演示文稿分解尿素的細(xì)菌的分離

演示文稿分解尿素的細(xì)菌的分離當(dāng)前1頁(yè)，總共33頁(yè)。（優(yōu)選）分解尿素的細(xì)菌的分離當(dāng)前2頁(yè)，總共33頁(yè)。一、課題背景1、尿素的利用

尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、細(xì)菌利用尿素的原因土壤中的細(xì)菌分解尿素是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕窩O(NH2)2脲酶+CO22NH3+H2O當(dāng)前3頁(yè)，總共33頁(yè)。4、課題目的①?gòu)耐寥乐蟹蛛x出能夠分解尿素的細(xì)菌②統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細(xì)菌當(dāng)前4頁(yè)，總共33頁(yè)。一.研究思路㈠.篩選菌株㈡.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目㈢.設(shè)置對(duì)照當(dāng)前5頁(yè)，總共33頁(yè)。1、實(shí)例：?jiǎn)⑹荆簩ふ夷康木N時(shí)要根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。原因：因?yàn)闊崛獪囟?0～800C，淘汰了絕大多數(shù)微生物只有Taq細(xì)菌被篩選出來(lái)。DNA多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一種在體外將少量DNA大量復(fù)制的技術(shù)，此項(xiàng)技術(shù)要求使用耐高溫（930C）的DNA聚合酶。㈠.篩選菌株當(dāng)前6頁(yè)，總共33頁(yè)。2、實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選原理：人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。也就是用選擇性培養(yǎng)基篩選。當(dāng)前7頁(yè)，總共33頁(yè)。15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO43、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)所需培養(yǎng)基：①?gòu)奈锢硇再|(zhì)看此培養(yǎng)基屬于哪類？固體培養(yǎng)基②從用途看此培養(yǎng)基屬于哪類？③從化學(xué)成分看此培養(yǎng)基屬于哪類？選擇培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基當(dāng)前8頁(yè)，總共33頁(yè)。15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO43、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)所需培養(yǎng)基：②在此培養(yǎng)基中哪些作為碳源、氮源？碳源：葡萄糖氮源：尿素當(dāng)前9頁(yè)，總共33頁(yè)。15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO43、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)所需培養(yǎng)基：③此培養(yǎng)基是否對(duì)微生物具有篩選作用？如果有，是如何進(jìn)行篩選的？有，此培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。當(dāng)前10頁(yè)，總共33頁(yè)。6、怎樣證明此培養(yǎng)基具有選擇性呢？以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基

是判斷該培養(yǎng)基有選擇性實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組培養(yǎng)基類型是否接種

結(jié)果只生長(zhǎng)分解尿素細(xì)菌生長(zhǎng)多種微生物是當(dāng)前11頁(yè)，總共33頁(yè)。1.稀釋涂布平板法（活菌計(jì)數(shù)法）⑴原理：在稀釋度足夠高時(shí)，微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個(gè)菌落是由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成的，即一個(gè)菌落代表原先的一個(gè)單細(xì)胞。⑵計(jì)算方法：每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。㈡.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：當(dāng)前12頁(yè)，總共33頁(yè)。

兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)。在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)106的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果。1.第一位同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230。2.第二位同學(xué)在該濃度下涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為21、212、256，該同學(xué)以這三個(gè)平板上菌落數(shù)的平均值163作為結(jié)果。

你認(rèn)為哪位同學(xué)的結(jié)果更接近真實(shí)值?你認(rèn)為這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)需要改進(jìn)嗎？如果需要，如何改進(jìn)？分析：答：都不接近，都需要改進(jìn)。第一位同學(xué)需要設(shè)置重復(fù)實(shí)驗(yàn)組。第二位同學(xué)統(tǒng)計(jì)的三個(gè)菌落數(shù)相差太大，說(shuō)明操作有誤，需要重新實(shí)驗(yàn)。當(dāng)前13頁(yè)，總共33頁(yè)。小結(jié)①為使結(jié)果接近真實(shí)值可將同一稀釋度的稀釋液涂布到三個(gè)或三個(gè)以上的平板中培養(yǎng)。②為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30——300的平板上進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算出菌落平均數(shù)③統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。當(dāng)前14頁(yè)，總共33頁(yè)。2、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法：利用血球計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)細(xì)菌的計(jì)數(shù)；需要相對(duì)高的細(xì)菌濃度；個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察；缺點(diǎn)當(dāng)前15頁(yè)，總共33頁(yè)。設(shè)置對(duì)照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。㈢.設(shè)置對(duì)照：當(dāng)前16頁(yè)，總共33頁(yè)。實(shí)例：在做分解尿素的細(xì)菌的篩選與統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的實(shí)驗(yàn)時(shí)，A同學(xué)從對(duì)應(yīng)的106

倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出大約150個(gè)菌落，但是其他同學(xué)在同樣的稀釋度下只選擇出大約50個(gè)菌落。分析其原因。原因：⑴土樣不同，⑵培養(yǎng)基污染或操作失誤

(或者是混入了其他的含氮物質(zhì))如何設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)證明呢？當(dāng)前17頁(yè)，總共33頁(yè)。小結(jié)：通過(guò)這個(gè)事例可以看出，實(shí)驗(yàn)結(jié)果要有說(shuō)服力，對(duì)照的設(shè)置是必不可少的。方案一：由其他同學(xué)用與A同學(xué)相同土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)方案二：將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對(duì)照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。結(jié)果預(yù)測(cè)：如果結(jié)果與A同學(xué)一致，則證明A無(wú)誤；如果結(jié)果不同，則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問(wèn)題。當(dāng)前18頁(yè)，總共33頁(yè)。二.實(shí)驗(yàn)的具體操作

㈠.土壤取樣

從肥沃、濕潤(rùn)的土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中?！羧⊥翗佑玫男¤F鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。㈡.制備培養(yǎng)基：制備以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。當(dāng)前19頁(yè)，總共33頁(yè)?！魬?yīng)在火焰旁稱取土壤10g?！粼谙♂屚寥廊芤旱倪^(guò)程中，每一步都要在火焰旁進(jìn)行[三]樣品的稀釋當(dāng)前20頁(yè)，總共33頁(yè)?！舴蛛x不同的微生物采用不同的稀釋度稀釋倍數(shù)目的細(xì)菌104、105、106放線菌103、104、105真菌102、103、104原因：不同微生物在土壤中含量不同保證獲得菌落數(shù)在30～300之間適于計(jì)數(shù)的平板當(dāng)前21頁(yè)，總共33頁(yè)。為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測(cè)定土壤中細(xì)菌的總量和測(cè)定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？分析：土壤中各類微生物的數(shù)量（單位：株/kg）是不同的。例如在干旱土壤中的上層樣本中：好氧及兼性厭氧細(xì)菌數(shù)約為2185萬(wàn)，放線菌數(shù)約為477萬(wàn)，霉菌數(shù)約為23.1萬(wàn)。1：為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進(jìn)行分離，同時(shí)還應(yīng)當(dāng)有針對(duì)性地提供選擇培養(yǎng)的條件。當(dāng)前22頁(yè)，總共33頁(yè)。㈣.取樣涂布◆實(shí)驗(yàn)時(shí)要對(duì)培養(yǎng)皿作好標(biāo)記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時(shí)間、稀釋度、培養(yǎng)物等。◆如果得到了2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30——300的平板，則說(shuō)明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)，如果同一稀釋倍數(shù)的三個(gè)重復(fù)的菌落數(shù)相差較大，表明試驗(yàn)不精確，需要重新實(shí)驗(yàn)。當(dāng)前23頁(yè)，總共33頁(yè)。㈤.微生物的培養(yǎng)與觀察在菌落計(jì)數(shù)時(shí)，每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。

培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。細(xì)菌：30～37℃培養(yǎng)1～2d放線菌：25～28℃培養(yǎng)5～7d霉菌：25～28℃的溫度下培養(yǎng)3～4d。當(dāng)前24頁(yè)，總共33頁(yè)?！羧绻玫搅?個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30——300的平板，則說(shuō)明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)，如果同一稀釋倍數(shù)的三個(gè)重復(fù)的菌落數(shù)相差較大，表明試驗(yàn)不精確，需要重新實(shí)驗(yàn)。當(dāng)前25頁(yè)，總共33頁(yè)。微生物的培養(yǎng)與觀察當(dāng)前26頁(yè)，總共33頁(yè)。三.結(jié)果分析與評(píng)價(jià)P251.通過(guò)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，若培養(yǎng)物有雜菌污染，菌落數(shù)偏高；若培養(yǎng)物混入其他氮源，則菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高，難以選擇出分解尿素的微生物。2.稀釋操作是否成功：如果得到了2個(gè)或2個(gè)以上的菌落數(shù)在30—300的平板，則說(shuō)明稀釋操作成功。同一稀釋倍數(shù)的三個(gè)重復(fù)組的菌落數(shù)不能相差懸殊，如相差較大，表示實(shí)驗(yàn)不精確，要重新實(shí)驗(yàn)。當(dāng)前27頁(yè)，總共33頁(yè)。四、操作提示

無(wú)菌操作

做好標(biāo)記

規(guī)劃時(shí)間

當(dāng)前28頁(yè)，總共33頁(yè)。五.課外延伸2、鑒定大腸桿菌的方法：在培養(yǎng)基中添加

培養(yǎng)該細(xì)菌，如果出現(xiàn)菌落呈現(xiàn)

，則說(shuō)明有大腸桿菌。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入

指示劑。培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果PH升高，指示劑將變

，說(shuō)明該細(xì)菌能夠分解尿素。酚紅紅1、鑒定分解尿素的細(xì)菌的方法伊紅-美藍(lán)黑色且有金屬光澤當(dāng)前29頁(yè)，總共33頁(yè)。本課題知識(shí)小結(jié):當(dāng)前30頁(yè)，總共33頁(yè)。1.使用選擇培養(yǎng)基的目的是（）

A.培養(yǎng)細(xì)菌

B.培養(yǎng)真菌

C.使需要的微生物大量繁殖

D.表現(xiàn)某微生物的特定性狀與其他微生物加以區(qū)別2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是()A.CO2和N2B.葡萄糖和NH3

C.CO2和尿素D.葡萄糖和尿素實(shí)踐訓(xùn)練CD當(dāng)前31頁(yè)，總共33頁(yè)。3.下列說(shuō)法不正確的是（）

A.科學(xué)家從70－80度熱泉中分離到耐高溫的TaqDNA聚合酶

B.統(tǒng)計(jì)某一稀釋度的5個(gè)平板的菌落數(shù)依次為M1、M2、M3、M4、M5，以M3作為該樣品菌落數(shù)的估計(jì)值

C.設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度

D.同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物數(shù)量最大，種類最多。4.為培養(yǎng)和分離出酵母菌并淘汰雜菌，常在培養(yǎng)基中加入（）

A.較多的氮源物質(zhì)B.較多的碳源物質(zhì)

C.青霉素類藥物D.高濃度食鹽BC當(dāng)前32頁(yè)，總共