土壤中分解尿素細菌分離與記數(shù)2

土壤中分解尿素細菌分離與記數(shù)2第1頁/共34頁培養(yǎng)基配方KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g瓊脂15.0g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容至1000mL第2頁/共34頁在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基第3頁/共34頁選擇培養(yǎng)基:從微生物群中選擇具有特定表型的細胞.使之進行繁殖所用的培養(yǎng)基,稱為選擇培養(yǎng)基.

加入青霉素的培養(yǎng)基:

分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基:

分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基:

分離固氮菌

不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基:

分離自養(yǎng)型微生物

第4頁/共34頁1．直接計數(shù)法：最常用顯微鏡直接計數(shù)法。先將待測樣品制成懸液，然后取一定量的懸液放在顯微鏡下進行計數(shù)。根據(jù)在顯微鏡下觀察到的微生物數(shù)目來計算出單位體積內(nèi)的微生物總數(shù)。測定微生物數(shù)量的方法：背景知識第5頁/共34頁2．間接計數(shù)法：最常用稀釋平板計數(shù)法。

第6頁/共34頁土壤中分解尿素的細菌的分離與記數(shù)2第7頁/共34頁實驗設(shè)計土壤中分解尿素的細菌的分離與記數(shù)第8頁/共34頁土壤中某樣品細菌的分離與計數(shù)

從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中。實驗步驟1．土壤取樣第9頁/共34頁

制備5個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和15個選擇培養(yǎng)基，準備好無菌試管和移液管。實驗步驟2.制備培養(yǎng)基第10頁/共34頁

制備5個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和15個選擇培養(yǎng)基，準備好無菌試管和移液管。

注：每個稀釋度下需要3個選擇培養(yǎng)基，1個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。選用稀釋倍數(shù)為103~107的稀釋液。

實驗步驟2.制備培養(yǎng)基第11頁/共34頁為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？第12頁/共34頁因為土壤中各類微生物的數(shù)量(單位：株/kg)是不同的，例如在干旱土壤中的上層樣本中：好氧及兼性厭氧細菌數(shù)約為2185萬，放線菌數(shù)約為477萬，霉菌數(shù)約為23.1萬。因此，為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進行分離，同時還應(yīng)當有針對性地提供選擇培養(yǎng)的條件。第13頁/共34頁測定土壤中細菌的數(shù)量，一般選用104、105和106倍的稀釋液進行平板培養(yǎng)；測定放線菌的數(shù)量，一般選用103、104和105倍稀釋液；測定真菌的數(shù)量，一般選用102、103和104倍稀釋液。注：樣品的稀釋第14頁/共34頁

將10g土樣加入盛有90mL無菌生理鹽水的錐形瓶中,充分搖勻，吸取上清液1mL，轉(zhuǎn)移至盛有9mL水的無菌試管中，依次等比稀釋至107稀釋度，并按照由107至103稀釋度的順序分別吸取0.1mL進行平板涂布操作。按照濃度從低到高的順序涂布平板，不必更換移液管。實驗步驟3.微生物的培養(yǎng)與觀察第15頁/共34頁

將涂布好的培養(yǎng)皿放在30℃下培養(yǎng)。比較牛肉膏培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基中菌落的數(shù)量、形態(tài)等，并做好記錄。挑選選擇培養(yǎng)基中不同形態(tài)的菌落接入含酚紅培養(yǎng)基的斜面中，觀察能否變紅。第16頁/共34頁不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間。細菌一般在30~37℃的溫度下培養(yǎng)1~2d；放線菌一般在25~28℃的溫度下培養(yǎng)5~7d；而霉菌一般在25~28℃的溫度下培養(yǎng)3~4d。注：第17頁/共34頁

一般來說，在一定的培養(yǎng)條件下(相同的培養(yǎng)基、溫度及培養(yǎng)時間)，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。第18頁/共34頁第19頁/共34頁

EMB培養(yǎng)基與大腸桿菌代謝產(chǎn)物產(chǎn)生紫色帶金屬光邊的菌落第20頁/共34頁

當菌落數(shù)目穩(wěn)定時，選取菌落數(shù)在30~300的平板進行計數(shù)。在同一稀釋度下，至少對3個平板進行重復(fù)計數(shù)，然后求出平均值，并根據(jù)平板所對應(yīng)的稀釋度計算出樣品中細菌的數(shù)目。實驗步驟4.細菌的計數(shù)第21頁/共34頁每克土壤樣品菌數(shù)=某稀釋倍數(shù)的菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)÷細菌培養(yǎng)時所用的稀釋液體積第22頁/共34頁實驗錄像第23頁/共34頁[一]無菌操作

1.取土用的小鐵鏟的盛土樣的信封在使用前都需要滅菌。

2.應(yīng)在火焰旁稱取土壤。在火焰附近將稱好的土樣倒入錐形瓶中，塞好棉塞。

3.在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁操作。操作提示第24頁/共34頁[二]做好標記注明培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)日期、平板培養(yǎng)樣品的稀釋度等。[三]規(guī)劃時間第25頁/共34頁

1.某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均數(shù)為234，那么每克樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1ml）()

A.2.34×108

B.2.34×109

C.234

D.23.4練一練第26頁/共34頁

1.某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均數(shù)為234，那么每克樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1ml）()

A.2.34×108

B.2.34×109

C.234

D.23.4練一練√第27頁/共34頁

2.用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目，其結(jié)果與實際值相比

（）

A.比實際值高

B.比實際值低

C.和實際值一致

D.比實際值可能高也可能低第28頁/共34頁

2.用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目，其結(jié)果與實際值相比

（）

A.比實際值高

B.比實際值低

C.和實際值一致

D.比實際值可能高也可能低√第29頁/共34頁下列能選擇出分解尿素的細菌的培養(yǎng)基是A.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4.7H2O、

葡萄糖、尿素、瓊脂、水B.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4.7H2O、

葡萄糖、瓊脂、水C.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4.7H2O、

尿素、瓊脂、水D.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4.7H2O、

牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、水練一練第30頁/共34頁下列能選擇出分解尿素的細菌的培養(yǎng)基是A.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4.7H2O、

葡萄糖、尿素、瓊脂、水B.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4.7H2O、

葡萄糖、瓊脂、水C.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4.7H2O、

尿素、瓊脂、水D.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4.7H2O、

牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、水練一練√第31頁/共34頁1．關(guān)于滅菌和消毒的不正確的理解是

A．消毒和滅菌實質(zhì)上是相同的

B．滅菌是指殺死環(huán)境中的一切微生物的細胞、芽孢和孢子

C．接種環(huán)用燒灼的方法滅菌

D．常用滅菌方法有加熱法、過濾法、紅外線法、化學(xué)藥品法A