸陽性可連續(xù)6個月以上，需要1年或更長時間到達(dá)EBV健康攜帶者全血EBV-DNA水平（1-50拷貝EBV-DNA/106個WBC）JInfectDis,,207:80-88JMolDiagn.,10(4):279-92? 標(biāo)本：血清或血漿，不提議使用全血或PBMC標(biāo)本? 重癥病例監(jiān)測EBV載量有利于判別EBV-HLHEB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第28頁? 絕大多數(shù)CAEBV患者PBMC中EBV-DNA水平高于102.5拷貝/gDNA，CAEBV患者血漿/血清中EBV-DNA水平與病情嚴(yán)重程度和預(yù)后相關(guān)? CAEBV患者血漿和PBMC中EBV核酸載量存線性關(guān)系CAEBV患者EBV-DNA檢測Blood,,98:280-286EB病毒感染的實驗室診斷方法及合理運(yùn)用第29頁? EBV-HLH患者外周血單個核細(xì)胞（PBMC）和血漿/血清均含有很高EBV-DNA載量，監(jiān)測EBV-HLH患者血清中EBV-DNA載量有利于評定療效EBV-HLH患者EBV-DNA檢測Leukemia&Lymp