生物制品化學規(guī)定規(guī)程

生物制品化學規(guī)定規(guī)程本規(guī)程載人的化學檢定項目，如采用其他方法測定，其結(jié)果與本規(guī)程所列應無顯著差異。如遇制品質(zhì)量存在疑問時，其最后判定應以本規(guī)程所列方法測定結(jié)果為準。標準液的配制與標定方法參看最新版《中國藥典》。PH值測定（電位法）1儀器校準（定位）用標準緩沖溶液應使用分析純標準緩沖物質(zhì)配制。1.10.05mol/L鄰苯二甲酸氫鉀溶液稱取于115±5℃干燥2～3小時的鄰苯二甲酸氫鉀（KHC8H4O4）10.12±0.01g，溶于蒸餾水，并稀釋至1000ml。1.20.025mol/L磷酸氫二鈉和0.025mol/L磷酸二氫鉀混合溶液分別稱取在115±5℃干燥2～3小時的磷酸氫二鈉（Na2HPO4）3.53±0.01g和磷酸二氫鉀（KH2PO4）3.39±0.01g，溶于預先煮沸過15～30分鐘并迅速冷卻的蒸餾水中，并稀釋至1000ml。1.30.01mol/L硼砂溶液稱取硼砂（Na2B4O7·10H2O）3.80±0.01g（注意：不能烘?。?，溶于預先煮沸過15～30分鐘并迅速冷卻的蒸餾水中，并稀釋至1000ml。置聚乙烯塑料瓶中密閉保存。標準緩沖溶液于0～50℃的標準pH值溫度(℃)0.05mol/L鄰苯二甲酸氫鉀0.025mol/L混合磷酸鹽0.01mol/L硼砂04.016.989.4654.006.959.39104.006.929.33154.006.909.28204.006.889.23254.006.869.18304.016.859.14354.026.849.10404.036.849.07454.046.839.04504.066.839.022操作使用玻璃電極酸度計測定，操作方法按儀器說明書進行。用兩種標準緩沖溶液校正或核對，相差不得超過0.05。固體總量測定甲、105℃干烤法1操作精確量取一定體積樣品于干燥至恒重的扁稱量瓶中，置105℃烤箱中烘至恒重。2計算烘干后樣品重量樣品固體總量%（g/ml）=──────────×100樣品ml數(shù)乙、50℃干烤法1操作精確量取1mlA群腦膜炎球菌多糖菌苗半成品原液于已干燥至恒重的稱量瓶（2×2.5cm）中，置50℃干燥箱中，干燥至恒重。2計算同105℃干烤法。半微量定氮法1試劑1.1硫酸化學純，比重1.84。1.2消化劑硫酸銅（CuSO4·5H2O）1份與硫酸鉀（K2SO4）10份共同研細混勻即成。1.312.5mol/L氫氧化鈉液取氫氧化鈉500g，加蒸餾水至1000ml，搖勻。1.42%硼酸吸收液硼酸20g加蒸餾水使溶解成1000ml，加混合指標劑10ml，搖勻。1.5混合指示劑0.2%（g/ml）溴甲酚綠酒精溶液5份與0.1%（g/ml）甲基紅酒精溶液2份混合配成。1.6標準0.01mol/L鹽酸或0.005mol/L硫酸溶液。2操作2.1消化準確量取一定體積樣品（含氮量在1～2mg左右）于凱氏定氮瓶中，加消化劑約0.3g，濃硫酸1.0ml進行消化，至澄明藍綠色，繼續(xù)消化約60分鐘，同時做空白。2.2蒸餾與滴定取10ml硼酸吸收液于100ml三角瓶內(nèi)，將凱氏蒸餾器冷凝管末端浸入硼酸吸收液內(nèi)，將消化好的樣品移入凱氏蒸餾器內(nèi)，用蒸餾水洗定氮瓶3～4次，洗液亦移入蒸餾器內(nèi)，再加5ml12.5mol/L氫氧化鈉溶液，然后進行蒸餾，待接收液總體積約35～50ml,將冷凝管末端取出液面，讓蒸汽沖洗約1分鐘，再用少量蒸餾水沖洗冷凝管末端，接收液用標準0.01mol/L鹽酸或0.005mol/L硫酸進行滴定，至溶液顯著變色。3計算（樣品滴定數(shù)–空白滴定數(shù)）×標準鹽酸mol/L×14樣品總氮含量(mg/ml)────────────────────────樣品ml數(shù)附注1.蒸餾前應蒸洗蒸餾器15分鐘。2.蒸汽發(fā)生瓶內(nèi)應加數(shù)滴硫酸及甲基紅指示劑至呈明顯紅色。蛋白質(zhì)含量測定甲、鎢酸沉淀法1試劑1.110%鎢酸鈉溶液取鎢酸鈉10g，加蒸餾水使溶解成100ml。1.20.33mol/L硫酸溶液量取化學純硫酸1.86ml，緩緩注入適量的蒸餾水中，待冷加水稀釋至100ml。1.30.145mol/L氯化鈉溶液取氯化鈉9g，加蒸餾水使溶解成1000ml。2操作2.1鎢酸除蛋白質(zhì)精確量取樣品2ml加蒸餾水14ml，加10%鎢酸鈉2ml，0.33mol/L硫酸2ml，搖勻，靜置30分鐘過濾。2.2精確量取樣品1ml，用0.145mol/L氯化鈉溶液準確稀釋至每ml含氮量1mg左右。2.3精確量取稀釋液1ml及除蛋白質(zhì)濾液5ml，分別移入凱氏定氮瓶中，用半微量定氮法測定樣品的總氮及非蛋白氮含量。3計算樣品總氮含量(mg/ml)=（樣品滴定數(shù)-空白滴定數(shù)）×標準鹽酸mol/L×14×稀釋倍數(shù)樣品非蛋白氮含量(mg/ml)=（樣品滴定數(shù)-空白滴定數(shù)）×標準鹽酸mol/L×14×12樣品蛋白質(zhì)含量(g/ml)=（總氮-非蛋白氮）×6.25×1/10附注1.樣品蛋白質(zhì)含量如超過10%(g/ml)，除蛋白質(zhì)時應適當加大樣品稀釋倍數(shù)，10%鎢酸鈉及0.33mol/L硫酸用量相應地按比例增加，使溶液鎢酸濃度仍保持1%。2.總氮與非蛋白氮可用同一空白。乙、三氯醋酸沉淀法12%三氯醋酸溶液取三氯醋酸12g，加蒸餾水溶解至100ml。2操作精確量取一定體積的樣品（含蛋白質(zhì)6～12mg左右，于10ml尖底離心管中，加等體積的12%三氯醋酸混勻，放置半小時后3000r/min離心30分鐘，傾凈上清，沉淀用蒸餾水約3ml（分數(shù)次）洗入凱氏燒瓶，按半數(shù)量定氮法測定氮含量。3計算（樣品滴定數(shù)–空白滴定數(shù)）×標準鹽酸mol/L×14樣品蛋白質(zhì)含量(mg/ml)──────────────────────×6.25樣品ml數(shù)丙、微量法（Lowry法）1.試劑1.14%碳酸鈉溶液取4g碳酸鈉，加蒸餾水溶解成100ml。1.20.2mol/L氫氧化鈉溶液取0.8g氫氧化鈉加蒸餾水，溶解成100ml。1.30.04mol/L硫酸銅溶液取1gCuSO4·5H2O加蒸餾水溶解成100ml。1.42%酒石酸鉀（或0.1mol/L酒石酸鈉）取2g酒石酸鉀（或酒石酸鈉），加蒸餾水溶解成100ml。1.5堿性銅液臨用前取試劑1.1和1.2各25ml，試劑1.3和1.3各0.5ml混勻配制而成。1.6酚試劑稱取100g鎢酸鈉(Na2WO4·2H2O),25g鉬酸鈉(Na2MoO4·2H2O)，置1500ml燒瓶中，加入700ml蒸餾水，50ml85%磷酸及100ml濃鹽酸，上聯(lián)回流管（使用木塞或錫紙包裹的橡皮塞）微沸加流10小時，取下回流管，加入150g硫酸鋰，50ml蒸餾水，幾滴溴液，煮沸約15分鐘，驅(qū)除過量的溴。冷卻，加蒸餾水稀釋至1000ml，過濾，為酚試劑貯備液。酚試劑貯備液經(jīng)標準氫氧化鈉液滴定，測定酸濃度，而后用蒸餾水稀釋至相當1mol/L鹽酸濃度，即為酚試劑。1.7標準蛋白質(zhì)溶液取牛血清白蛋白標準品（由檢定所統(tǒng)一標定發(fā)給），準確稀釋至1mg/ml(含0.02%NaN3)，為標準蛋白質(zhì)貯備液。精確量取標準蛋白質(zhì)貯備液2.5ml于25ml容量瓶中，用含0.02%NaN3的蒸餾水稀釋至刻度，為標準蛋白質(zhì)溶液（100μg/ml）。2操作2.1樣品精確量取一定體積樣品（含蛋白質(zhì)50μg左右）于試管中，加5ml堿性銅液，混勻，于室溫放置10分鐘，快速加入0.5ml酚試劑，搖勻，于室溫放置30分鐘，用650nm波長或紅色濾光片比色（呈色后，如發(fā)現(xiàn)混濁，經(jīng)3000r/min離心15分鐘后再比色）。2.2標準曲線精確量取標準蛋白質(zhì)溶液