常用pH緩沖液配置方法及注意事項(xiàng)

常用pH緩沖液配置方法及注意事項(xiàng)

常用pH緩沖溶液的配制和pH值序號(hào)溶液名稱配制方法pH值1氯化鉀-鹽酸13.0ml0.2mol/LHCl與25.0ml0.2mol/LKCl混合均勻后，加水稀釋至100ml1.72氨基乙酸-鹽酸在500ml水中溶解氨基乙酸150g,加480ml濃鹽酸，再加水稀釋至1L2.33一氯乙酸-氫氧化鈉在200ml水中溶解2g一氯乙酸后，加40gNaOH,溶解完全后再加水稀釋至1L2.84鄰苯二甲酸氫鉀-鹽酸把25.0ml0.2mol/L的鄰苯二甲酸氫鉀溶液與6.0ml0.1mol/LHCl混合均勻，加水稀釋至100ml3.65鄰苯一甲酸氫鉀-氫氧化鈉把25.0ml0.2mol/L的鄰苯二甲酸氫鉀溶液與17.5ml0.1mol/LNaOH混合均勻，加水稀釋至100ml4.86六亞甲基四胺-鹽酸在200ml水中溶解六亞甲基四胺40g,加濃HCl10ml，再加水稀釋至1L5.47磷酸二氫鉀-氫氧化鈉把25.0ml0.2mol/L的磷酸二氫鉀與23.6ml0.1mol/LNaOH混合均勻，加水稀釋至100ml6.88硼酸-氯化鉀-氫氧化鈉把25.0ml0.2mol/L的硼酸-氯化鉀與4.0ml0.1mol/LNaOH混合均勻，加水稀釋至100ml8.09氯化銨-氨水把0.1mol/L氯化銨與0.1mol/L氨水以2：1比例混合均勻9.110硼酸-氯化鉀-氫氧化鈉把25.0ml0.2mol/L的硼酸-氯化鉀與43.9ml0.1mol/LNaOH混合均勻，加水稀釋至100ml10.011氨基乙酸-氯化鈉-氫氧化鈉把49.0ml0.1mol/L氨基乙酸-氯化鈉與51.0ml0.1mol/LNaOH混合均勻11.612磷酸氫二鈉-氫氧化鈉把50.0ml0.05mol/LNaHPO與26.9ml0.1mol/I24NaOH混合均勻，加水稀釋至100mlt12.013氯化鉀-氫氧化鈉把25.0ml0.2mol/LKCl與66.0ml0.2mol/LNaOH混合均勻，加水稀釋至100ml13.0、常用溶液的配制（一）溶液配制注意事項(xiàng)1．藥品要有較好的質(zhì)量試劑分為優(yōu)級(jí)純（保證試劑，Guaranteedreagent,G?R?）、分析試劑(Antalyticalreagent,A.R.)化學(xué)純(Chemicalpure,C.P.)和實(shí)驗(yàn)試劑(Laboratoryreagent,L.R.)等等。工業(yè)用的化學(xué)試劑，雜質(zhì)較多，只在個(gè)別情況下應(yīng)用，如配洗液用的硫酸、配干燥劑的氯化鈣等。藥品稱量要精確。配制試劑用水應(yīng)用新鮮的去離子水或雙蒸餾水，比電阻值在50萬(wàn)歐姆以上，pH在5.5~7.0之間才可應(yīng)用，在組織培養(yǎng)等特殊用途時(shí)應(yīng)注意此項(xiàng)要求，配制一般化驗(yàn)用溶液只要求用雙蒸餾水或去離子水。配好后的溶液，應(yīng)立即除菌處理（如高壓滅菌、抽濾或加抑菌物質(zhì)），以防雜菌生長(zhǎng)。（二）0.067（1/15）Mol/L磷酸緩沖液l.l/15Mol/L磷酸二氫鉀溶液的配制：稱取磷酸二氫鉀（KHPO,A.R.）9.08g,用蒸餾水溶24解后，傾入1000ml容量瓶?jī)?nèi)，再稀釋至刻度(1000ml)。1/15Mol/L磷酸二氫鈉溶液的配制：稱取無(wú)水磷酸氫二鈉(NaHPO,A.R.)9?47g(或者24Na2HpO4?2H2O11.87g）用蒸餾水溶解后，放入

0*81078970*610"I8f'L0*82OWZZ'L0*680"I9070*190?8"9S"S9g*zs9'9STZg*9s^'9齊7-f7.(I?)oamq/iowsi"o(I?)OdH1/IOW9I"0Hd易磁無(wú)1/1。陽(yáng)【P9032J二專0HZ?OdHPN°1/§27,Za<n/i°w5i*0z峯期°1/§27,ZB9d1/1[0陋【P（三）070*86廠86"88I'19070*80*262*89?幵6*9乙予836「8^?og9?8*9e*g2*^68*8g*9gq?舒2*98*9乙￡662qw99789*99*8S*I687曠898"ISg"99*01站68L'L8"S22/9乙站90TI07897972\'7ZS"96*21l予8g*z□89*81曠92*618*08872^88'91「9曠肌8*92S*Z878Z勿0*90*820^2乙2「066*66"S站肌9*99T?7.I'L0N6&70*8f7.8*SOdHM1/IOW9I/IOdH它N1/I°wgi/IHdOdffilq/I°W9I/IOdH瑚1/IOW9I/IHd（任耋：⑨寅）鍛艇鞅翹帥I峯期°W4^W^>Hd回土密儡蟲'岡羽呦峯期瀟?￡°（WOOD圍IW吏尅幽*黝器如雖'M咪喜殳woooiNaHPO?12HO分子量=358?220.15Mol/L溶液242含53.7g/L。NaHPO?HO分子量=138?000.15Mol/L溶液含24220.7g/L。NaHPO?2H0分子量=156?030?15Mol/L溶液含24223?4g/L。0.2Mol/LPB緩沖液附表30?2mol/LPB緩沖液配制法pH0.2Mol/LNaHPO(ml)0.2Mol/LNaHPO(ml)5.8248.02492.06.012.387.76.218.581.56.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.07.272.028.07.481.019.07.687.013.07.891.58.58.094.75.30.2Mol/LNaHPO^2HOj容液35.61g/L242NaHPO?12HO溶液含71?64g/LTOC\o"1-5"\h\z2420.2Mol/LNaHPO?HO溶液含27?60g/L242NaHPO?2HO溶液含31?21g/L242

欲配0?1Mol/LPB緩沖液則在0?2Mol/LPB緩沖液的基礎(chǔ)上加H0稀釋1倍即可。欲配制PBS液時(shí)，則在溶液中加0?85%的NaCl溶液即可。（五）無(wú)鈣鎂離子磷酸緩沖鹽水（PBS）（0.15Mol/LPH7.2）NaCl8.0gKCl0.2gNaHPO1?15g（如為NaHPO?12H0,則為2?89g）KHPO0.2g將上述試劑依次溶于1000ml去離子水中，完全溶解后，115°C高壓滅菌10min~15min,存在4°C冰箱中備用。此液可用于配制和稀釋細(xì)胞分散劑以及洗滌細(xì)胞培養(yǎng)物。（六）硼酸鹽緩沖液（Boratesalinebuffer）1?硼酸（HBO）0.2Mol/L硼酸：硼酸12?37g加水至1000ml。2?硼砂（NaBO）0.05Mol/L硼砂：硼砂19?07g加水至1000ml。附表4不同pH的0?2Mol/L硼酸緩沖液配制法pH0.05Mol/LpH0.05Mol/L硼砂（ml）0.2Mol/L硼酸（ml）7.41.09.07.61.58.5pH0.05Mol/L硼砂（ml）0.2Mol/L硼酸（ml）8.23.56.58.44.55.57.82.08.08.76.04.0&03.07.09.0&02.0七）巴比妥緩沖液pH8?2離子強(qiáng)度0.05Mol/L巴比妥緩沖液巴比妥鈉47.6g蒸餾水3000ml1.17NHCl55.0ml（1.17NHCl=193ml濃HCl加1807ml蒸餾水）⑴將4.76g巴比妥鈉溶于3000ml蒸餾水。⑵加1.17NHCl55ml。⑶用HCl調(diào)節(jié)pH到8.2,并加蒸餾水至4265ml。pH8?40.06Mol/L巴比妥緩沖液巴比妥1.84g巴比妥鈉10?30g加蒸餾水至1000?00mlpH8.60.06Mol/L巴比妥緩沖液巴比妥1.66g巴比妥鈉12.76g加蒸餾水1000.00ml（八）0.2Mol/L醋酸鹽緩沖液見表附表5附表50.2Mol/L醋酸鹽緩沖液配制法

pH0.2Mol/LTris(ml)pH0.2Mol/LTris(ml)0.1Mol/LHCl(ml)pH0.2Mol/LTris(ml)0.1Mol/LHCl(ml)23°C37C23C37C9.108.952558.067.902527.58.928.76257.57.967.822530.08.758.602510.57.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.57.667.522537.58.408.272517.57.547.402540.08.328.182520.07.367.222542.5九）三緩沖液）Tris—HCl不同pH,0?05Mol/L25ml0?2Mol/L三羥甲基氨基甲烷加xmlO?1NHCl，加水稀釋至100ml（見下表）附表6Tris—HCl緩沖液配制法pH0.2Mol/LTris(ml)0.1NHCl(ml)pH0.2Mol/LTris(ml)0.1NHCl(ml)23C37C23C37C9.108.962558.057.902527.58.928.78257.57.967.822530.08.748.602510.07.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.07.667.522537.58.408.272517.57.547.402540.08.328.182520.07.367.222542.58.238.102522.57.207.052545.08.148.002525.025三羥甲基氨基甲烷（Tris）分子量=121.140.2Mol/L三羥甲基氨基甲烷：Tris24?23g,加水至1000ml。0.1NHCl：取HC18?6ml,加水至1000ml。（十）0.5Mol/LpH9.5碳酸鹽緩沖液NaHCO3.70g3NaCO0.60g23溶于600.00ml蒸餾水中即得。不用時(shí)塞緊瓶塞，以免吸收空氣中二氧化碳使PH下降。最好小量配制。（十一）甘油磷酸緩沖液配制pH8.0磷酸緩沖液0.1Mol/LNaHPO94.50ml240.1NNaHPO5.50ml24混合即可9份甘油與1份pH8.0磷酸緩沖液混合，即為甘油磷酸緩沖液。用途：用于免疫熒光試驗(yàn)。（十二）Hank's液1?貯存液NaCl80.00gKCl4.00gNaHPO?12HO1.52g242KHPO0.60g24葡萄糖4.00g0.4％酚紅液50.00ml雙餾水加至100?00ml115°C高壓滅菌15min,冰凍保存。2.工作液貯存液1份雙餾水9份115C高壓滅菌15min。臨用時(shí)用滅菌的5.6%NaHCO液調(diào)pH值至7.2左右（溶液呈橙紅色）。3（十三）萘（鈉）氏試劑（Nessler'sreagent）配方1:氯化汞6.0g碘化鉀12.4g20%NaOH30ml加蒸餾水至100ml配方2：碘化汞11.5g碘化鉀8g蒸餾水50ml（完全溶解后）過濾，加20%NaOH50ml。用途：檢測(cè)溶液中氨離子。（十四）阿氏（Alsever's）液葡萄糖2.05g檸檬酸鈉0.80g氯化鈉0.42g蒸餾水100ml溶解后，以10%檸檬酸調(diào)節(jié)pH至6.1,過濾，分裝，10磅10min滅菌，4°C保存。（十五）青、鏈霉素混合液（簡(jiǎn)稱S.P.液或雙抗液）青霉素（40萬(wàn)U）5支鏈霉素（200萬(wàn)ug）1支分別溶于100ml滅菌無(wú)離子水中或共同溶于200ml滅菌無(wú)離子水中，混合后分裝小瓶，置-10C~-20C冰箱保存?zhèn)溆茫?萬(wàn)單位ug/ml）。臨用時(shí)，按1%的量加入營(yíng)養(yǎng)液或其他溶液中，最后濃度是青霉素100U/ml,鏈霉素100ug/ml。（十六）洗液（清潔液）配方1：重鉻酸鉀150g蒸餾水300ml濃硫酸3000ml將重鉻酸鉀加入蒸餾水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩堝中加熱溶解，然后慢慢加入濃硫酸，邊加邊攪拌，見發(fā)熱過劇