用熒光分光光度法測定中藥配方顆粒對自由基的清除作用課件

用熒光分光光度法測定中藥配方顆粒對自由基的清除作用

答辯人：張承導(dǎo)師：蔡繼文教授選題意義1.自由基是一種外層軌道上含有未配對電子的原子、原子團(tuán)或呈特殊狀態(tài)的分子。2.機(jī)體內(nèi)自由基大量產(chǎn)生或清除過緩,使積累超過臨界水平后,就會對機(jī)體產(chǎn)生損傷，各種炎癥、癌癥、臟器損傷、老化等都與自由基密切相關(guān)。(一)自由基概述及其危害(二)中藥以及中藥配方顆粒中藥抗氧化劑具有經(jīng)濟(jì)和毒、副作用小等明顯的優(yōu)點,在中草藥中,有許多藥物都對自由基有清除作用。中藥配方顆粒品質(zhì)優(yōu)良，效果客觀，使用簡便快捷，必將成為21世紀(jì)中醫(yī)藥配方的主流。因此研究它的藥性有著重要的意義。1.實驗原理

Fe2+－EDTA在弱堿性介質(zhì)中可還原溶解氧產(chǎn)生·OH，其進(jìn)攻對苯二甲酸產(chǎn)生強(qiáng)熒光羥基化產(chǎn)物2－羥基對苯二甲酸(HOTP).·OH清除劑加入后,導(dǎo)致HOTP的生成量減少,從而體系熒光強(qiáng)度明顯降低。實驗內(nèi)容2.儀器

日本島津RF-5301PC熒光分光光度計，激發(fā)波長316nm，測定發(fā)射光譜。3.試劑及反應(yīng)體系

對苯二甲酸鈉溶液(1.0×10-4mol/L);Fe2+(硫酸亞鐵溶液,1.0×10-3mol/L)；EDTA(1.0×10-3mol/L)；磷酸鈉緩沖溶液(0.2mol/L;pH=7.4),山茱萸等中藥配方顆粒。依次加入對苯二甲酸溶液0.50mL,EDTA溶液0.3mL,中藥顆粒溶液0.5mL；Fe2+

溶液0.30mL,緩沖液2.00mL,稀釋至10.0mL,反應(yīng)6min后測定體系熒光強(qiáng)度。4.實驗內(nèi)容及其結(jié)果討論(1).不加中藥時體系的發(fā)射光譜123由此可見,羥基對苯二甲酸是體系的唯一的強(qiáng)熒光物質(zhì)，自由基或者是對苯二甲酸本身不產(chǎn)生熒光。峰值位置為426nm

1:對苯二甲酸+Fe2++EDTA2:與1相比,無對苯二甲酸鈉3:與1相比,體系中沒有加入Fe2+(3)對各種中藥進(jìn)行抑制自由基的測定無中藥熒光強(qiáng)度F0

中藥名C=0.03g/L中藥自身熒光強(qiáng)度F′

加入中藥后熒光強(qiáng)度F清除率（％）[F0-(F-F′)]/F0

黃芩63.803154.98474.1紅花109.52241.01662.6桂枝83.272211.28463.6地龍88.537233.33858.8柴胡87.727231.92359.0豬苓59.979217.03555.3各種中藥對自由基的清除率(4)用不同濃度的半支蓮，山茱萸和茶多酚進(jìn)行研究

無中藥半支蓮對自由基的抑制作用茶多酚對自由基的抑制作用。

無中藥（5).山茱萸和半支蓮不同比例的混合物對自由基的抑制作用

熒光強(qiáng)度值沒有明顯的提高或降低，沒有發(fā)現(xiàn)有明顯的協(xié)同或負(fù)協(xié)同效應(yīng)?？瞻撞瓒喾?/p>

半支蓮

山茱萸

濃度/g/lΔF清除率/%濃度/g/lΔF清除率/%濃度/g/lΔF清除率/%0.10189.573.60.10120.346.70.10200.577.90.08175.468.10.08131.251.00.06189.973.80.06159.161.80.06118.946.20.04170.466.20.04143.755.80.04129.950.50.02141.354.90.02126.249.00.01103.540.20.0193.3236.20.008113.644.10.00886.833.70006100.039.00.00685.933.40.00497.437.80.00480.431.20.00288.434.40.00273.528.5不同濃度的中藥及其清除率用對苯二甲酸羥基化反應(yīng)體系可以評價中藥清除·OH的作用能力?？梢源致缘牡玫揭欢舛认赂鞣N中藥的清除率。可以看出在一定的濃度范圍內(nèi)，中藥顆粒濃度與其清除率大致成線性比例。在較高濃度范圍山茱萸的清除自由基能力好于半支蓮，而在低濃度時相反。三實驗結(jié)論創(chuàng)新點

當(dāng)前對中藥的提取物的清除自由基研究已經(jīng)比較多。而對使用的越來越廣泛的中藥配方顆粒的清除自由基的研究報道較少。本實驗采用了市售的中