熒光顯微成像技術和應用

關于熒光顯微成像技術和應用第一頁，共十六頁，編輯于2023年，星期三原理

普通光學顯微鏡通過普通光源的照明觀察標本第二頁，共十六頁，編輯于2023年，星期三熒光顯微鏡(fluorescencemicroscope)：

利用較短波長的光(激發(fā)光)照射樣品，使樣品受到高能量激發(fā)，產生較長波長的熒光(發(fā)射光)，用來觀察和分辨樣品中產生熒光的物質的成分和位置。第三頁，共十六頁，編輯于2023年，星期三熒光顯微鏡的種類透射式落射式第四頁，共十六頁，編輯于2023年，星期三

目鏡吸收濾色鏡

物鏡暗場聚光鏡激發(fā)濾色鏡

汞燈透射熒光顯微鏡原理圖標本第五頁，共十六頁，編輯于2023年，星期三汞燈激發(fā)濾色鏡分色鏡吸收濾色鏡物鏡

標本落射熒光顯微鏡原理圖第六頁，共十六頁，編輯于2023年，星期三

透射式汞燈光源激發(fā)濾色鏡暗場聚光鏡吸收濾色鏡

落射式汞燈光源激發(fā)濾色鏡分色鏡吸收濾色鏡熒光顯微鏡的主要部件第七頁，共十六頁，編輯于2023年，星期三分色鏡反射激發(fā)光，透過熒光暗場聚光鏡來自下面光源的光線經過暗場聚光鏡，形成了橫過顯微鏡視野而不進入物鏡的強烈光束。因此視野是暗的第八頁，共十六頁，編輯于2023年，星期三熒光圖像的記錄方法熒光顯微鏡所看到的熒光圖像具有：形態(tài)學特征和熒光的顏色、亮度判斷結果時，必須將二者結合起來綜合判斷

記錄結果：主觀指標（即工作者目力觀察）客觀指標（細胞分光光度計、圖像分析儀等）第九頁，共十六頁，編輯于2023年，星期三熒光顯微鏡應用技術1.對細胞結構或組分的定性位、半定量研究免疫熒光技術用熒光標記的抗體或抗原與樣品(細胞、組織或分離的物質等)中相應的抗原或抗體結合，以適當檢測熒光的技術對其進行分析的方法。將抗原或抗體與熒光染料連接，用于檢測相應特異性的抗體或抗原的方法稱“直接免疫熒光技(directimmunofluorescenttechnique)”。用熒光染料標記的第二、第三抗體等檢測相應抗原抗體復合體的方法則稱“間接免疫熒光技術(indirectimmunofluorescenttechnique)”。第十頁，共十六頁，編輯于2023年，星期三由于熒光素所發(fā)的熒光可在熒光顯微鏡下檢出，從而可對抗原進行細胞定位第十一頁，共十六頁，編輯于2023年，星期三2.作為生物大分子篩選與鑒定的標記物。綠色熒光蛋白綠色螢光蛋白(greenfluorescentprotein)，簡稱GFP，其基因所產生的蛋白質，在藍色波長范圍的光線激發(fā)下，會發(fā)出綠色螢光，在生物學研究中綠色熒光蛋白具有廣泛用途，包括有第十二頁，共十六頁，編輯于2023年，星期三

1.分子標記利用綠色熒光的發(fā)光機制，可將GFP作為蛋白質標簽(proteintagging)，即利用DNA重組技術，將目的基因與GFP基因構成融合基因，轉染合適的細胞進行表達，然后借助熒光顯微鏡便可對標記的蛋白質進行細胞內活體觀察第十三頁，共十六頁，編輯于2023年，星期三2.藥物篩選熒光探針分布是利用信號傳導中信號分子的遷移功能，將一熒光蛋白與信號分子相偶聯，根據熒光蛋白的分布情況即可推斷信號分子的遷移狀況，并推斷該分子在遷移中的功能。由于GFP分子量小，在活細胞內可溶且對細胞毒性較小，因而常用作熒光探針第十