實(shí)驗(yàn)八細(xì)菌鑒定中常用的生化實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)八細(xì)菌鑒定中常用的生化實(shí)驗(yàn)第1頁(yè)/共15頁(yè)實(shí)驗(yàn)八細(xì)菌鑒定中常用的生化實(shí)驗(yàn)第2頁(yè)/共15頁(yè)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆仗前l(fā)酵試驗(yàn)、淀粉實(shí)驗(yàn)、吲哚實(shí)驗(yàn)、M.R.及V.P的原理及方法。掌握以上實(shí)驗(yàn)的用途。第3頁(yè)/共15頁(yè)二、實(shí)驗(yàn)原理淀粉實(shí)驗(yàn)糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)

發(fā)酵后產(chǎn)生的有機(jī)酸：乳酸、醋酸、丙酸等（溴甲酚紫變色范圍pH5.2~6.8,pH<5.2黃色，pH>6.8紫色）

發(fā)酵后產(chǎn)生的氣體：甲烷、氫、二氧化碳等（杜氏小管內(nèi)有氣泡，產(chǎn)氣漂?。┑?頁(yè)/共15頁(yè)糖發(fā)酵試驗(yàn)現(xiàn)象第5頁(yè)/共15頁(yè)二、實(shí)驗(yàn)原理M.R.及V.P實(shí)驗(yàn)

甲基紅試驗(yàn)是用來(lái)檢測(cè)由葡萄糖產(chǎn)生的有機(jī)酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。當(dāng)細(xì)菌代謝糖產(chǎn)生酸時(shí)，培養(yǎng)基就會(huì)變酸，使加入培養(yǎng)基的甲基紅指示劑由橘黃色變?yōu)榧t色。第6頁(yè)/共15頁(yè)二、實(shí)驗(yàn)原理M.R.及V.P實(shí)驗(yàn)

VP試驗(yàn)是用來(lái)測(cè)定某些細(xì)菌利用葡萄糖產(chǎn)生非酸性或中性末端產(chǎn)物的能力，如丙酮酸。丙酮酸經(jīng)縮合、脫羧后生成乙酰甲基甲醇，此化合物在堿性條件下能被空氣中的氧氣氧化成二乙酰。二乙酰與蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成紅色化合物。第7頁(yè)/共15頁(yè)二、實(shí)驗(yàn)原理吲哚實(shí)驗(yàn)吲哚試驗(yàn)是用來(lái)檢測(cè)吲哚的產(chǎn)生。有些細(xì)菌能產(chǎn)生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲哚和丙酮酸。吲哚與對(duì)二甲基氨基苯甲醛結(jié)合，形成紅色的玫瑰吲哚。第8頁(yè)/共15頁(yè)三、實(shí)驗(yàn)器材培養(yǎng)基1、淀粉培養(yǎng)基:500ml（分裝于四個(gè)三角瓶，包扎，121~126℃滅菌30min）蛋白胨10g可溶性淀粉

2g氯化鈉5g瓊脂15~20g牛肉膏5g水1000mlpH7.22、糖發(fā)酵培養(yǎng)基：300ml（分裝于28只試管，包扎，112~115℃滅菌30min）蛋白胨10g氯化鈉5g葡萄糖10g

水1000mlpH7.4溴甲酚紫溶液（1.6%水溶液）1ml3、M.R.及V.P實(shí)驗(yàn):600ml（分裝于56只試管，包扎，112~115℃滅菌30min）蛋白胨5gK2HPO45g葡萄糖5g

水1000mlpH7.2~7.44、吲哚培養(yǎng)基:300ml（分裝于28只試管，包扎，121~126℃滅菌30min）蛋白胨10g氯化鈉5g水1000mlpH7.6第9頁(yè)/共15頁(yè)三、實(shí)驗(yàn)器材菌種1、大腸桿菌2、枯草芽孢桿菌3、未知菌其他1、試管6組28個(gè)/組（每個(gè)試管帶一個(gè)德漢氏小管）2、平皿2組16個(gè)/組3、三角瓶2組8個(gè)/組第10頁(yè)/共15頁(yè)四、實(shí)驗(yàn)步驟（一）準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)器材，配制培養(yǎng)基（二）接種培養(yǎng)第11頁(yè)/共15頁(yè)試驗(yàn)名稱被接菌種1被接菌種2被接菌種3對(duì)照（管數(shù)）1.淀粉水解實(shí)驗(yàn)大腸桿菌枯草芽孢桿菌產(chǎn)氣腸桿菌1支/每組不接種2.糖發(fā)酵大腸桿菌枯草芽孢桿菌產(chǎn)氣腸桿菌1支/每組不接種3.MR試驗(yàn)大腸桿菌枯草芽孢桿菌產(chǎn)氣腸桿菌1支/每組不接種4.VP試驗(yàn)大腸桿菌枯草芽孢桿菌產(chǎn)氣腸桿菌1支/每組不接種5.吲哚試驗(yàn)大腸桿菌枯草芽孢桿菌葡萄球菌1支/每組不接種第12頁(yè)/共15頁(yè)（三）結(jié)果觀察葡萄糖/乳糖發(fā)酵試驗(yàn)，H2S產(chǎn)生試驗(yàn)直接觀察。VP試驗(yàn)：去塞，加40％KOH15滴，振蕩，再加等量α－奈酚，振蕩，37℃振蕩培養(yǎng)30min，觀察。MR試驗(yàn)：加甲基紅試劑2－3滴，觀察。吲哚試驗(yàn)：加1ml乙醚（作用是萃取出吲哚）。振蕩，靜止片刻使分層，沿管壁慢慢加入吲哚試劑10滴，觀察。第13頁(yè)/共15頁(yè)