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細(xì)胞培養(yǎng)前需要準(zhǔn)備的物品提前開(kāi)啟37℃水浴鍋和超凈臺(tái)的紫外燈；滅菌吸頭、1.5mL的離心管、空玻璃瓶；無(wú)菌的15mL、50mL離心管；10cm培養(yǎng)皿、16孔板、32孔板、96孔板、培養(yǎng)瓶等5mL、10mL的移液管；99。9%-100％CO2鋼瓶70DMEM培養(yǎng)基(37℃提前溫浴FBS（10,000Unit/mLpenicillin10，000ug/mLStreptomycin混合液、0.05%上述培養(yǎng)GIBCO的產(chǎn)品，國(guó)產(chǎn)的產(chǎn)品沒(méi)有辦法保證質(zhì)量）細(xì)胞培養(yǎng)步驟DMEM培養(yǎng)液DMEM液體低糖培養(yǎng)基)FBS二抗,70%的酒精消毒;500mLDMEM55mLFBS血清,其中加入雙抗生素，一般保證抗生素的單位達(dá)到即500mL5mL10,000單位的雙抗生素，如果用于保藏的細(xì)胞培養(yǎng)最好不加4℃冰箱中保藏待用；細(xì)胞培養(yǎng)使用前培養(yǎng)基應(yīng)先放入37℃殺菌,70％酒精后放入超凈臺(tái)中待用；從液氮中取出凍存管，立刻放入37℃溶解;5mL培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻;500rpm/min5min.中進(jìn)行培養(yǎng)。取出在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)的細(xì)胞(一般BMSCs代3次左右就不太好了，所以較難培養(yǎng)顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài),在超凈臺(tái)中吸去表面的培養(yǎng)基,加入少量的培養(yǎng)基清洗一下,1—2ml00537℃1—2分鐘使細(xì)胞與培養(yǎng)皿脫離。取出培養(yǎng)皿,1—2,使細(xì)胞懸浮。顯微鏡下觀察細(xì)胞懸浮程度,聚集的現(xiàn)象可以用手動(dòng)移液器進(jìn)行吹打.8-9ml的培養(yǎng)基(此過(guò)程加入的培養(yǎng)基的量與加入細(xì)胞時(shí)所帶入的培養(yǎng)基的量有關(guān),10cm10ml基。向含有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中加入1-2ml內(nèi)注意事項(xiàng):1.FBS血清時(shí)要考慮血清本身的體積,FBS10%；2。FBS血清和二抗生素提前1天放入4℃的冰箱中融化，可以用50mL無(wú)菌離心管分裝，以免多次融化造成血清變性。每 50mL的離心管中最多裝入40-

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