標(biāo)準(zhǔn)操作程序SOP

#第四章研發(fā)組SOP400健康監(jiān)測(cè)―、採樣方式：繁殖組送檢動(dòng)物包含8-10週齡成鼠與老年的淘汰種鼠，每季每品系逢機(jī)取樣，動(dòng)物採樣數(shù)則依該品系動(dòng)物總數(shù)決定，由研發(fā)組向繁殖組提出並說明採樣動(dòng)物數(shù)的決定過程。動(dòng)物代養(yǎng)組每季每籠架逢機(jī)選擇一隻衛(wèi)兵鼠作為病材。新進(jìn)檢疫動(dòng)物逢機(jī)採樣約5%動(dòng)物總數(shù)，但需依族群大小修正。待檢動(dòng)物需用動(dòng)物籠或紙箱裝妥，並在其上書明動(dòng)物淘汰(送檢)原因及採樣日期、動(dòng)物房號(hào)碼、動(dòng)物品系與年齡，如有臨床癥狀也需一併記錄。健康監(jiān)測(cè)動(dòng)物送檢流程，參照附錄十二並依附錄十三填寫送檢單。將待檢動(dòng)物送至動(dòng)物中心研發(fā)組實(shí)驗(yàn)室。二、血清病毒監(jiān)測(cè)，使用CharlesRiver生產(chǎn)使用酵素免疫分析法(EnzymeLinkedImmunosorbentAssay；ELISA)套組。採樣與ELISA流程如下：待檢活體動(dòng)物以二氧化碳安樂死並心臟採血。所收集的血液靜置於4°C冰箱6-12小時(shí)。含血液之微量離心管以800-1,000g離心15分鐘，吸取上層血清於新的微量離心管，存放於-20C備用。血清至少測(cè)定黴漿菌、小鼠肝炎病毒與仙臺(tái)病毒ELISA套組，其餘按所要監(jiān)測(cè)病毒種類，選擇適合之套組做ELISA測(cè)試。將測(cè)試血清以Blotto溶液(MilkdiluentSolutionConcentrate)60倍稀釋。分別將50mL稀釋液滴入含有TC(對(duì)照組組織抗原)與AG(病毒抗原)的分析盤條(microplate)。對(duì)照組血清分為高濃度、低濃度與陰性三種，在每一次試驗(yàn)中均必須使用以有利於判讀；高濃度、低濃度對(duì)照血清以Blotto溶液2倍稀釋，陰性對(duì)照組則12倍稀釋後使用，稀釋後之對(duì)照組血清分別滴入50mL於TC與AG兩孔。將分稀盤置於37C作用40分鐘。以沖洗液(washsolution)沖洗3次。滴入50mL結(jié)合液(含第二抗體；6000倍稀釋)於分析盤每一孔。將分稀盤置於37C作用40分鐘。以沖洗液(washsolution)沖洗3次。加入100mL的呈色劑(ABTSPeroxidaseSubstratesystem)到分析盤每一孔，呈色40分鐘。加入100mL的呈色反應(yīng)抑制劑(ABTSPeroxidasestopsolution)到分析盤每一孔，停止呈色反應(yīng)。使用405mm波長(zhǎng)ELISA判讀機(jī)進(jìn)行判讀。每一測(cè)試血清AG與TC所得商數(shù)（Q），若3￡Q則判為陽性，3>Q32則定為疑陽性，若Q<1則為陰性。三、細(xì)菌監(jiān)測(cè)氣管細(xì)菌.動(dòng)物採全血，或解剖後以滅菌小剪刀撿開喉頭，以0.5mLTrypticSoyBroth（TSB）打入氣管抽打一次後吸回TSB。.回收之TSB，取0.2mL滴在血液培養(yǎng)基（bloodagar）上，並將此滴TSB均勻分布在血液培養(yǎng)基，其餘打入另一管滅菌TSB。.接種後培養(yǎng)基置於37°C培養(yǎng)24-48小時(shí)。.TSB培養(yǎng)基增菌後呈混淆，以白金耳（loop）無菌操作取少量TSB於Mycoplasma特殊培養(yǎng)基37C培養(yǎng)7-14天觀察是否有菌落產(chǎn)生。.血液培養(yǎng)基經(jīng)增菌後觀察菌落之型態(tài)、大小、顏色，判斷是否有可疑菌落。.可疑菌落可經(jīng)革蘭氏染色特性與生化性狀（或使用快速診斷套組）等方式，以鑑定細(xì)菌種類。註：黴漿菌培養(yǎng)鑑定亦可經(jīng)下列步驟得到結(jié)果：以含有Phenolred的2,4,3D-modificationMycoplasmabroth代替TSB採樣。Mycoplasmabroth於37C二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-6天，觀察培養(yǎng)液顏色。若培養(yǎng)液顏色有改變，取溶液0.2ml於製備好的含2％馬血清之2,4,3D-modificationmycoplasmaagar上畫線後培養(yǎng)於37°C。待菌落長(zhǎng)出後，在顯微鏡下觀察菌落型態(tài)及染色特性，以鑑定Mycoplasma。腸道細(xì)菌.動(dòng)物解剖後，以滅菌剪刀剪開盲腸並用滅菌棉花棒採樣後，放入GNbroth於37C培養(yǎng)24小時(shí)至48小時(shí)。.以無菌白金耳由GNbroth釣菌至MacConkeyagar培養(yǎng)基上畫線，於37C培養(yǎng)24小時(shí)。.依菌落型態(tài)、大小、顏色選擇可疑菌落做細(xì)菌鑑定。四、寄生蟲監(jiān)測(cè)鼠類外寄生蟲監(jiān)測(cè)：動(dòng)物採血後，在放大鏡下觀察皮毛是否健康並注意是否有外寄生蟲。鼠類內(nèi)寄生蟲監(jiān)測(cè)：動(dòng)物解剖後，取盲腸與結(jié)腸內(nèi)容數(shù)公克，放入裝有飽和硝酸鈉溶液之小燒杯後，攪拌均勻檢視液面上層浮游物。以乾淨(jìng)膠布直接沾粘肛門後，貼於載玻片，在顯微鏡下觀察。五、組織採樣採樣組織包含頸部淋巴結(jié)與下顎唾腺、肝臟、腎臟、胃、十二指腸、迴腸、盲腸、結(jié)腸、生殖道、氣管與心肺臟及腦部。組織採樣的大小約0.5cm立方為宜，可視組織不同加以修正採樣組織大小。若有疑似病灶拍幻燈片存檔，一式兩份，分別由研發(fā)組與送檢單位存檔。SOP401環(huán)境監(jiān)測(cè)―、空氣落菌量監(jiān)測(cè)監(jiān)測(cè)範(fàn)圍為繁殖組與小動(dòng)物組SPF動(dòng)物房，每2週採樣一次。裝備TrypticSoyAgar(TSA)與SabouraudAgar培養(yǎng)皿。採樣當(dāng)天早上，飼養(yǎng)工作人員未工作之前，於動(dòng)物房地板前、中、後三分之一，空調(diào)出風(fēng)口、排氣口，與每個(gè)動(dòng)物隔離箱上、中、下層各放一個(gè)TSA與一個(gè)SabouraudAgar培養(yǎng)皿。經(jīng)30分鐘後，收取所放置之TSA培養(yǎng)皿，放於37°C培養(yǎng)18-24小時(shí)，另將SabouraudAgar培養(yǎng)皿放於22C培養(yǎng)5天，而後觀察並記錄菌落數(shù)量。二、隔離區(qū)內(nèi)飲用水水質(zhì)監(jiān)測(cè)採樣樣品來自滅菌後尚未使用之飲用水，目的在確定飲用水經(jīng)滅菌後滅菌效果是否完全。每二週採集一次，在一批滅菌飲用水取3-5瓶，倒入含滅菌濾紙(0.2mm)之過濾裝置，以真空幫浦抽氣過濾。濾過後濾紙至於MacConkey及血液培養(yǎng)基，37C培養(yǎng)18-24小時(shí)觀察是否有菌落。三、隔離區(qū)內(nèi)飼料微生物監(jiān)測(cè)採樣樣品來自滅菌後尚未使用之飼料，目的在確定飼料經(jīng)滅菌後滅菌效果是否完全。每二週採集一次，在一批滅菌飼料中取3-5個(gè)樣本，每個(gè)樣本取約5克。樣本以滅菌蒸餾水中依序10倍稀釋至10,000倍，並將稀釋後樣本取1mL在EMB培養(yǎng)基37C培養(yǎng)24-48小時(shí)，並計(jì)算菌落數(shù)。四、隔離區(qū)內(nèi)墊料微生物監(jiān)測(cè)採樣樣品來自滅菌後尚未使用之墊料，目的在確定墊料經(jīng)滅菌後滅菌效果是否完全。每二週採集一次，在一批滅菌墊料中取3-5個(gè)樣本，每個(gè)樣本取約10克。樣本以滅菌蒸餾水中依序10倍稀釋至10,000倍，並將稀釋後樣本取1mL在EMB培養(yǎng)基37C培養(yǎng)24-48小時(shí)，並計(jì)算菌落數(shù)。SOP402疾病診斷―、除一般健康監(jiān)測(cè)流程外，若動(dòng)物飼養(yǎng)管理員或動(dòng)物使用者，發(fā)現(xiàn)異常動(dòng)物，請(qǐng)參照下列各點(diǎn)送檢。1.疾病診斷流程參照附錄十四，並依附錄十五填寫送檢單。有關(guān)微生物檢查請(qǐng)參照SOP400所述方式，視所需選擇執(zhí)行。有關(guān)寄生蟲檢查請(qǐng)參照SOP400所述方式，視所需選擇執(zhí)行。有關(guān)組織檢查請(qǐng)參照SOP400所述方式執(zhí)行，拍照並保存任何可能含病灶的病材。SOP403SCID小鼠免疫球蛋白測(cè)定―、每季定期與繁殖組共同執(zhí)行，使用TheBindingSite產(chǎn)品(RIDRN272.3，RN278.3)，應(yīng)用免疫沉澱法原理，求取高中低三種濃度對(duì)照血清，與其形成環(huán)狀免疫沉澱現(xiàn)象，得到一直線關(guān)係，將可估計(jì)血清中的免疫球蛋白濃度。簡(jiǎn)單步驟如下：由繁殖組進(jìn)行SCID小鼠眼窩採血，採集所需血清，送研發(fā)組待檢。以免疫擴(kuò)散法測(cè)定血清免疫球蛋白包含IgG與IgM兩項(xiàng)。將待測(cè)血清與高、中、低濃度對(duì)照組血清5mL分別注入套組孔槽，室溫培養(yǎng)72小時(shí)，觀察免疫擴(kuò)散環(huán)的大小代入對(duì)照組血清所得的標(biāo)準(zhǔn)直線中即可得待測(cè)血清中IgG與IgM濃度。將測(cè)定結(jié)果小於10mg/mL定為陰性為正常SCID小鼠。建議將有測(cè)得免疫球蛋白之SCID小鼠淘汰或做為衛(wèi)兵鼠。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心無菌操作臺(tái)標(biāo)準(zhǔn)作業(yè)程序故障聯(lián)絡(luò)電話：分機(jī)52695，林志展09254932551.目的確保使用者於無菌、乾淨(jìng)之環(huán)境下操作動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，並降低實(shí)驗(yàn)動(dòng)物於例行性更換籠具時(shí)暴露在可能遭受污染之環(huán)境下，進(jìn)而減少疾病的傳播。適用範(fàn)圍本中心所有放置無菌操作臺(tái)之程序?qū)嶒?yàn)室與一般飼育室。名詞定義3.1無菌操作臺(tái)在本中心之無菌操作臺(tái)係指應(yīng)用層流(laminarflow)原理，將經(jīng)由HEPA濾網(wǎng)過濾過之氣流由上而下吹過操作臺(tái)面，並可避免外界空氣污染操作區(qū)域之生物安全防護(hù)櫃(BiologicalSafetyCabinet)。程序.檢查電源。.打開風(fēng)扇開關(guān)，盡量使其運(yùn)轉(zhuǎn)達(dá)10分鐘以上，確保清靜循環(huán)流暢。操作前，必須穿戴手套及口罩，用75%酒精噴灑工作臺(tái)，並用滅菌擦手紙擦拭整個(gè)臺(tái)面，確保無菌無塵之狀態(tài)。.操作過程中，玻璃遮門的高度愈低愈好，至少維持在30-35公分內(nèi)。遮門過高會(huì)導(dǎo)致外氣壓力過大而影響內(nèi)部工作環(huán)境。物品盡量避免放置在回風(fēng)口(沖孔網(wǎng))上方，以致堵塞影響空氣循環(huán)流暢此外。使用完後，用75%酒精擦拭工作臺(tái)及3面工作牆，拉上玻璃遮門，盡量讓風(fēng)扇繼續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘以上再將其關(guān)閉。最後打開紫外線之開關(guān)。.紫外線開啟時(shí)要注意玻璃遮門是否緊閉，照射約30分鐘至1小時(shí)即可關(guān)閉。放置於動(dòng)物房?jī)?nèi)之操作臺(tái)不需開啟紫外線，避免直射動(dòng)物身上。.定期更換預(yù)濾網(wǎng)(pre-filter)，並詳實(shí)記錄於「無菌操作臺(tái)維護(hù)記錄表」。以目視法檢查，若感覺很髒，即可更換。一般可使用300小時(shí)以上。高效率過濾網(wǎng)(HEPAfilter)可使用約1.5-2.0年，或使用時(shí)數(shù)超過4000小時(shí)/年即需更換。每次更換預(yù)濾網(wǎng)時(shí)，將操作臺(tái)及沖網(wǎng)孔拆開，以漂白水清潔。更換高效率過濾網(wǎng)時(shí)，打開風(fēng)扇連續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)，並以紫外線照射整晚。注意事項(xiàng).操作臺(tái)上方排氣口應(yīng)打開約1/3，以利空氣排出。.盡量避免身體與頭部伸入操作臺(tái)內(nèi)。.操作臺(tái)除了放置必要之工作器材或耗材(飼料、水瓶、滅菌籠具、手套、擦手紙)之外，嚴(yán)禁將已滅菌過之器材暴露在操作臺(tái)之外。其他雜物一律移出。附件/表單6.1無菌操作臺(tái)維護(hù)記錄表日期更換品項(xiàng)放置位故障原因修繕情況初級(jí)過濾網(wǎng)高效過濾網(wǎng)移出處移入處□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)

備註◎已更換初級(jí)過濾網(wǎng)次數(shù)有次，高效率過濾網(wǎng)次數(shù)有次?！蚯鍧崈?nèi)部時(shí)間為更換初級(jí)過濾網(wǎng)時(shí)間。◎修繕情況清填修繕單號(hào)。日期更換品項(xiàng)放置位故障原因修繕情況初級(jí)過濾網(wǎng)高效過濾網(wǎng)移出處移入處□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)

□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)□小時(shí)備註◎已更換初級(jí)過濾網(wǎng)次數(shù)有次，高效率過濾網(wǎng)次數(shù)有次。◎清潔內(nèi)部時(shí)間為更換初級(jí)過濾網(wǎng)時(shí)間。◎修繕情況清填修繕單號(hào)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心緊急事故處理林志展（0925493255）f工務(wù)室（52222）f警衛(wèi)室（52143）-總機(jī)查詢（9）災(zāi)害：地震：大聲呼叫地震了-迅速離開中心-待震後安全無虞始可回中心現(xiàn)場(chǎng)火災(zāi)：大聲呼叫失火了-滅火器-查訪單位各區(qū)塊-林志展-工務(wù)室機(jī)械故障或異常：林志展-工務(wù)室動(dòng)物逃脫：關(guān)門-貼上警告標(biāo)誌-林志展-研究室-抓捕逃脫動(dòng)物-安樂死或淨(jìng)化

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心人員工作職責(zé)、項(xiàng)目及內(nèi)容時(shí)間工作項(xiàng)目工作內(nèi)容0800-0830晨間會(huì)議貫驗(yàn)動(dòng)物中心工作人員晨間會(huì)議（前日業(yè)務(wù)檢討及今日任務(wù)說明）0830-0900先前準(zhǔn)備空調(diào)檢查、設(shè)備叫修、消毒鍋開機(jī)、動(dòng)物房飼養(yǎng)用具準(zhǔn)備、隔離衣設(shè)備及器械包滅菌…等1630-17004亠土厶糸不合討論設(shè)備停機(jī)、動(dòng)物房環(huán)境檢查、叫修複檢、電源檢查、綜和檢討及單（今日業(yè)務(wù)檢討及明日任務(wù)說明）職稱職責(zé)工作流程及說明獸醫(yī)師綜合動(dòng)物中心經(jīng)營(yíng)管理。協(xié)助各式動(dòng)物外科手術(shù)之保定、麻醉及術(shù)後照顧。實(shí)驗(yàn)室環(huán)境監(jiān)測(cè)（每季）。進(jìn)出動(dòng)物健康監(jiān)測(cè)及檢疫（委外執(zhí)行）。支援醫(yī)學(xué)研究部業(yè)務(wù)（含動(dòng)物貫驗(yàn)申請(qǐng)表審核、動(dòng)物貫驗(yàn)許可書簽發(fā)）。院內(nèi)研究助理、專助及住院醫(yī)師教學(xué)訓(xùn)練。支援醫(yī)院住院醫(yī)師教學(xué)訓(xùn)練（含院外學(xué)員）。研發(fā)（研究計(jì)畫申請(qǐng)）。0800-0830晨間會(huì)議0830-0900先前準(zhǔn)備0900-0930動(dòng)物房巡察0930-1000動(dòng)物中心設(shè)備檢查1000-1200業(yè)務(wù)執(zhí)行1200-1300午休1300-1630業(yè)務(wù)執(zhí)行1630-1700綜合討論會(huì)議或機(jī)動(dòng)業(yè)務(wù)代養(yǎng)技術(shù)員動(dòng)物代養(yǎng)：0830-0930老EED飼養(yǎng)室（1）兔室(1)&(2)老鼠飼養(yǎng)室(1)&(2)&(3)0930-1030老EED飼養(yǎng)室（2）1030-1130老EED飼養(yǎng)室（3）藥物代謝室1130-1200行為觀察室&墊飼料室

行為觀察室1200-1300午休墊飼料室1300-1400藥物代謝室北側(cè)走道區(qū)及閘門1400-1500兔室（1）鞋櫃（含拖鞋清洗）1500-1600兔室（2）1600-1630北側(cè)走道區(qū)及門閘（含SPF區(qū)前室）清潔1630-1700綜合討論會(huì)議或機(jī)動(dòng)業(yè)務(wù)清潔技術(shù)員籠具清洗：0830-0900豬飼養(yǎng)區(qū)清潔豬飼養(yǎng)區(qū)清潔0900-0930狗飼養(yǎng)區(qū)清潔狗飼養(yǎng)區(qū)清潔0930-1000手術(shù)室清潔中央走道區(qū)清潔1000-1130籠具清洗（鼠）手術(shù)室清潔1130-1200中央走道區(qū)清潔（防塵墊更新）機(jī)械室及