微生物實(shí)驗(yàn)課件實(shí)驗(yàn)四培養(yǎng)基的使用特點(diǎn)和微生物接種方法

實(shí)驗(yàn)四微生物接種方法及微生物測(cè)量方法當(dāng)前1頁(yè)，總共28頁(yè)。實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求強(qiáng)調(diào)無(wú)菌操作概念，掌握無(wú)菌操作技術(shù)掌握微生物移植、純化的基本方法了解不同微生物在同一培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特征，及同一微生物在不同培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特征掌握幾種常用的鑒別、選擇培養(yǎng)基的使用了解顯微測(cè)微尺的構(gòu)造；掌握應(yīng)用顯微測(cè)微尺測(cè)量微生物細(xì)胞大小的方法與技術(shù)當(dāng)前2頁(yè)，總共28頁(yè)。微生物培養(yǎng)Culture：在一定的條件下培養(yǎng)、繁殖得到的微生物群體混合培養(yǎng)物：含有多種微生物的培養(yǎng)物；純培養(yǎng)物：只有一種微生物的培養(yǎng)物；Pureculture通常情況下只有純培養(yǎng)物才能提供可以重復(fù)的結(jié)果純培養(yǎng)技術(shù)是進(jìn)行微生物學(xué)研究的基礎(chǔ)！當(dāng)前3頁(yè)，總共28頁(yè)。一、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基；固體培養(yǎng)基；1.5%-2.5%半固體培養(yǎng)基；0.2%-0.75%瓊脂當(dāng)前4頁(yè)，總共28頁(yè)。一、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)菌落（colony）：

單個(gè)（或聚集在一起的一團(tuán)）微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長(zhǎng)、繁殖到一定程度可以形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞生長(zhǎng)群體眾多菌落連成一片菌苔（lawn）當(dāng)前5頁(yè)，總共28頁(yè)。無(wú)菌操作：火焰附近（酒精燈、煤氣燈）進(jìn)行當(dāng)前6頁(yè)，總共28頁(yè)。

不同微生物在特定培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成的菌落或菌苔一般都具有穩(wěn)定的特征（形狀、顏色等），可以成為對(duì)該微生物進(jìn)行分類、鑒定的重要依據(jù)當(dāng)前7頁(yè)，總共28頁(yè)。菌落的描述：形態(tài)、表面和邊緣特征當(dāng)前8頁(yè)，總共28頁(yè)。當(dāng)前9頁(yè)，總共28頁(yè)。同一細(xì)菌在不同的培養(yǎng)平板上形成不同的特征菌落當(dāng)前10頁(yè)，總共28頁(yè)。一、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)使微生物在固體培養(yǎng)基平板上形成單個(gè)菌落的基本方法：1、稀釋倒平板法2、涂布平板法3、平板劃線法4、厭氧微生物的分離當(dāng)前11頁(yè)，總共28頁(yè)。當(dāng)前12頁(yè)，總共28頁(yè)。一、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)1、稀釋倒平板法2、涂布平板法操作較麻煩，對(duì)好氧菌、熱敏感菌效果不好！使用較多的常規(guī)方法，但有時(shí)涂布不均勻！當(dāng)前13頁(yè)，總共28頁(yè)。利用L棒進(jìn)行涂布當(dāng)前14頁(yè)，總共28頁(yè)。3、平板劃線法當(dāng)前15頁(yè)，總共28頁(yè)。3、平板劃線法當(dāng)前16頁(yè)，總共28頁(yè)。二、選擇培養(yǎng)分離

抑制大多數(shù)其它微生物的生長(zhǎng)；

使待分離的微生物生長(zhǎng)更快；對(duì)微生物群落中數(shù)量占少數(shù)的微生物的分離純化沒有一種培養(yǎng)基或一種培養(yǎng)條件能夠滿足自然界中一切生物生長(zhǎng)的要求，在一定程度上所有的培養(yǎng)基都是選擇性的。當(dāng)前17頁(yè)，總共28頁(yè)。三、選擇培養(yǎng)分離1.利用選擇平板進(jìn)行直接分離待分離的微生物生長(zhǎng)，其它微生物的生長(zhǎng)被抑制

高溫下培養(yǎng)：分離嗜熱細(xì)菌；

培養(yǎng)基中不含N：分離固氮菌；

培養(yǎng)基加抗生素：分離抗性菌；當(dāng)前18頁(yè)，總共28頁(yè)。1.利用選擇平板進(jìn)行直接分離

顏色反應(yīng)：分離特定的菌株；

牛奶平板：分離蛋白酶產(chǎn)生菌；待分離的微生物的生長(zhǎng)特征明顯不同于其它微生物當(dāng)前19頁(yè)，總共28頁(yè)。常用的選擇培養(yǎng)基沙門菌常用的培養(yǎng)基：亞硫酸鉍瓊脂平板(BS):含有煌綠、檸檬酸鉍銨、亞硫酸鈉、硫酸亞鐵，具有強(qiáng)選擇性，分離沙門氏菌HE（Heetoen)：檸檬酸鐵銨、去氧膽酸鹽、硫代硫酸鈉、麝香草酚藍(lán)和復(fù)紅，分離腸道致病菌當(dāng)前20頁(yè)，總共28頁(yè)。麥康凱培養(yǎng)基乳糖、膽鹽，弱選擇性，中性紅,分離腸道致病菌中性紅指示劑pH感應(yīng)范圍6.8（紅色）到8.0（黃色）分解乳糖產(chǎn)酸，菌落顏色呈紅色沙門氏菌、志賀氏菌不分解乳糖，菌落顏色與培養(yǎng)基相同膽鹽有助于沙門氏菌的生長(zhǎng)，抑制其他細(xì)菌大腸桿菌？沙門氏菌？常用的選擇培養(yǎng)基當(dāng)前21頁(yè)，總共28頁(yè)?？耸想p糖鐵蛋白胨；牛肉膏；酵母膏；乳糖；葡萄糖；氯化鈉；檸檬酸鐵銨；硫代硫酸鈉；瓊脂；酚紅為指示劑，黃色為產(chǎn)酸，紅色為產(chǎn)堿觀察克氏雙糖接種后斜面、底層產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、產(chǎn)H2S的情況，大腸桿菌斜面？沙門氏菌斜面？當(dāng)前22頁(yè)，總共28頁(yè)。接種劃線菌種：大腸桿菌、沙門菌、青霉采用無(wú)菌操作進(jìn)行移植學(xué)會(huì)分區(qū)劃線所有平皿和試管必須有標(biāo)記18－24小時(shí)（真菌下周觀察）觀察試驗(yàn)結(jié)果，描述固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)的細(xì)菌培養(yǎng)特征當(dāng)前23頁(yè)，總共28頁(yè)。步驟兩個(gè)人為一組，一個(gè)接種大腸桿菌，一個(gè)接種沙門菌LB液體移植普通瓊脂：分區(qū)劃線麥康凱：分區(qū)劃線LB半固體培養(yǎng)基：穿刺接種克氏雙糖：先穿刺后接種斜面真菌（青霉）接種沙保勞氏培養(yǎng)基當(dāng)前24頁(yè)，總共28頁(yè)。微生物大小測(cè)量原理微生物細(xì)胞的大小是其形態(tài)特征之一，也是鑒定的依據(jù)之一。在研究工作中有時(shí)要測(cè)定顯微鏡下微生物細(xì)胞的大小，使用工具為顯微測(cè)微尺。顯微測(cè)微尺有鏡臺(tái)測(cè)微尺和目鏡測(cè)微尺。目鏡測(cè)微尺是一塊可放在目鏡內(nèi)的園形玻片。在玻片中央把5mm長(zhǎng)度，刻成100等分的小格，其目鏡測(cè)微尺經(jīng)過(guò)鏡筒光學(xué)系統(tǒng)后，其每格尺寸隨鏡筒長(zhǎng)度變化而變化，也隨放大倍數(shù)而變化，因此必須選定顯微鏡及放大倍數(shù)。然后用已知長(zhǎng)度的鏡臺(tái)測(cè)微尺來(lái)校準(zhǔn)，計(jì)算出物鏡下接目測(cè)微尺每小格的長(zhǎng)度。然后才可用接目測(cè)微尺直接測(cè)量標(biāo)本的長(zhǎng)度和寬度。鏡臺(tái)測(cè)微尺是一中央部分刻有精確等分線的載玻片，其每格長(zhǎng)度為10um，是專用于校正目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度的。當(dāng)前25頁(yè)，總共28頁(yè)。操作步驟1，先將目鏡測(cè)微尺裝入目鏡中，方法是：先撥出目鏡，旋下目鏡上的透鏡，然后將目鏡測(cè)微尺的刻度朝下，旋好目透鏡，并裝上鏡筒。2，將鏡臺(tái)測(cè)微尺放在載物臺(tái)上，刻度朝上，觀察。3，先低倍再高倍觀察，旋轉(zhuǎn)目鏡測(cè)微尺，使其刻度與鏡臺(tái)測(cè)微尺刻度線平行。移動(dòng)載物臺(tái)推動(dòng)器使目鏡測(cè)微尺的0點(diǎn)與鏡臺(tái)測(cè)微尺的一條刻度線重合，然后于另一端找重合線，計(jì)算兩端重合線之間目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺各有幾格，重復(fù)三次，按公式計(jì)算出目鏡測(cè)微尺每格實(shí)際長(zhǎng)度。目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度（微米）=（鏡臺(tái)測(cè)微尺兩重合線格數(shù)×10）/目鏡測(cè)微尺兩重合線格數(shù)4，取出鏡臺(tái)測(cè)微尺，取酵母菌懸浮液1滴于載玻片上，蓋上蓋玻片，放在載物臺(tái)上，進(jìn)行測(cè)量菌體的大?。y(cè)20個(gè)菌體，求平均值）。當(dāng)前26頁(yè)，總共28頁(yè)。思考題1、無(wú)菌操作的關(guān)鍵步驟包括有哪些？