根尖細(xì)胞有絲分裂制片與觀察

1、學(xué)習(xí)植物根尖有絲分裂制片技術(shù)；2、了解和辨別有絲分裂各個時期的染色體特征；3、掌握染色體的觀察和計數(shù)方法。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康漠?dāng)前1頁，總共47頁。植物根尖的分生細(xì)胞的有絲分裂，每天都有分裂高峰時間，此時經(jīng)過適當(dāng)取材處理，加以固定、離析、染色、壓片等步驟，可以迅速地將細(xì)胞分散附著于載玻片和蓋玻片之間，再置于顯微鏡下觀察，可以看到大量處于有絲分裂各個時期的細(xì)胞和染色體。細(xì)胞由第一次有絲分裂結(jié)束到第二次有絲分裂結(jié)束所經(jīng)歷的過程為一個細(xì)胞分裂周期，包括間期、前期、中期、后期和末期。間期：一般持續(xù)時間比較長，是核內(nèi)染色體DNA合成的過程，能看到核的變化，如核和其內(nèi)的核仁體積增大，核內(nèi)存在染色質(zhì)，一般情況看不到染色體。二、實(shí)驗(yàn)原理當(dāng)前2頁，總共47頁。前期：細(xì)胞核內(nèi)染色體呈細(xì)絲狀，在核內(nèi)互相纏繞成團(tuán)。核仁開始消失，核膜隨之破裂。此時染色體已由兩條染色單體所組成，只在著絲點(diǎn)處連結(jié)。中期：各染色體的著絲點(diǎn)排列在赤道面上，兩臂伸向赤道面的兩旁。紡錘體完全形成，其一端與染色體的著絲點(diǎn)相連結(jié)，另一端集中于細(xì)胞的極處。中期染色體高度濃縮，具有各物種染色體的典型形態(tài)，是染色體計數(shù)的最好時期。后期：每一染色體的著絲點(diǎn)分裂，兩條染色單體彼此分開成兩個子染色體，子染色體在紡錘絲的牽引下，分別移向兩極。末期：移向兩極的染色體，逐漸松散成染色質(zhì)，紡錘絲逐漸消失，在赤道面上開始出現(xiàn)細(xì)胞板，把一個細(xì)胞分隔成兩個子細(xì)胞，核膜重新形成，核仁出現(xiàn)，逐漸進(jìn)入間期狀態(tài)。當(dāng)前3頁，總共47頁。當(dāng)前4頁，總共47頁。三、儀器與材料1、材料：小麥的根尖。2、用具及藥品：顯微鏡、恒溫箱、載玻片、蓋玻片、染色缸、試劑瓶、酒精燈、鑷子、剪刀、紗布、吸水紙；無水乙醇、45%醋酸、卡諾固定液（無水乙醇∶冰醋酸=3∶1）、1N鹽酸、蒸餾水、1%醋酸洋紅、改良品紅。當(dāng)前5頁，總共47頁。四、實(shí)驗(yàn)程序（1）取材：選取小麥種子浸泡于溫水中，使種子吸脹，再置于墊有濕濾紙的培養(yǎng)皿中，于25℃條件下發(fā)芽，待根長約1-2cm在大量細(xì)胞進(jìn)行分裂時剪根。（2）預(yù)處理：剪取的根尖放入盛有蒸餾水的小瓶，置于冰水溶液中，0-3℃處理24小時。（3）固定：主要是殺死細(xì)胞，盡可能保持生活時的真實(shí)狀態(tài)并便于染色。將經(jīng)過預(yù)處理的根尖沖洗干凈后，用濾紙吸去沾著的水滴，以卡諾固定液固定24小時。（4）解離：將固定好的根尖移入鹽酸酒精離析液中，在35℃下離析8分鐘，或在1N鹽酸中，60℃下離析15分鐘。當(dāng)前6頁，總共47頁。（5）染色：將離解好的根尖用蒸餾水沖洗幾次，在1%醋酸洋紅中染色2-4小時；或置于染色缸里，加改良品紅溶液，靜置染色10-15分鐘。（6）壓片：取已染色的根尖，置于載玻片上，在分生組織處切取一小塊，加45%醋酸（或改良品紅）一滴，蓋上蓋玻片，用刀片架起蓋玻片一角，用鑷子尖輕敲幾下，使材料分散，移去架起的刀片，再輕敲幾下，在酒精燈上微微加熱，吸去多余的染液，用手指垂直壓片（切勿移動蓋玻片），即可鏡檢。（7）觀察：在顯微鏡下觀察上述制片，先用低倍鏡找到分裂相后轉(zhuǎn)高倍鏡，可清楚觀察到有絲分裂各個時期的圖象。當(dāng)前7頁，總共47頁。當(dāng)前8頁，總共47頁。當(dāng)前9頁，總共47頁。當(dāng)前10頁，總共47頁。當(dāng)前11頁，總共47頁。當(dāng)前12頁，總共47頁。當(dāng)前13頁，總共47頁。當(dāng)前14頁，總共47頁。當(dāng)前15頁，總共47頁。當(dāng)前16頁，總共47頁。當(dāng)前17頁，總共47頁。當(dāng)前18頁，總共47頁。當(dāng)前19頁，總共47頁。當(dāng)前20頁，總共47頁。當(dāng)前21頁，總共47頁。當(dāng)前22頁，總共47頁。當(dāng)前23頁，總共47頁。當(dāng)前24頁，總共47頁。當(dāng)前25頁，總共47頁。當(dāng)前26頁，總共47頁。當(dāng)前27頁，總共47頁。當(dāng)前28頁，總共47頁。當(dāng)前29頁，總共47頁。當(dāng)前30頁，總共47頁。當(dāng)前31頁，總共47頁。當(dāng)前32頁，總共47頁。當(dāng)前33頁，總共47頁。當(dāng)前34頁，總共47頁。當(dāng)前35頁，總共47頁。當(dāng)前36頁，總共47頁。當(dāng)前37頁，總共47頁。當(dāng)前38頁，總共47頁。當(dāng)前39頁，總共47頁。當(dāng)前40頁，總共47頁。