空氣中細(xì)菌的測定

空氣中細(xì)菌的測定《公共場所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法第3部分：空氣微生物》（GB/T18204.3-2013）一、自然沉降法（一）目的和意義掌握自然沉降法的原理和采樣方法熟悉本次實(shí)習(xí)的操作步驟及注意事項(xiàng)了解室內(nèi)空氣微生物測定的意義（二）原理將營養(yǎng)瓊脂平板暴露在空氣中，微生物根據(jù)重力作用自然沉降到平板上，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)后得到菌落數(shù)，再按公式推算出每立方米空氣中的菌落數(shù)。（三）儀器高壓蒸氣滅菌器電熱恒溫干燥箱恒溫培養(yǎng)箱玻璃平皿或一次性滅菌平皿，9cm高壓蒸氣滅菌器電熱恒溫干燥箱恒溫培養(yǎng)箱玻璃平皿（四）試劑營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分：蛋白胨10g

牛肉膏5g

氯化鈉5g瓊脂20g蒸餾水1000ml制法：將蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉溶于蒸餾水，調(diào)節(jié)PH7.2~7.6。加入瓊脂，經(jīng)121℃（103kPa）高壓蒸氣滅菌20min。然后傾注適量（15~20ml）4于已滅菌處理的培養(yǎng)皿內(nèi)，制成營養(yǎng)瓊脂平板備用。若當(dāng)天不用，應(yīng)置4℃冰箱內(nèi)保存。（五）操作方法布點(diǎn)要求室內(nèi)面積不足50m2的設(shè)置3個采樣點(diǎn)，

50m2以上的設(shè)置5個采樣點(diǎn)。采樣點(diǎn)按均勻布點(diǎn)原則布置，室內(nèi)3個采樣點(diǎn)的設(shè)置在室內(nèi)對角線四等分的3個等分點(diǎn)上，5個采樣點(diǎn)的按梅花布點(diǎn)。采樣點(diǎn)距離地面高度1.2~1.5m，距離墻壁不小于1m。采樣點(diǎn)應(yīng)避開通風(fēng)口、通風(fēng)道等。采樣選擇好采樣點(diǎn)后，將營養(yǎng)瓊脂平板水平放于采樣點(diǎn)位置，并將皿蓋揭開，使平皿內(nèi)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基表面暴露于空氣中5min。蓋上皿蓋，將平板倒置，于恒溫培養(yǎng)箱中，37

℃培養(yǎng)24h后計(jì)數(shù)菌落數(shù)。

二、撞擊法（一）目的和意義掌握撞擊法測定空氣微生物的采樣方法熟悉本次實(shí)習(xí)的操作步驟及注意事項(xiàng)了解撞擊式空氣微生物采樣器的工作原理（二）原理

撞擊法是采用撞擊式空氣微生物采樣器，使空氣通過狹縫或小孔產(chǎn)生高速氣流，從而將懸浮在空氣中的微生物采集到營養(yǎng)瓊脂平板上，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)后得到菌落數(shù)的測定方法。在計(jì)算每立方米空氣中所含的細(xì)菌菌落數(shù)的采樣測定方法。（三）儀器高壓蒸氣滅菌器恒溫培養(yǎng)箱玻璃平皿或一次性滅菌平皿，9cm六級篩孔撞擊式空氣微生物采樣器（四）試劑營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（五）操作方法布點(diǎn)要求采樣點(diǎn)選擇根據(jù)采樣點(diǎn)面積及環(huán)境狀況，選擇有代表性的位置設(shè)置采樣點(diǎn)。室內(nèi)面積不足50m2的設(shè)置1個采樣點(diǎn)，

50~200m2的設(shè)置2個采樣點(diǎn)，200m2以上的設(shè)置3~5個采樣點(diǎn)。采樣點(diǎn)按均勻布點(diǎn)原則布置，室內(nèi)1個采樣點(diǎn)的設(shè)置在中央，

2個采樣點(diǎn)的設(shè)置在室內(nèi)對稱點(diǎn)上，3個采樣點(diǎn)的設(shè)置在室內(nèi)對角線四等分的3個等分點(diǎn)上，5個采樣點(diǎn)的按梅花布點(diǎn)，其他的按均勻布點(diǎn)原則布置。采樣點(diǎn)距離地面高度1.2~1.5m，距離墻壁不小于1m。采樣點(diǎn)應(yīng)避開通風(fēng)口、通風(fēng)道等。采樣器準(zhǔn)備儀器的清潔消毒：根據(jù)采樣點(diǎn)的潔凈要求，對儀器表面進(jìn)行不同程度的清潔或消毒處理。采樣裝置的清潔滅菌：取下采樣裝置上的蓋子和端蓋，用酒精棉球火焰滅菌約1min，然后將其移回采樣裝置上，冷卻。采樣

按儀器說明書操作，將采樣時間的旋鈕調(diào)到選定的采樣時間檔上。選擇直流或交流電源，打開電源開關(guān)，設(shè)定好采樣時間。將采樣的平皿蓋略松開，打開已冷卻的端蓋，將無菌采樣平皿置于采樣裝置座的平皿托架上，旋緊端蓋。按下計(jì)時開關(guān)，儀器便開始采樣和計(jì)時，調(diào)節(jié)流量（28.3L/min），采樣5~15min。設(shè)定的采樣時間歸零后，儀器自動關(guān)機(jī)，采樣結(jié)束。旋開端蓋，立即將平皿蓋蓋上，將平皿倒置于儲存盒內(nèi)。同一點(diǎn)應(yīng)重復(fù)采樣3次，按上述各步驟進(jìn)行。細(xì)菌培養(yǎng)將采過樣的平皿倒置，于恒溫培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)24h后計(jì)數(shù)菌落數(shù)。

菌落計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)培養(yǎng)后每皿所生長的菌落數(shù)，并求出同一點(diǎn)重復(fù)采樣的平均菌落數(shù)?？諝庵屑?xì)菌總數(shù)的計(jì)算根據(jù)平皿菌落計(jì)數(shù)結(jié)果，用下列公式換算成每立方米空氣中的菌落數(shù)，以CFU/m3表示：空氣中菌落數(shù)（CFU/m3）=1000N/Q×t式中：N——采樣點(diǎn)直接計(jì)數(shù)的平均菌落數(shù)；Q——采樣流量（L/min）；t——采樣時間（min）；一個區(qū)域空氣中細(xì)菌總數(shù)的測定結(jié)果按該區(qū)域全部采樣點(diǎn)中細(xì)菌總數(shù)測定值中的最大值給出。注意事項(xiàng)撞擊式空氣衛(wèi)生物采樣器由于采樣效率高，方法簡便，是目前國際上應(yīng)用最廣泛的一種采