2018版高考生物復(fù)習(xí)生物技術(shù)實(shí)踐第47講微生物培養(yǎng)與應(yīng)用學(xué)案

第47講微生物的培育與應(yīng)用1.微生物的分別和培育2.某種微生物數(shù)目的測定3.培育基對微生物的選擇作用4.利用微生物發(fā)酵來生產(chǎn)特定的產(chǎn)物以及微生物在其余方面的應(yīng)用培育基及微生物的純化培育技術(shù)1．培育基觀點(diǎn)：人們依照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不一樣需求，配制出供其生長生殖的營養(yǎng)基質(zhì)。營養(yǎng)構(gòu)成：一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽。別的，還需要知足微生物生長對pH、氧氣以及特別營養(yǎng)物質(zhì)的要求。固體培育基：含凝結(jié)劑(3)分類液體培育基：不含凝結(jié)劑2．無菌技術(shù)的主要方法及合用對象[連一連]3．制備牛肉膏蛋白胨固體培育基依照：配方比率計(jì)算計(jì)算：配制必定體積的培育基時(shí)，各樣成分的用量牛肉膏要放在稱量紙上稱量稱量牛肉膏和蛋白胨都易吸潮，稱取時(shí)動作要快速，稱取后實(shí)時(shí)蓋上瓶蓋牛肉膏連同稱量紙一起放入燒杯加入少許水，加熱牛肉膏熔解后拿出稱量紙熔解加入稱量好的蛋白胨和氯化鈉，攪拌加入瓊脂，加熱使其融化，其實(shí)不停攪拌補(bǔ)加蒸餾水定容滅菌前：調(diào)理pH(4)滅菌方法：高壓蒸汽滅菌法。壓力為100kPa，溫度為121℃，滅菌時(shí)間為15～30min倒平板應(yīng)在酒精燈火焰鄰近甲、乙、丙中的滅菌方法是灼燒滅菌(5)倒平板丁中的操作需要等候平板冷卻凝結(jié)后才能進(jìn)行4．純化大腸桿菌原理：在培育基大將細(xì)菌稀釋或分別成單個(gè)細(xì)胞，使其長成單個(gè)的菌落，這個(gè)菌落就是純化的細(xì)菌菌落。主要方法：圖甲可表示用平板劃線法接種獲取的平板；圖乙可表示用稀釋涂布平板法接種獲取的平板。純化原理：圖甲菌體的分別是經(jīng)過一系列的連續(xù)劃線操作實(shí)現(xiàn)的；圖乙菌體的分別是經(jīng)過圖丙梯度稀釋和圖丁涂布平板操作實(shí)現(xiàn)的。5．菌種的保留方法關(guān)于屢次使用的菌種，能夠采納暫時(shí)收藏的方法。關(guān)于需要長久保留的菌種，能夠采納甘油管藏的方法。1．培育基的配制原則目的要明確：配制時(shí)應(yīng)依據(jù)微生物的種類、培育目的等確立配制的培育基種類。營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各樣營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比率。(3)pH要適合：細(xì)菌為6.5～7.5，放線菌為7.5～8.5，真菌為5.0～6.0，培育不一樣微生物所需pH不一樣。消毒和滅菌的辨析項(xiàng)目條件結(jié)果常用方法應(yīng)用范圍煮沸消毒法平時(shí)用品較為溫僅殺死物體表面或巴氏消毒法不耐高溫和的物的液體消毒內(nèi)部的部分對人體理或化有害的微生物化學(xué)藥劑用酒精擦抹雙學(xué)方法手，用氯氣消消毒法毒水源灼燒滅菌法接種工具激烈的殺死物體內(nèi)外全部干熱滅菌法玻璃器皿、滅菌理化因的微生物，包含芽金屬工具素孢和孢子高壓蒸汽培育基及容滅菌法器的滅菌兩種純化細(xì)菌方法的比較項(xiàng)目長處弊端合用范圍平板劃能夠察看菌落特色，對混淆菌不可以計(jì)數(shù)合用于線法進(jìn)行分別好氧菌稀釋涂操作復(fù)雜、合用于厭氧菌能夠計(jì)數(shù)，能夠察看菌落特色需要涂布布平板法和兼性厭氧菌多個(gè)平板認(rèn)清不一樣生物需要的營養(yǎng)物質(zhì)不一樣①微生物需要的營養(yǎng)成分有水、無機(jī)鹽、碳源、氮源，有些微生物還需要特別營養(yǎng)物質(zhì)，如生長因子。②在人和動物中，營養(yǎng)物質(zhì)包含水、無機(jī)鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類。③在植物中，營養(yǎng)物質(zhì)包含礦質(zhì)元素、水、二氧化碳三類。平板劃線操作的注意事項(xiàng)①操作第一步即取菌種以前及每次劃線以前都需要對接種環(huán)進(jìn)行火焰灼燒滅菌，劃線操作結(jié)束時(shí)，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的不一樣：a．第一次操作目的是殺死接種環(huán)上原有的微生物。b．每次劃線之間操作目的是殺死前一次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接根源于前一次劃線的尾端，使每次劃線菌種數(shù)目減少。c．劃線結(jié)束操作目的是殺死接種環(huán)上殘余的菌種，防止細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。②灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，免得溫度太高殺死菌種。③第二次及其此后的劃線操作老是從前一次劃線尾端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目跟著劃線次數(shù)的增添而漸漸減少，最后獲取由單個(gè)細(xì)菌生殖而來的菌落。④劃線時(shí)最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。⑤劃線使勁大小要適合，防備使勁過大將培育基劃破。1．如圖甲、乙是微生物接種常用的兩種方法，請回答有關(guān)問題：圖甲是利用________法進(jìn)行微生物接種，圖乙是利用________法進(jìn)行微生物接種。這兩種方法所用的接種工具分別是________和________；對這兩種接種工具進(jìn)行滅菌和消毒的方法挨次是________和酒精消毒。接種操作為何必定要在酒精燈火焰鄰近進(jìn)行？________________________________________________________________________________________________________。(3)接種后，在固體培育基上培育細(xì)菌時(shí)為何進(jìn)行倒置培育？________________________________。(4)如圖是采納上述接種方法接種后培育的成效圖解，其接種方法是

________(

填“圖甲”或“圖乙”

)。分析：圖甲和圖乙分別是平板劃線法和稀釋涂布平板法，這兩種方法所用的接種工具分別是接種環(huán)和涂布器。因?yàn)樵诰凭珶艋鹧驵徑嬖谥鵁o菌地區(qū)，所以接種常在火焰鄰近進(jìn)行。在微生物培育過程中會產(chǎn)生水，對微生物的生長造成影響，故需要倒置培育。答案：(1)平板劃線稀釋涂布平板接種環(huán)涂布器灼燒滅菌火焰鄰近存在著無菌地區(qū)防止培育過程產(chǎn)生的水分影響微生物的生長圖乙2．(2016·高考全國卷丙，39)某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液為實(shí)驗(yàn)資料分別純化乳酸菌。分別純化所用固體培育基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培育基中的碳酸鈣。回答以下問題：分別純化乳酸菌時(shí)，第一需要用__________________對泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋，進(jìn)行梯度稀釋的原由是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(2)推斷在分別純化所用的培育基中加入碳酸鈣的作用有__________________和__________________。分別純化時(shí)應(yīng)精選出__________________的菌落作為候選菌。(3)乳酸菌在－20℃長久保留時(shí)，菌液中常需要加入必定量的________________(填“蒸餾水”“甘油”或“碳酸鈣”)。分析：(1)分別純化乳酸菌過程中，需要在固體培育基上培育乳酸菌并獲取單菌落。由于泡菜濾液中菌的濃度高，

直接培育很難分別獲取單菌落，

故分別純化乳酸菌時(shí)，

第一需要用無菌水對泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋。

(2)因?yàn)槿樗峋x產(chǎn)生的乳酸能夠溶解培育基中的碳酸鈣，形成透明圈，故培育基中加入碳酸鈣可用于鑒識乳酸菌，

同時(shí)碳酸鈣也能夠中和乳酸菌產(chǎn)生的乳酸。(3)乳酸菌在－20℃長久保留時(shí)，菌液中需要加入必定量的甘油，加甘油是為了防止水結(jié)冰產(chǎn)生冰晶損害細(xì)胞。答案：(1)無菌水泡菜濾液中菌的濃度高，直接培育很難分別獲取單菌落鑒識乳酸菌中和產(chǎn)生的乳酸(或酸)擁有透明圈甘油土壤中分解尿素的細(xì)菌的分別與計(jì)數(shù)1．土壤中分解尿素的細(xì)菌的分別與計(jì)數(shù)分別原理：土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕?，這類物質(zhì)在把尿素分解成無機(jī)物的過程中起到催化作用。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般用稀釋涂布平板法。2．實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣→富含有機(jī)質(zhì)的土壤表層土↓樣品的稀釋→往常采納必定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培育，以保證獲取菌落數(shù)在30～之間、適于計(jì)數(shù)的平板↓(3)接種→用稀釋涂布平板法接種↓細(xì)菌：30～37℃培育1～2天培育放線菌：25～28℃培育5～7天霉菌：25～28℃培育3～4天↓察看→依據(jù)菌落的特色區(qū)分微生物↓計(jì)數(shù)→統(tǒng)計(jì)菌落的數(shù)目↓計(jì)算→依據(jù)公式“每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×M[C代表某一稀釋度下平板上生長的均勻菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)]”進(jìn)行計(jì)算1．選擇培育基四種常有制備方法或?qū)嵗?．兩種計(jì)數(shù)方法的比較間接計(jì)數(shù)法

直接計(jì)數(shù)法(稀釋涂布平板法

)

(顯微計(jì)數(shù)法

)當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，

培育基表面生長的一個(gè)菌落，根源于樣品稀釋

利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)原理

液中的一個(gè)活菌，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)平板上的

板，在顯微鏡下計(jì)算必定容積的樣品菌落數(shù)，就能推斷出樣品中大概含有

中微生物的數(shù)目多少活菌每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×MC：某稀釋度下平板上生長的均勻菌每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)：每小格均勻公式細(xì)菌數(shù)×400×104×稀釋倍數(shù)落數(shù)；V：涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)；M：稀釋倍數(shù)當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)菌體連在一起時(shí)，平板弊端上察看到的不過一個(gè)菌落不可以區(qū)分細(xì)胞死活結(jié)果比實(shí)質(zhì)值偏小比實(shí)質(zhì)值偏大設(shè)置比較和重復(fù)比較項(xiàng)目目的實(shí)例

比較清除非測試要素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響空白比較：確立培育基制作能否合格

重復(fù)清除有時(shí)要素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響同一稀釋度涂布起碼3個(gè)平板1．“選擇菌落數(shù)在30～300的平板”的兩個(gè)提示用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)微生物時(shí)，要求選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。解題時(shí)易出現(xiàn)以下誤會：只獲取1個(gè)菌落數(shù)在30～300的平板是錯(cuò)誤的。錯(cuò)誤的原由是不切合實(shí)驗(yàn)的重還原則，易遇到有時(shí)要素的影響。獲取3個(gè)或3個(gè)以上菌落數(shù)在30～300的平板，也不必定正確，這可能有兩種狀況：①不一樣平板間差別較大，如獲取3個(gè)平板，菌落數(shù)分別為230、34、240，固然菌落數(shù)均在“30～300”，這也是不正確的，因?yàn)椤?4”與“230”“240”差別太大，應(yīng)從頭實(shí)驗(yàn)找出原由。②不一樣平板之間差別不大，是切合要求的，用其均勻值作為估量的最后結(jié)果?？梢姡鋵?shí)不是只需獲取3個(gè)“菌落數(shù)在30～300的平板”即可，而應(yīng)當(dāng)是涂布的同一稀釋度的平板均切合“菌落數(shù)在30～300之間”且無較大差別，說明實(shí)驗(yàn)操作合格，才能依照計(jì)算公式進(jìn)行計(jì)算。2．選擇培育基與鑒識培育基種類制備方法原理用途舉例選擇依照某些微生物從眾多微生物中加入青霉素分別培育基中加入某對某些物質(zhì)的特培育分別所需的微生獲取酵母菌和霉些化學(xué)物質(zhì)殊需求或抗性而基物菌設(shè)計(jì)鑒識培育基中加入某產(chǎn)生特定的顏色鑒識不一樣種類的用伊紅—美藍(lán)培培育基

種指示劑或化學(xué)藥品

或其余變化

微生物

養(yǎng)基鑒識大腸桿菌1．(2016·高考四川卷，10)圖甲是從土壤中挑選產(chǎn)脲酶細(xì)菌的過程，圖乙是脲酶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA部分序列。圖中選擇培育基應(yīng)以________為獨(dú)一氮源；鑒識培育基還需增添________作指示劑，產(chǎn)脲酶細(xì)菌在該培育基上生長一段時(shí)間后，其菌落四周的指示劑將變?yōu)開_______________________________________________________________________色。(2)在5個(gè)細(xì)菌培育基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為50.1mL，培育一10的土壤樣品溶液段時(shí)間后，平板上長出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。該過程采納的接種方法是______________，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)目為________×108個(gè)；與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法對比，此計(jì)數(shù)方法測得的細(xì)菌數(shù)較________。(3)現(xiàn)有一菌株的脲酶因?yàn)榛蛲蛔兌Щ睿蛔兒蠡蜣D(zhuǎn)錄的mRNA在圖乙箭頭所示地點(diǎn)增添了70個(gè)核苷酸，使圖乙序列中出現(xiàn)停止密碼(停止密碼有UAG、UGA和UAA)。突變基因轉(zhuǎn)錄的mRNA中，停止密碼為________，突變基因表達(dá)的蛋白質(zhì)含________個(gè)氨基酸。分析：(1)挑選產(chǎn)脲酶細(xì)菌的選擇培育基應(yīng)以尿素為獨(dú)一氮源；鑒識培育基還需要增添酚紅作指示劑，產(chǎn)脲酶細(xì)菌產(chǎn)生的脲酶能夠?qū)⒛蛩胤纸獬砂?，致使培育基的pH高升，菌落四周的指示劑將變?yōu)榧t色。(2)圖中過程采納的接種方法是稀釋涂布平板法，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)目為：(156＋178＋191)/3÷0.1×105＝1.75×108，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法所得數(shù)據(jù)包含死的細(xì)菌，且稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)所計(jì)菌落數(shù)少于真實(shí)的活細(xì)菌數(shù)，故與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法對比，此計(jì)數(shù)法測得的細(xì)菌數(shù)較少。(3)圖乙從開端密碼算起的堿基序列號為271，前270個(gè)堿基決定90個(gè)氨基酸，從271位到箭頭處能夠決定1個(gè)氨基酸，而后插入70個(gè)核苷酸，可決定23個(gè)氨基酸，多出一個(gè)堿基，加上后邊的AG恰好能夠決定1個(gè)氨基酸，則后邊UGA是停止密碼。所以突變基因轉(zhuǎn)錄的mRNA停止密碼為UGA，突變基因表達(dá)的蛋白質(zhì)所含氨基酸數(shù)為90＋1＋23＋1＝115(個(gè))。答案：(1)尿素酚紅紅(2)稀釋涂布平板法1.75少(3)UGA1152．(2016·高考全國卷乙，39)空氣中的微生物在重力等作用下，能夠必定程度地沉降。某研究小組欲用平板采集教室空氣中的微生物，以認(rèn)識教室內(nèi)不一樣高度空氣中微生物的散布狀況。實(shí)驗(yàn)步驟以下：①配制培育基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O);②制作無菌平板；③設(shè)置空白比較組和若干實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行有關(guān)操作；④將各組平板置于37℃恒溫箱中培育一段時(shí)間，統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的均勻數(shù)。回答以下問題：該培育基中微生物所需的氮根源于____________。若要達(dá)成步驟②，該培育基中的成分X往常是__________________。步驟③中，實(shí)驗(yàn)組的操作是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)若在某次檢查中，某一實(shí)驗(yàn)組平板上菌落均勻數(shù)為

36個(gè)/平板，而空白比較組的一個(gè)平板上出現(xiàn)了

6個(gè)菌落，這類結(jié)果說明在此次檢查中出現(xiàn)了

______________現(xiàn)象。若將30(即36－6)個(gè)/平板作為本組菌落數(shù)的均勻值，該做法______________(填“正確”或“不正確”)。分析：(1)牛肉膏、蛋白胨都含有N，可為微生物的生長供給氮源。制作無菌平板所用培育基為固體培育基，所以X應(yīng)為瓊脂。(2)依據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康目芍?，本?shí)驗(yàn)的自變量為教室的不一樣高度，因變量為微生物的散布狀況，故實(shí)驗(yàn)組的操作應(yīng)為將實(shí)驗(yàn)組平板分別擱置在教室不一樣高度的地點(diǎn)上，開蓋裸露一段時(shí)間。(3)空白培育基上出現(xiàn)菌落，說明培育基被污染了，即檢查中出現(xiàn)了污染現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)過程中若培育基被污染，一定將其扔掉，從頭制作新的培育基進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。答案：(1)牛肉膏、蛋白胨瓊脂將實(shí)驗(yàn)組平板分別擱置在教室不一樣高度的地點(diǎn)上，開蓋裸露一段時(shí)間污染不正確微生物的挑選與鑒識1．纖維素酶構(gòu)成：纖維素酶是一種復(fù)合酶，它包含C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。作用2．菌種挑選方法：剛果紅染色法。原理纖維素分解菌↓剛果紅纖維素酶→紅色復(fù)合物――→紅色消逝、出現(xiàn)透明圈。纖維素即：使用以纖維素為獨(dú)一碳源的選擇培育基，依據(jù)能否產(chǎn)生透明圈來挑選纖維素分解菌。3．挑選流程土壤取樣：富含纖維素的環(huán)境↓選擇培育：用選擇培育基培育，以增添纖維素分解菌的數(shù)目↓梯度稀釋↓涂布平板：將樣品涂布于含CR的鑒識纖維素分解菌的培育基上↓精選產(chǎn)生透明圈的菌落：產(chǎn)生纖維素酶的菌落四周出現(xiàn)透明圈1．微生物的鑒識方法菌落特色鑒識法：依據(jù)微生物在固體平板培育基表面形成的菌落的形狀、大小、隆出發(fā)度和顏色等特色進(jìn)行鑒識。指示劑鑒識法：如以尿素為獨(dú)一氮源的培育基中加入酚紅指示劑，培育某種微生物后，培育基變紅說明該種微生物能夠分解尿素。染色鑒識法：如利用剛果紅染色法，依據(jù)培育基中出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈來挑選分解纖維素的微生物。2．挑選微生物的三種方法單菌落挑取法：利用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種到固體平板培育基表面，直接依據(jù)微生物菌落的特色利用單菌落挑取的方法獲取目的微生物。選擇培育法：利用選擇培育基對微生物進(jìn)行選擇培育，直接獲取目的微生物。判定培育法：利用鑒識培育基使目的微生物菌落體現(xiàn)獨(dú)有的特色，而后挑選目的微生物。3．挑選微生物的兩個(gè)實(shí)例比較比較土壤中分解尿素分解纖維素的項(xiàng)目的細(xì)菌的分別微生物的分別方法利用以尿素為獨(dú)一氮源的選擇培育利用富含纖維素的選擇培育基進(jìn)行基進(jìn)行選擇培育選擇培育只有分解尿素的細(xì)菌能夠合成脲因?yàn)榕嘤泻胸S富的纖維素，原理酶，才能在以尿素為獨(dú)一氮源的培所以能夠分解纖維素的微生物擁有養(yǎng)基上生長更多的生計(jì)時(shí)機(jī)而大批生殖在培育基中加入酚紅指示劑，指示剛果紅染色法，四周出現(xiàn)透明圈的鑒識劑變紅說明菌落中的菌體為分解尿菌落為分解纖維素的微生物的菌落素的細(xì)菌纖維素分解菌的選擇培育基中其實(shí)不僅有纖維素一種碳源。纖維素分解菌的選擇培育基上生長的其實(shí)不不過纖維素分解菌。纖維素分解菌菌落四周的透明圈的大小與纖維素分解菌分解纖維素的能力呈正相關(guān)。1．牛奶是微生物生長的優(yōu)秀培育基。牛奶在飲用前都要經(jīng)過巴氏消毒，以殺死有害微生物。為檢測消毒前后牛奶中細(xì)菌含量變化狀況，做以下圖操作。用無菌吸管從錐形瓶中汲取1mL生牛奶稀釋液至盛有9mL無菌水的試管中，混淆均勻，這樣再重復(fù)2次。請回答以下有關(guān)問題：巴氏消毒的方法是________________________________________________________________________，使用這類方法對生鮮牛奶進(jìn)行消毒的利處是________。取最后的牛奶稀釋液0.1mL滴在培育基長進(jìn)行涂布，應(yīng)選擇的涂布工具是以下圖中的________。圖中所示方法為稀釋培育法，理想狀況下，培育一段時(shí)間后可在培育基表面形成菌落。若用該方法培育設(shè)置了

3個(gè)培育皿，菌落數(shù)分別為

35個(gè)、33個(gè)、34個(gè)，則能夠推斷生牛奶中每毫升含細(xì)菌數(shù)為

________個(gè)，運(yùn)用這類方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果常常較實(shí)質(zhì)值

________(填“偏大”或“偏小”

)，原由是________________________________________________________________________。從生牛奶取樣培育獲取的菌落中，混有各樣雜菌，從中檢測大腸桿菌的方法是在培育基中加入________，菌落擁有______________________特色的能夠認(rèn)定為大腸桿菌。答案：(1)70

～75

℃煮

30分鐘(或

80

℃煮

15分鐘)

牛奶的營養(yǎng)成分不被損壞

(2)B(3)3.4

×106

偏小

個(gè)別菌落可能是由

2個(gè)或多個(gè)細(xì)菌形成的

(4)伊紅—美藍(lán)

(金屬光澤的紫)黑色2．(高考新課標(biāo)全國卷Ⅰ改編)植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?；卮鹨韵聠栴}：(1)分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由

3種組分構(gòu)成的復(fù)合酶，其中的葡萄糖苷酶可將

________分解成

________。在含纖維素的培育基中加入剛果紅(CR)時(shí)，CR可與纖維素形成________色復(fù)合物。用含有CR的該種培育基培育纖維素分解菌時(shí)，培育基上會出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的________。為從富含纖維素的土壤中分別獲取纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計(jì)了甲、乙兩種培育基(成分見表)：纖維CR溶液酵母膏無機(jī)鹽淀粉素粉瓊脂水培育＋＋＋＋－＋＋基甲培育＋＋＋－＋＋＋基乙注：“＋”表示有，“－”表示無。據(jù)表判斷，培育基甲________(填“能”或“不可以”)用于分別和鑒識纖維素分解菌，原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________；培育基乙________(填“能”或“不可以”)用于分別和鑒識纖維素分解菌，原由是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。分析：(1)纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般以為它起碼包含三種組分，即C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶能使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶能將纖維二糖分解成葡萄糖。(2)剛果紅是一種染料，能夠與培育基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，紅色復(fù)合物就沒法形成，培育基中就會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們能夠經(jīng)過能否產(chǎn)生透明圈來挑選纖維素分解菌。(3)纖維素分解菌的選擇培育基為液體培育基，而用于分別和鑒識纖維素分解菌的培育基為固體培育基，而且培育基中需含有纖維素，才能與CR形成紅色復(fù)合物，有纖維素分解菌時(shí)才能形成以纖維素分解菌為中心的透明圈。答案：(1)纖維二糖葡萄糖紅透明圈不可以液體培育基不可以用于分別單菌落不可以培育基中沒有纖維素，不會形成CR—纖維素紅色復(fù)合物，即便出現(xiàn)單菌落也不可以確立其為纖維素分解菌3．(2017·河北邯鄲一模)某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機(jī)化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培育基，成功挑選到能高效降解化合物A的細(xì)菌(目的菌)。實(shí)驗(yàn)的主要步驟以下圖。請剖析回答以下問題：(1)培育基中加入化合物

A的目的是

________________，這類培育基屬于

________培育基。(2)“目的菌”生長所需的氮源和碳源是來自培育基中的由此推斷“目的菌”的代謝種類是____________。

________。實(shí)驗(yàn)需要振蕩培育，(3)在上述實(shí)驗(yàn)操作過程中，獲取純凈“目的菌”的重點(diǎn)是

________________。轉(zhuǎn)為固體培育基時(shí)，常采納平板劃線的方法進(jìn)行接種，此過程中所用的接種工具是________，操作時(shí)采納的滅菌方法是________。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過的培育基應(yīng)當(dāng)進(jìn)行滅菌辦理才能倒掉，這樣做的目的是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(6)某同學(xué)計(jì)劃統(tǒng)計(jì)污水池中“目的菌”的總數(shù)，他采納

104、105、106稀釋液進(jìn)行平板劃線，每種稀釋液都設(shè)置了

3個(gè)培育皿，從設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)的角度看，

還應(yīng)設(shè)置的一組比較實(shí)驗(yàn)是__________________________________，此比較實(shí)驗(yàn)的目的是______________________________。分析：(1)

該實(shí)驗(yàn)的目的是挑選“目的菌”，故培育基中增添的化合物

A起選擇作用。(2)微生物正常生長需要碳源、氮源、無機(jī)鹽等，由培育基中增添的物質(zhì)種類知：化合物

A應(yīng)當(dāng)給微生物生長供給碳源、氮源。培育過程需振蕩，說明目的菌是需氧型微生物。(6)統(tǒng)計(jì)污水池中的“目的菌”時(shí)應(yīng)設(shè)置空白比較，以用于查驗(yàn)培育基能否滅菌嚴(yán)格。答案：(1)挑選目的菌選擇(2)化合物A異養(yǎng)需氧型(3)防備外來雜菌污染(4)接種環(huán)灼燒滅菌(5)防備造成環(huán)境污染(6)不接種的空白培育基查驗(yàn)培育基滅菌能否合格課時(shí)作業(yè)1．(2017·武漢調(diào)研)如表所示為培育某種微生物的培育基配方，請回答有關(guān)問題：KHPONaHPOMgSO4·葡萄糖尿素蒸餾水24247H2O1.4g2.1g0.2g10.0g1.0g定容至1000mL(1)該培育基只同意分解尿素的細(xì)菌生長，這類培育基稱為________培育基。該培育基會克制其余種類微生物生長，其原由是該培育基________________________________________________________________________。若要經(jīng)過統(tǒng)計(jì)培育基中菌落數(shù)來預(yù)計(jì)樣品中的細(xì)菌數(shù)，上述培育基中還需要增添的成分是________，接種時(shí)應(yīng)采納________________法，該方法接種培育后的菌落，不行能是圖中的________。從土壤中分別出分解尿素的細(xì)菌后，要對其做進(jìn)一步的判定，可在上述培育基中加入________指示劑，培育該菌后，假如指示劑變________，可初步判定該種細(xì)菌能夠分解尿素。(4)某同學(xué)用0.1mL稀釋液在稀釋倍數(shù)為106的平板中測得菌落數(shù)的均勻值為163，則每毫升樣品中的細(xì)菌數(shù)是________個(gè)。答案：(1)選擇以尿素為獨(dú)一的氮源(2)瓊脂稀釋涂布平板D酚紅紅(4)1.63×1092．(2017·江西贛中南五校第一次聯(lián)考)如表是某企業(yè)研發(fā)的一種培育大腸桿菌菌群的培育基配方，請依據(jù)表格和所學(xué)知識回答以下有關(guān)問題：成分蛋白胨乳糖蔗糖KHPO指示劑瓊脂24含量(g)10.05.05.02.00.212.0將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL從生態(tài)系統(tǒng)的成分上看，大腸桿菌屬于________。若依據(jù)用途區(qū)分，該培育基屬于________(填“選擇”或“鑒識”)培育基。若要用上述培育基來挑選出土壤中的尿素分解菌，培育基的營養(yǎng)成分必要如何改正？________________，并用________作為指示劑。(3)在微生物培育的過程中，為防備雜菌污染，需要對培育基和培育皿進(jìn)行

________；操作者的雙手需要進(jìn)行沖洗和

________。圖1和圖2是培育某細(xì)菌的結(jié)果圖，其對應(yīng)的接種方法分別是：________和________，這兩種方法接種后培育基上都能夠獲取由單個(gè)細(xì)胞生殖所形成的方法可用來對活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。別的，測定微生物數(shù)目的另一種方法是

________。圖1所用的接種________。(5)以下過程中所利用的主要微生物的細(xì)胞構(gòu)造與大腸桿菌較相像的有A．制作果酒B．由果酒制作果醋

________。C．制作泡菜

D．制作腐乳分析：(1)

大腸桿菌只好從環(huán)境中攝入有機(jī)物，

不可以自制合成有機(jī)物，屬于分解者。

(2)該培育基中含有指示劑，屬于鑒識培育基。尿素分解菌能夠分解尿素，而其余微生物不可以，所以可將培育基中的蛋白胨改為尿素用于挑選土壤中的尿素分解菌，并用酚紅作為指示劑，尿素分解菌分解尿素產(chǎn)生了氨可使酚紅變紅。

(3)培育微生物時(shí)，培育基和培育皿需要滅菌，操作者雙手需要進(jìn)行消毒。

(4)圖1采納的是稀釋涂布平板法，圖

2采納的是平板劃線法。單個(gè)微生物細(xì)胞生殖所形成的細(xì)胞群叫菌落。

(5)A、B、C、D中所用到的微生物主假如酵母菌、醋酸菌、乳酸菌、毛霉，醋酸菌、大腸桿菌和乳酸菌都是原核細(xì)胞，構(gòu)造相像。答案：(1)

分解者

(2)鑒識

將蛋白胨改成尿素

酚紅(3)滅菌

消毒

(4)稀釋涂布平板法

平板劃線法

菌落

顯微鏡直接計(jì)數(shù)法

(5)BC3．臨床使用抗生素前，有時(shí)需要做細(xì)菌耐藥實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)時(shí)，第一要從病人身上獲取少量樣本，而后依照必定的實(shí)驗(yàn)步驟操作，

以確立某致病菌對不一樣抗生素的敏感性。

回答以下問題：為了從樣本中獲取致病菌單菌落，可用________法或________法將樣本接種于固體培育基表面，經(jīng)過選擇培育、鑒識等步驟獲取。(2)取該單菌落適合稀釋，用________法接種于固體培育基表面，在37℃培育箱中培養(yǎng)24h，使其均勻生長，充滿平板。(3)為了檢測該致病菌關(guān)于抗生素的敏感性，將分別含有片均勻置于該平板上的不一樣地點(diǎn)，培育一段時(shí)間后，含

A、B、C、D四種抗生素的濾紙A的濾紙片四周出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌抗衡生素

A________；含

B的濾紙片四周沒有出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌抗衡生素B________；含C的濾紙片四周的透明圈比含

A的小，說明______________________________；含D的濾紙片四周的透明圈也比含A的小，且透明圈中出現(xiàn)了一個(gè)菌落，在清除雜菌污染的狀況下，此菌落很可能是抗生素D的________。(4)依據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，為達(dá)到抗菌目的，最好應(yīng)采納抗生素________。分析：(1)實(shí)驗(yàn)室中對微生物純化培育時(shí)，常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。(2)若讓已經(jīng)獲取的單個(gè)菌落在固體培育基上大批且均勻生殖，常用玻璃涂布器把稀釋的菌液均勻涂滿整個(gè)平板。(3)對某種抗生素越敏感的致病菌，在該抗生素存在的范圍內(nèi)，越不易生計(jì)，形成的透明圈就越大?？墒?，假如在透明圈中還有菌落生計(jì)，則說明這個(gè)菌落的細(xì)菌耐藥性很強(qiáng)。(4)經(jīng)過(3)可知，在應(yīng)用時(shí)，要想殺死某致病菌，就得選擇能使該致病菌大批死亡，即產(chǎn)生的透明圈大的那種抗生素。答案：(1)平板劃線稀釋涂布平板(2)稀釋涂布平板敏感不敏感該致病菌對C的敏感性比對A的弱耐藥菌(4)A4．(2017·廣西四市第一次聯(lián)考)如圖是某細(xì)菌純化培育過程中劃線接種的培育結(jié)果?；卮鹨韵聠栴}：在________(填圖中編號)地區(qū)出現(xiàn)了單個(gè)菌落，產(chǎn)生每個(gè)菌落的最先細(xì)菌數(shù)目是________個(gè)。據(jù)圖剖析，在培育基上劃線接種時(shí)，劃線的次序挨次是______(用編號表示)。如表是某微生物培育基的成分。編號成分含量編號成分含量①粉狀硫10g②(NH4)2SO40.4g③K2HPO44g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100mL①若培育從土壤中分別出來的自生固氮菌，該培育基應(yīng)增添________，去除________。②若要鑒識纖維素分解菌，可用________法，若要鑒識尿素分解菌，可在培育液中加入________________________________________________________________________。分析：(1)從圖中可知，②號地區(qū)出現(xiàn)了單個(gè)菌落；1個(gè)菌落由1個(gè)細(xì)菌生殖形成；根據(jù)菌落數(shù)目可判斷，劃線的次序挨次是①→③→②。(2)①自生固氮菌是異養(yǎng)生物，它可固定大氣中的N2，因此培育基中應(yīng)增添碳源去掉氮源。②鑒識纖維素分解菌可用剛果紅染色法，要鑒識尿素分解菌，可在培育液中加入酚紅指示劑。答案：(1)②1①→③→②(2)①碳源氮源②剛果紅染色酚紅指示劑(2017·重慶八中高三適應(yīng)性考試)欲從土壤中挑選出能產(chǎn)生脲酶的微生物并予以純化計(jì)數(shù)，采納了以下圖的基本操作流程。請回答以下問題：獲得土樣后應(yīng)先用________(填試劑)對土壤進(jìn)行梯度稀釋，而后將稀釋液涂布在平面培育基上，這類選擇培育基在營養(yǎng)構(gòu)成上的重要特色是__________________。在這樣的培養(yǎng)基上長出的細(xì)菌________(填“必定”或“不必定”)都能產(chǎn)生脲酶。若在平板中加入酚紅，目的菌落出現(xiàn)的變化是__________________。(2)若要對相應(yīng)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)，一個(gè)稀釋度應(yīng)涂布2到3個(gè)平板，并計(jì)算________。若稀釋度不夠高，所得的數(shù)據(jù)與實(shí)質(zhì)值比較應(yīng)________(填“偏大”“偏小”或“相等”)。經(jīng)涂布獲取的菌落能夠采納平板劃線法進(jìn)一步純化，每次劃線后接種環(huán)一定________，才能再次用于劃線。獲取的純化菌種能夠保留在試管中，塞上棉塞或蓋上封口膜，不可以密封，原因是______________________。答案：(1)無菌水氮源只有尿素不必定菌落四周出現(xiàn)紅圈(2)均勻值偏小灼燒細(xì)菌有氧呼吸需要?dú)怏w流通6．苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中挑選獲取了只好降解利用苯酚的細(xì)菌菌株，挑選的主要步驟以下圖，①為土壤樣品。請回答以下問題：②中培育目的菌株的選擇培育基中應(yīng)加入________作為碳源，②中不一樣濃度碳源的培育基________(A.影響；B.不影響)細(xì)菌的數(shù)目，假如要測定②中活細(xì)菌數(shù)目，常采納________________法。④為比較，微生物在④中不生長，在⑤中生長，④與⑤培育基的主要差別在于________________________________________________________________________________________________________________________________________________；使用法能夠在⑥上獲取單菌落。采納固體平板培育細(xì)菌時(shí)進(jìn)行倒置培育的原由是________________________________________________________________________。實(shí)驗(yàn)過程中如何防備其余微生物的污染？________________________________________________________________________。答案：(1)

苯酚

A稀釋涂布平板(2)④的培育基沒有加入苯酚作為碳源，⑤的培育基加入苯酚作為碳源

稀釋涂布平板法或平板劃線

防備冷凝后形成的水珠滴落在培育基上污染培育基培育基滅菌，接種環(huán)境滅菌，接種過程無菌操作7．(高考新課標(biāo)全國卷Ⅱ改編)為了檢查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細(xì)菌含量，并進(jìn)行了細(xì)菌分別等工作。回答以下問題：該小組采納稀釋涂布平板法檢測水樣中的細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培育了一段時(shí)間，這樣做的目的是________________________________________________________________________；而后，將

1mL水樣稀釋

100倍，在

3個(gè)平板上用涂布法分別接入

0.1mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培育后，

3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為

39、38

和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為________個(gè)。(2)該小組采納平板劃線法分別水樣中的細(xì)菌，操作時(shí)，接種環(huán)經(jīng)過

__________滅菌。在第二次及此后的劃線時(shí)，老是從前一次劃線的尾端開始劃線。這樣做的目的是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。表示圖A和B中，________表示的是用稀釋涂布平板法接種培育后獲取的結(jié)果。該小組將獲取的菌株接種到液體培育基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培育，另一部分進(jìn)行振蕩培育。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培育的細(xì)菌比靜置培育的細(xì)菌生長速度快。剖析其原由是：振蕩培育能提升培育液中________的含量，同時(shí)可使菌體與培育液充分接觸，提升________的利用率。分析：(1)為了檢測培育基平板滅菌能否合格，可在涂布接種前，隨機(jī)取滅菌后的空白平板先行培育一段時(shí)間。

0.1mL

稀釋液中均勻有

(39＋38＋37)/3

＝38個(gè)活菌，則每毫升稀釋液中活菌的數(shù)目為

38/0.1

＝380

個(gè)，則稀釋前每毫升水樣中活菌數(shù)目為

380×100＝3.8×104個(gè)，則每升水樣中活菌數(shù)目為

3.8×104×1000＝3.8×107個(gè)。(2)

接種環(huán)、接種針等金屬器具可直接在酒精燈火焰的充分焚燒層灼燒，

以達(dá)到快速完全滅菌的目的。

在第二次及此后的劃線時(shí)，老是從前一次劃線的尾端開始劃線，其目的是將齊集的菌體逐漸稀釋以便獲取單個(gè)菌落。(3)比較圖A和圖B能夠看出：A培育基中細(xì)菌的散布呈線性，是用平板劃線法接種培育后獲取的結(jié)果；B培育基中細(xì)菌均勻散布，