儀器分析講稿(第3章液相)

內(nèi)容提要1高效液相色譜法的特點(diǎn)2影響色譜峰擴(kuò)展及色譜分離的因素3高效液相色譜法的主要類(lèi)型及其分離原理4液相色譜法的固定相5液相色譜法流動(dòng)相6高效液相色譜儀7高效液相色譜分離類(lèi)型的選擇8高效液相色譜法應(yīng)用實(shí)例9液相制備色譜10毛細(xì)管電泳當(dāng)前1頁(yè)，總共101頁(yè)?！?.1高效液相色譜的特點(diǎn)一、定義：液相色譜法是指流動(dòng)相為液體的色譜技術(shù)。高效液相色譜是20世紀(jì)70年代迅速發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)高效、快速的分離技術(shù)。（液相色譜+氣相色譜理論+高壓泵、高效固定相+高靈敏檢測(cè)器）。二、特點(diǎn)1.高壓:可達(dá)150~350×105Pa2.高速:例，分離20種氨基酸，經(jīng)典色譜法要20多小時(shí)，用HPLC只需1小時(shí).3.高效：3萬(wàn)塔板/米（GC2000塔板/米）4.高靈敏度：紫外檢測(cè)器10-9g；熒光檢測(cè)器10-11g當(dāng)前2頁(yè)，總共101頁(yè)。三、應(yīng)用范圍

氣相色譜僅能分析在操作溫度下能氣化而不分解的物質(zhì)。對(duì)高沸點(diǎn)化合物、非揮發(fā)性物質(zhì)、熱不穩(wěn)定化合物、離子型化合物及高聚物的分離、分析較為困難。致使其應(yīng)用受到一定程度的限制，據(jù)統(tǒng)計(jì)只有大約20%的有機(jī)物能用氣相色譜分析；而液相色譜則不受樣品揮發(fā)度和熱穩(wěn)定性的限制，它非常適合分子量較大、難氣化、不易揮發(fā)或?qū)崦舾械奈镔|(zhì)、離子型化合物及高聚物的分離分析，大約占有機(jī)物的70-80%。。因此，高效液相色譜法，只要求試樣能制成溶液，而不需要?dú)饣?，不受試樣揮發(fā)性的限制。當(dāng)前3頁(yè)，總共101頁(yè)。從分離原理、儀器構(gòu)造及應(yīng)用范圍上簡(jiǎn)要比較氣相色譜及液相色譜的異同點(diǎn)。解：二者都是根據(jù)樣品組分與流動(dòng)相和固定相相互作用力的差別進(jìn)行分離的。從儀器構(gòu)造上看，液相色譜需要增加高壓泵以提高流動(dòng)相的流動(dòng)速度，克服阻力。同時(shí)液相色譜所采用的固定相種類(lèi)要比氣相色譜豐富的多，分離方式也比較多樣。氣相色譜的檢測(cè)器主要采用熱導(dǎo)檢測(cè)器、氫焰檢測(cè)器和火焰光度檢測(cè)器等。而液相色譜則多使用紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器及電化學(xué)檢測(cè)器等。但是二者均可與MS等聯(lián)用。二者均具分離能力高、靈敏度高、分析速度快，操作方便等優(yōu)點(diǎn)，但沸點(diǎn)太高的物質(zhì)或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)難以用氣相色譜進(jìn)行分析。而只要試樣能夠制成溶液，即可用于HPLC分析，而不受沸點(diǎn)高、熱穩(wěn)定性差、相對(duì)分子量大的限制。當(dāng)前4頁(yè)，總共101頁(yè)?！?.2影響色譜峰擴(kuò)展及色譜分離的因素

與GC比較65/1；基本概念及理論基礎(chǔ)與GC一致；主要區(qū)別：流動(dòng)相不同.液相色譜中對(duì)色譜峰擴(kuò)展及色譜分離影響的因素：一、柱內(nèi)展寬1.渦流擴(kuò)散項(xiàng)：He=2λdp

λ:填充不均勻因子；dp填充粒度直徑高效液相色譜法的固定相是高效填料，其顆粒直徑比氣相色譜法更??；且裝柱多采用勻漿法裝柱，填充很均勻，λ變得很小，所以He值比較小。當(dāng)前5頁(yè)，總共101頁(yè)。當(dāng)前6頁(yè)，總共101頁(yè)。2.縱向擴(kuò)散項(xiàng)65/-1：Hd=CdDm/u；當(dāng)試樣分子在色譜柱內(nèi)被流動(dòng)相帶向前時(shí)，由于分子本身運(yùn)動(dòng)所引起的縱向擴(kuò)散同樣引致色譜峰的擴(kuò)展。由于分子在液體中的擴(kuò)散系數(shù)Dm比在氣體中小4-5個(gè)數(shù)量級(jí)，在LC中可忽略,GC中重要。

當(dāng)前7頁(yè)，總共101頁(yè)。3、傳質(zhì)阻力項(xiàng)

組分分子在固定相與流動(dòng)相之間傳質(zhì)緩慢引起局部不平衡，從而引起峰擴(kuò)展。（1）固定相傳質(zhì)阻力項(xiàng)（主要發(fā)生在液－液分配色譜中）當(dāng)流動(dòng)相中的試樣分子擴(kuò)散進(jìn)入到涂漬在載體表面的固定液內(nèi)進(jìn)行質(zhì)量交換時(shí)，由于滲入固定液膜的深度不同，其返回到流動(dòng)相中的時(shí)間也不同，因而引起峰擴(kuò)展。當(dāng)前8頁(yè)，總共101頁(yè)。當(dāng)前9頁(yè)，總共101頁(yè)。采取措施：1）液-液分配色譜：薄的固定相層；吸附、排阻、離子交換色譜：小的顆粒填料。2）采用擴(kuò)散系數(shù)大的液相固定相。3）減小流動(dòng)相的流速，改善傳質(zhì)。當(dāng)前10頁(yè)，總共101頁(yè)。（2）流動(dòng)相傳質(zhì)阻力項(xiàng)(二種形式:在流動(dòng)的流動(dòng)相中的傳質(zhì)和滯留的流動(dòng)相中的傳質(zhì))i.流動(dòng)的流動(dòng)相中的傳質(zhì)阻力項(xiàng)Hm

當(dāng)流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱內(nèi)的填充物時(shí)，靠近填充物顆粒表面的流速較慢，而流路通道中心的流速則較快，移動(dòng)速度不一樣從而引起峰形變寬。當(dāng)前11頁(yè)，總共101頁(yè)。當(dāng)前12頁(yè)，總共101頁(yè)。

ii.滯留的流動(dòng)相中的傳質(zhì)阻力項(xiàng)Hsm

由于固定相的多孔性能使流動(dòng)相滯留在其微孔內(nèi)，微孔內(nèi)的流動(dòng)相稱(chēng)為滯留區(qū)流動(dòng)相（靜止?fàn)顟B(tài)，不流動(dòng)）。當(dāng)流動(dòng)相中的試樣分子與固定相進(jìn)行質(zhì)量交換時(shí)，必須先從流動(dòng)相擴(kuò)散進(jìn)入到滯留區(qū)。如果固定相中微孔既小又深，則滯留就越嚴(yán)重，傳質(zhì)就越慢，對(duì)峰擴(kuò)展影響也越大。當(dāng)前13頁(yè)，總共101頁(yè)。當(dāng)前14頁(yè)，總共101頁(yè)。

由于柱內(nèi)色譜峰擴(kuò)展所引起的塔板高度的變化可歸納為：

H=A+B/u+Cu

由于B/u這一項(xiàng)可以忽略不計(jì)，影響柱效的主要因素是傳質(zhì)阻力項(xiàng)，高效液相色譜的方程可寫(xiě)成：

H=A+Cu當(dāng)前15頁(yè)，總共101頁(yè)。1.提高柱內(nèi)填料裝填的均勻性和減小粒度。（選粒徑小的、分布均勻的薄殼型擔(dān)體dp≤10μm,5μm目前應(yīng)用最廣泛，提高裝柱技術(shù)，濕法勻漿法裝柱）2.選粘度小、低流速的流動(dòng)相（甲醇，約1ml/min）3.適當(dāng)提高柱溫以降低流動(dòng)相粘度。4、采用最佳流速。5、減小柱外展寬。其中，減小粒度是提高柱效能的最有效的方法。液相色譜法中提高柱效的方法當(dāng)前16頁(yè)，總共101頁(yè)。HPLC與GC的H-u曲線見(jiàn)圖3-1：（1）兩者曲線形狀相似，都有一個(gè)H最小值；（2）HPLC的H最小值比GC的最小值小一個(gè)數(shù)量級(jí)以上，柱效更高；（3）HPLC的最佳流速u(mài)比GC的最佳流速u(mài)也小一個(gè)數(shù)量級(jí)以上。當(dāng)前17頁(yè)，總共101頁(yè)。二、柱外展寬：指色譜柱外各種因素引起的峰擴(kuò)展.

a.柱前展寬：主要由進(jìn)樣所引起；進(jìn)樣方式：將試樣注入色譜柱的頂端濾塞上或注入進(jìn)樣器的液流中。由于進(jìn)樣器的死體積以及進(jìn)樣時(shí)的液流擾動(dòng)引起色譜峰不對(duì)稱(chēng)和展寬。解決：試樣注入柱頂端中心點(diǎn)或填料中心1~2mm處。

b.柱后展寬：主要由接管、檢測(cè)器流通池體積所引起.解決：連接管的體積、檢測(cè)器的死體積應(yīng)盡可能小.當(dāng)前18頁(yè)，總共101頁(yè)。液相色譜中影響色譜峰展寬的因素有哪些?與氣相色譜相比較,有哪些主要不同之處?解:液相色譜中引起色譜峰擴(kuò)展的主要因素為渦流擴(kuò)散、流動(dòng)的流動(dòng)相傳質(zhì)、滯留的流動(dòng)相傳質(zhì)以及柱外效應(yīng)。在氣相色譜中徑向擴(kuò)散往往比較顯著，而液相色譜中徑向擴(kuò)散的影響較弱，往往可以忽略。另外，在液相色譜中還存在比較顯著的滯留流動(dòng)相傳質(zhì)及柱外效應(yīng)。當(dāng)前19頁(yè)，總共101頁(yè)。1、在液相色譜中，提高色譜柱柱效的最有效途徑是（）。

A

減小填料粒度B適當(dāng)升高柱溫C降低流動(dòng)相的流速D增大流動(dòng)相的流速2、高效液相色譜中，可以忽略不計(jì)的影響色譜峰擴(kuò)展的因素是（）。

A渦流擴(kuò)散項(xiàng)B

縱向擴(kuò)散項(xiàng)C傳質(zhì)阻力項(xiàng)D柱外展寬3、在液相色譜中，縱向擴(kuò)散項(xiàng)Hd＝B/u較小，通常可以忽略不計(jì)。（）4、要提高液相色譜分離的效率，必須提高柱內(nèi)填料填裝的均勻性和________以加快傳質(zhì)速率，其中_________是提高柱效的最有效途徑。練習(xí)當(dāng)前20頁(yè)，總共101頁(yè)?！?.3高效液相色譜的主要類(lèi)型及其分離原理類(lèi)型：液-液色譜；液-固色譜；離子交換色譜；離子對(duì)色譜；離子色譜；空間排阻色譜一.液-液分配色譜法及化合鍵合相色譜

1.特點(diǎn)：a.流動(dòng)相和固定相都是液體

b.兩相應(yīng)互不相溶，有明顯的分界面

2.分離機(jī)制：試樣組分溶于流動(dòng)相后,在固定相和流動(dòng)相之間的相對(duì)溶解度存在差異，溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行分配。分離的順序決定于分配系數(shù)的大小，分配系數(shù)大的組分保留值大，而且流動(dòng)相的種類(lèi)對(duì)分配系數(shù)有較大的影響.當(dāng)前21頁(yè)，總共101頁(yè)。3.解決固定液流失問(wèn)題方法：1）一般為了避免固定液的流失，對(duì)于親水性的固定液常采用疏水性的流動(dòng)相，而疏水性的固定相則采用親水性的流動(dòng)相，從而使固定液不至于由于溶解于流動(dòng)相而帶走流失，即所謂的正反色譜法。問(wèn)題：何謂正相色譜及反相色譜？在應(yīng)用上有什么特點(diǎn)？

答：在色譜法中，流動(dòng)相的極性小于固定液的極性，稱(chēng)為正相色譜；在色譜法中，流動(dòng)相的極性大于固定液的極性，稱(chēng)為反相色譜。在應(yīng)用上，正相色譜主要用于分離極性物質(zhì)；反相色譜主要用于分離弱極性或非極性物質(zhì)。當(dāng)前22頁(yè)，總共101頁(yè)。2）在色譜分離過(guò)程中由于固定液在流動(dòng)相中仍有微量溶解，以及流動(dòng)相通過(guò)色譜柱時(shí)的機(jī)械沖擊，固定液也會(huì)不斷流失而導(dǎo)致保留行為的變化，柱效和分離選擇性變壞等不良后果。為了更好地解決固定相從載體上流失的問(wèn)題，采用化學(xué)鍵合固定相。問(wèn)題：何謂化學(xué)鍵合固定相？它有什么突出的優(yōu)點(diǎn)？答：利用化學(xué)反應(yīng)將固定液的有機(jī)官能團(tuán)共價(jià)鍵合在載體表面的流離羥基上形成的固定相稱(chēng)為化學(xué)鍵合固定相。

優(yōu)點(diǎn)：固定相表面沒(méi)有液坑,比一般液體固定相傳質(zhì)快的多；無(wú)固定相流失，增加了色譜柱的穩(wěn)定性及壽命；可以鍵合不同的官能團(tuán)，能靈活地改變選擇性，可應(yīng)用與多種色譜類(lèi)型及樣品的分析；有利于梯度洗提，也有利于配用靈敏的檢測(cè)器和餾分的收集。目前反相鍵合相色譜法，已成為高效液相色譜中應(yīng)用最廣泛的一個(gè)分支，液-液分配色譜極少采用。當(dāng)前23頁(yè)，總共101頁(yè)?；瘜W(xué)鍵合固定相根據(jù)在硅膠表面的化學(xué)反應(yīng)不同，鍵合固定相可分為：硅氧碳鍵型（≡Si-O-C)；硅氧硅碳鍵型（≡Si-O-Si-C);硅碳鍵型（≡Si-C)；硅氮鍵型（≡Si-N)。硅烷化反應(yīng)：當(dāng)前24頁(yè)，總共101頁(yè)。二.液-固色譜法（或液-固吸附色譜法）1.特點(diǎn)：流動(dòng)相為液體，固定相為吸附劑。2.分離機(jī)制：根據(jù)物質(zhì)吸附作用的不同來(lái)進(jìn)行分離。（溶質(zhì)分子X(jué)與溶劑分子S對(duì)吸附劑表面競(jìng)爭(zhēng)吸附）3.結(jié)論69/-5：如果溶劑分子吸附性更強(qiáng)，則被吸附的溶質(zhì)分子將相應(yīng)減小。顯然，分配系數(shù)大的組分，吸附劑對(duì)它的吸附力強(qiáng)，保留值就大.4.作用：a.適用分離相對(duì)分子質(zhì)量中等油性試樣。

b.對(duì)具有不同官能團(tuán)的化合物和異構(gòu)體有較高的選擇性。

缺點(diǎn)：由于非線性等溫吸附常引起峰的拖尾現(xiàn)象.

當(dāng)前25頁(yè)，總共101頁(yè)。三、離子對(duì)色譜法

1.特點(diǎn)：對(duì)各種強(qiáng)極性的有機(jī)酸或有機(jī)堿的分離，分離效能高，分析速度快，操作簡(jiǎn)便.2.分離機(jī)制（P71）：將一種或多種與溶質(zhì)電荷相反的離子（稱(chēng)為對(duì)離子或反離子）加到流動(dòng)相或固定相中，使其與溶質(zhì)離子結(jié)合形成疏水型離子對(duì)化合物，從而控制溶質(zhì)離子的保留行為，采用液-液分配原理進(jìn)行分離。

3.分離過(guò)程：流動(dòng)相中待分離有機(jī)離子與固定相或流動(dòng)相中帶相反電荷的對(duì)離子結(jié)合，形成離子對(duì)化合物，然后在兩相間進(jìn)行分配.X+水相

(被測(cè)離子)+Y－水相(對(duì)離子)?X+Y－有機(jī)相（疏水）當(dāng)前26頁(yè)，總共101頁(yè)。4.分類(lèi)正相離子對(duì)色譜法：極性固定相-非極性流動(dòng)相。反相離子對(duì)色譜法：非極性的疏水固定相，含有對(duì)離子Y－的甲醇－水（或乙腈－水）溶液作為極性流動(dòng)相.試樣離子X(jué)＋進(jìn)入柱內(nèi)以后，與對(duì)離子Y－生成疏水性離子對(duì)X＋Y－，后者在疏水性固定相表面分配或吸附。5.應(yīng)用：解決了以往難分離混合物的分離問(wèn)題,諸如酸、堿和離子、非離子混合物，特別是一些生化試樣.另外，還可借助離子對(duì)的生成給試樣引入此外吸收或發(fā)熒光的基團(tuán)，以提高檢測(cè)靈敏度。當(dāng)前27頁(yè)，總共101頁(yè)。四.離子交換色譜法

1.分離機(jī)制70/2；離子交換樹(shù)脂上可電離的離子與流動(dòng)相中具有相同電荷的溶質(zhì)離子進(jìn)行可逆交換，依據(jù)這些離子對(duì)交換劑具有不同的親和力而將它們分離。

2.適用范圍70/3；凡能在溶劑中電離的物質(zhì)一般均可用該法進(jìn)行分離。離子交換樹(shù)脂固定相上帶電荷基團(tuán)或游離的離子與流動(dòng)相中具有相同電荷的溶質(zhì)離子發(fā)生可逆交換反應(yīng)：

當(dāng)前28頁(yè)，總共101頁(yè)。3.結(jié)論：親合力高的，在柱中保留值就愈大，分配系數(shù)也愈大，表示溶質(zhì)的離子與離子交換劑的相互作用愈強(qiáng)。4.應(yīng)用：a.分離離子或可離解成離子的化合物。

b.已成功地分離氨基酸、核酸、蛋白質(zhì)等.當(dāng)前29頁(yè)，總共101頁(yè)。五、離子色譜法 這是20世紀(jì)70年代中期發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新的液相色譜法，很快發(fā)展成為水溶液中陰離子分析的最佳方法。

1.固定相:離子交換樹(shù)脂流動(dòng)相:電解質(zhì)溶液檢測(cè)器:電導(dǎo)檢測(cè)器主配件：抑制柱（抑制流動(dòng)相中強(qiáng)電解質(zhì)背景離子的干擾）

2.流程圖：fig3-2當(dāng)前30頁(yè)，總共101頁(yè)。例：陰離子交換柱（分離柱）：R—OH－＋+Na+Br-(待測(cè))→R—Br-+Na+OH-（交換）R—Br-＋+Na+OH－(洗脫劑)→R—OH-+Na+Br-（洗脫）抑制柱（消除本底電導(dǎo)影響），則發(fā)生下列反應(yīng)：R—H＋

+Na+OH-(流動(dòng)相)→

R—Na++H2O

R—H＋

+Na+Br-(流動(dòng)相)→

R—Na++H+Br-可見(jiàn)，不僅大量堿轉(zhuǎn)化為低電導(dǎo)的水，而且待測(cè)離子轉(zhuǎn)化為具有更大淌度的酸，大大提高檢測(cè)靈敏度。當(dāng)前31頁(yè)，總共101頁(yè)。3.分離機(jī)制

a.雙柱型：化學(xué)抑制型離子色譜法。

b.單柱型：非抑制型.問(wèn)題：何謂化學(xué)抑制型離子交換色譜及非抑制型離子色譜？試述它們的基本原理。當(dāng)前32頁(yè)，總共101頁(yè)。當(dāng)前33頁(yè)，總共101頁(yè)。4.應(yīng)用：離子色譜法是目前唯一快速、靈敏和準(zhǔn)確的多組分分析的方法因而得到廣泛重視和迅速發(fā)展。從無(wú)機(jī)和有機(jī)陰離子到金屬陽(yáng)離子，從有機(jī)陽(yáng)離子到糖類(lèi)、氨基酸等均可用該法分析.當(dāng)前34頁(yè)，總共101頁(yè)。六、空間排阻色譜法

1.固定相：凝膠

2.機(jī)制73/-9：類(lèi)似于分子篩作用，分離只與凝膠的孔徑分布和溶質(zhì)的流體力學(xué)體積和分子大小有關(guān).排阻法是建立在分子大小的基礎(chǔ)上的。組分中太大的分子不能進(jìn)入膠孔而受到排阻，先出峰；組分中太小的分子可以進(jìn)入所有膠體微孔中，最后出峰。洗脫次序?qū)⑷Q于相對(duì)分子質(zhì)量的大小，相對(duì)分子質(zhì)量大的先洗脫，相對(duì)分子質(zhì)量小的后洗脫。分子的形狀也對(duì)保留有重要的作用。當(dāng)前35頁(yè)，總共101頁(yè)。3.分離示意圖，fig3-3a.排斥極限A點(diǎn)74/2;3:b.全滲透極限B點(diǎn)74/2;6:

相對(duì)分子質(zhì)量介于上述兩個(gè)極限之間的化合物，

將按相對(duì)分子質(zhì)量降低的次序被洗脫而可以分離.4.特點(diǎn)75/2;3:1）試樣色譜峰全部在溶劑的保留時(shí)間前出峰。2）用于分離相對(duì)分子質(zhì)量大的化合物（約為2000以上）；3）只能分離相對(duì)分子質(zhì)量差別在10%以上的分子。當(dāng)前36頁(yè)，總共101頁(yè)。液相色譜有幾種類(lèi)型?它們的保留機(jī)理是什么?在這些類(lèi)型的應(yīng)用中,最適宜分離的物質(zhì)是什么?解:液相色譜有以下幾種類(lèi)型:液-液分配色譜;液-固吸附色譜;化學(xué)鍵合色譜;離子交換色譜;離子對(duì)色譜;空間排阻色譜等.液-固吸附色譜是通過(guò)組分在兩相間的多次吸附與解吸平衡實(shí)現(xiàn)分離的.最適宜分離的物質(zhì)為中等相對(duì)分子質(zhì)量的油溶性試樣，凡是能夠用薄層色譜分離的物質(zhì)均可用此法分離。其中;液-液分配色譜的保留機(jī)理是通過(guò)組分在固定相和流動(dòng)相間的多次分配進(jìn)行分離的?？梢苑蛛x各種無(wú)機(jī)、有機(jī)化合物。當(dāng)前37頁(yè)，總共101頁(yè)。化學(xué)鍵合色譜中由于鍵合基團(tuán)不能全部覆蓋具有吸附能力的載體,所以同時(shí)遵循吸附和分配的機(jī)理,最適宜分離的物質(zhì)為與液-液色譜相同。離子交換色譜和離子色譜是通過(guò)組分與固定相間親合力差別而實(shí)現(xiàn)分離的.各種離子及在溶液中能夠離解的物質(zhì)均可實(shí)現(xiàn)分離，包括無(wú)機(jī)化合物、有機(jī)物及生物分子，如氨基酸、核酸及蛋白質(zhì)等。當(dāng)前38頁(yè)，總共101頁(yè)。在離子對(duì)色譜色譜中,樣品組分進(jìn)入色譜柱后,組分的離子與對(duì)離子相互作用生成中性化合物,從而被固定相分配或吸附進(jìn)而實(shí)現(xiàn)分離的.各種有機(jī)酸堿特別是核酸、核苷、生物堿等的分離是離子對(duì)色譜的特點(diǎn)?？臻g排阻色譜是利用凝膠固定相的孔徑與被分離組分分子間的相對(duì)大小關(guān)系,而分離、分析的方法。最適宜分離的物質(zhì)是：用于分離相對(duì)分子質(zhì)量大的化合物（約為2000以上）；只能分離相對(duì)分子質(zhì)量差別在10%以上的分子。另外尚有手性色譜、膠束色譜、環(huán)糊精色譜及親合色譜等機(jī)理。當(dāng)前39頁(yè)，總共101頁(yè)。§3.4液相色譜法固定相色譜柱是色譜法的心臟，固定相及裝柱技術(shù)是關(guān)鍵.一、液-液色譜法、鍵合相色譜法及離子對(duì)色譜法固定相1.全多孔型擔(dān)體：直徑小于10μm,由nm級(jí)的硅膠微粒堆聚而成為5μm直徑的全多孔型擔(dān)體。顆粒小，柱效高。2.表層多孔型擔(dān)體：直徑為30~40μm的實(shí)心核(玻璃微珠)，表層上附有一層厚度約為1~2μm的多孔硅膠，填柱容易，重現(xiàn)性好，但試樣容量低。目前5~10μm直徑是使用最廣泛的高效填料。3.化學(xué)鍵合固定相（P76及P69）定義：用化學(xué)反應(yīng)的方法通過(guò)化學(xué)鍵把有機(jī)分子結(jié)合到擔(dān)體表面.當(dāng)前40頁(yè)，總共101頁(yè)?；瘜W(xué)鍵合固定相根據(jù)在硅膠表面的化學(xué)反應(yīng)不同，鍵合固定相可分為：硅氧碳鍵型（≡Si-O-C)；硅氧硅碳鍵型（≡Si-O-Si-C);硅碳鍵型（≡Si-C)；硅氮鍵型（≡Si-N)。硅烷化反應(yīng)：當(dāng)前41頁(yè)，總共101頁(yè)?；瘜W(xué)鍵合固定相的特點(diǎn)：（1）表面沒(méi)有液坑，比一般液體固定相傳質(zhì)快得多；（2）無(wú)固定液流失，增加了色譜柱的穩(wěn)定性和壽命；（3）可以鍵合不同的官能團(tuán)，能靈活地改變選擇性，應(yīng)用于多種色譜類(lèi)型及樣品的分析；（4）有利于梯度洗提，也有利于配用靈敏的檢測(cè)器和餾分的收集。分離機(jī)制77/2：既不是全部吸附過(guò)程，亦不是典型的液-液分配過(guò)程，而是雙重機(jī)制兼而有之，只是按鍵合量的多少而各有側(cè)重.當(dāng)前42頁(yè)，總共101頁(yè)。當(dāng)前43頁(yè)，總共101頁(yè)。二、液-固吸附色譜法固定相目前較常用5-10μm的硅膠微粒（全多孔型）.三、離子交換色譜法固定相

1.薄膜型離子交換樹(shù)脂，以薄殼玻珠為擔(dān)體，表面涂1%離子交換樹(shù)脂.2.離子交換鍵合固定相：用化學(xué)反應(yīng)將離子交換基團(tuán)鍵合在惰性擔(dān)體表面。

a.鍵合薄殼型：擔(dān)體，薄殼玻珠；

b.鍵合微粒擔(dān)體型：擔(dān)體，微粒硅膠.四、排阻色譜法固定相

a.軟質(zhì)凝膠：葡萄糖凝膠；瓊脂糖凝膠；(水流動(dòng)相,常壓)b.半硬質(zhì)凝膠：交聯(lián)聚苯乙烯凝膠；(有機(jī)溶劑，較高壓)c.硬質(zhì)凝膠：多孔硅膠；多孔玻珠；(高速)當(dāng)前44頁(yè)，總共101頁(yè)?！?.5液相色譜法流動(dòng)相1.重要性：GC載氣僅三四種，要提高柱效選擇性，主要是改變固定相的性質(zhì)；

LC則不同，當(dāng)固定相選定時(shí)，流動(dòng)相的種類(lèi)，配比能顯著地影響分離效果，因此流動(dòng)相的選擇很重要。2.選擇流動(dòng)相應(yīng)注意的因素79/2：5點(diǎn)，

當(dāng)前45頁(yè)，總共101頁(yè)。

選擇流動(dòng)相的注意因素：（1）流動(dòng)相的純度：一般是采用分析純?cè)噭?，必要時(shí)需進(jìn)一步純化，以除去干擾的雜質(zhì)。（2）應(yīng)避免使用會(huì)引起柱效損失或保留值特性變化的溶劑。（固定相不能吸附溶劑或與流動(dòng)相互溶。）（3）對(duì)試樣要有適宜的溶解度，否則會(huì)在柱頭易產(chǎn)生沉淀。（4）溶劑的粘度小些為好，否則會(huì)降低試樣組分的擴(kuò)散系數(shù)，造成傳質(zhì)速率緩慢，柱效下降。（5）應(yīng)柱檢測(cè)器相匹配（溶劑不能被相應(yīng)的檢測(cè)器檢測(cè)出來(lái)）當(dāng)前46頁(yè)，總共101頁(yè)。3.溶劑的選擇79/-3：

a.依據(jù)：溶劑的極性是重要依據(jù)。

b.溶劑極性順序，水最大，煤油最小。

c.采用多元組合溶劑系統(tǒng)作為流動(dòng)相（底液和洗脫液）（底劑決定基本的色譜分離情況；洗脫劑則調(diào)節(jié)試樣組分的滯留并對(duì)幾個(gè)具有選擇性的分離作用）

d.根據(jù)不同的方法選擇合適的底液和洗脫液

當(dāng)前47頁(yè)，總共101頁(yè)。選用溶劑的依據(jù)：溶劑的極性。正相色譜：底劑（弱極性）＋洗脫劑（極性較強(qiáng)）反相色譜：水（主體）＋有機(jī)溶劑調(diào)節(jié)劑。離子交換色譜：組分保留值通過(guò)流動(dòng)相的離子強(qiáng)度（鹽的濃度）和pH來(lái)控制。增加鹽的濃度，保留值降低；陽(yáng)離子交換柱流動(dòng)相pH增加，保留值增加，陰離子交換柱相反。排阻色譜：所用的溶劑必須與凝膠本身非常相似，這樣才能潤(rùn)濕凝膠并防止吸附作用。當(dāng)前48頁(yè)，總共101頁(yè)?！?-6高效液相色譜儀

highperformanceliquidchromatograph當(dāng)前49頁(yè)，總共101頁(yè)。液相色譜儀（2）當(dāng)前50頁(yè)，總共101頁(yè)。液相色譜儀（3）當(dāng)前51頁(yè)，總共101頁(yè)。液相色譜儀（4）當(dāng)前52頁(yè)，總共101頁(yè)。一、概述80/1：高效液相色譜儀一般都具備貯液器、高壓泵、梯度洗提裝置、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、恒溫器、記錄儀等主要部件。

二、結(jié)構(gòu)示意圖，fig3-4.三、部件介紹

1.高壓泵（壓力150

～350×105Pa）要求：a.流量要穩(wěn)定；80/-1b.壓力平穩(wěn)無(wú)脈動(dòng)；81/2.c.對(duì)流速要有一定的可調(diào)范圍.81/4.動(dòng)畫(huà)當(dāng)前53頁(yè)，總共101頁(yè)。

類(lèi)型：

a.往復(fù)式柱塞泵—是目前廣泛使用的恒流泵.

機(jī)理特點(diǎn)81/-2;6:1)不受整個(gè)色譜體系中其余部分阻力稍有變化的影響，連續(xù)供給恒定體積的流動(dòng)相；

2）可方便地通過(guò)改變柱塞沖程的大小或往復(fù)的頻率來(lái)調(diào)節(jié)流量；

3）由于死體積?。s0.1mL），更換溶劑方便，很適用于梯度洗提.

不足：

1）輸出有脈沖波動(dòng)，會(huì)干擾檢測(cè)器正常工作；2）由于產(chǎn)生基線噪聲而影響檢測(cè)的靈敏度.當(dāng)前54頁(yè)，總共101頁(yè)。b.氣動(dòng)放大泵—恒壓泵原理：p1SA=p2SB

其工作原理:這是一種恒壓泵。特點(diǎn)82/-6:

1）能供給無(wú)脈沖的穩(wěn)定流量的輸出.

2）液缸體積大，更換流動(dòng)相不方便；

3）不便于梯度洗提.4）適合勻漿法填裝色譜柱。當(dāng)前55頁(yè)，總共101頁(yè)。2.梯度洗提（梯度洗脫、梯度淋洗）裝置82/a.作用：與GC中的程序升溫一樣.（P22、23）

b.定義83/1：所謂梯度洗提，就是載液中含有兩種以上不同極性的溶劑，在分離過(guò)程中按一定的程序連續(xù)改變載液中溶劑的配比和極性，通過(guò)載液中極性的變化來(lái)改變被分離組分的分離因素，以提高分離效果。應(yīng)用梯度洗提還可以使分離時(shí)間縮短，分辨能力增加，還可提高最小檢測(cè)量和定量分析的精度。外梯度（低壓梯度）：先混合后輸入色譜柱；內(nèi)梯度（高壓梯度）：先泵入梯度混合室再入色譜柱；當(dāng)前56頁(yè)，總共101頁(yè)。何謂梯度洗提？它與氣相色譜中的程序升溫有何異同之處？解：在一個(gè)分析周期內(nèi)，按一定程序不斷改變流動(dòng)相的組成或濃度配比，稱(chēng)為梯度洗提．是改進(jìn)液相色譜分離的重要手段．梯度洗提與氣相色譜中的程序升溫類(lèi)似，但是前者連續(xù)改變的是流動(dòng)相的極性、pH或離子強(qiáng)度，而后者改變的溫度．程序升溫也是改進(jìn)氣相色譜分離的重要手段．當(dāng)前57頁(yè)，總共101頁(yè)。3.進(jìn)樣裝置

a.重要性83/1：進(jìn)樣方式及試樣體積對(duì)柱效有很大影響.要獲得良好的分離效果和重現(xiàn)性，需要將試樣“濃縮”地瞬間注入色譜柱入擔(dān)體的中心成一個(gè)點(diǎn)。b.進(jìn)樣方式

1）注射器進(jìn)樣裝置：由于不能承受高壓，所以需用停流進(jìn)樣方法，但該方式無(wú)法取得精確的保留時(shí)間，峰形的重現(xiàn)性亦較差.當(dāng)前58頁(yè)，總共101頁(yè)。2）高壓定量進(jìn)樣閥通過(guò)進(jìn)樣閥（通常是六通閥）直接向壓力系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)樣而不必停止流動(dòng)相的一種裝置（fig3-7）a.進(jìn)樣準(zhǔn)備：1和6，2和3連通，試樣由5、4注入定量管；b.進(jìn)樣：閥芯順時(shí)針旋轉(zhuǎn)600，這時(shí)1和2，3和4，5和6連通，試樣送入柱中.特點(diǎn)：進(jìn)樣準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，適于定量分析.當(dāng)前59頁(yè)，總共101頁(yè)。高效液相色譜進(jìn)樣技術(shù)與氣相色譜進(jìn)樣技術(shù)有和不同之處？解：在液相色譜中為了承受高壓，常常采用停流進(jìn)樣與高壓定量進(jìn)樣閥進(jìn)樣的方式．當(dāng)前60頁(yè)，總共101頁(yè)。4.色譜柱

a.參數(shù)：id，4.6或3.9mm；

L=15-30cm；填料顆粒度，5-10μm；

n=5000-10000b.發(fā)展趨勢(shì)

1）減小填料粒度，3-5μm；

2）減小柱內(nèi)徑，<1mm；

c.裝填方式

1）干法，填料粒度大于20μm；

2）濕法（勻漿法），粒度小于20μm；(生成勻漿，高壓裝柱）當(dāng)前61頁(yè)，總共101頁(yè)。5.檢測(cè)器要求84/-1：具有靈敏度高、重現(xiàn)性好、響應(yīng)快、現(xiàn)性范圍寬、適用范圍廣、對(duì)流動(dòng)相和溫度波動(dòng)不敏感、死體積小等特點(diǎn).a.紫外光度檢測(cè)器85/11）原理，被分析試樣組分對(duì)特定波長(zhǎng)紫外光的選擇性吸收，組分濃度與吸光度關(guān)系遵守比爾定律。2）光路圖，圖3-8；3）特點(diǎn)85/3；a.具有很高靈敏度；

b.對(duì)溫度和流速不敏感，可用于梯度洗提.

缺點(diǎn)：不適用于對(duì)紫外光不吸收的試樣.4）發(fā)展85-1；光電二極管211/1024個(gè)陣列檢測(cè)器.當(dāng)前62頁(yè)，總共101頁(yè)。

紫外檢測(cè)器的重要進(jìn)展；光電二極管陣列檢測(cè)器：211/1024個(gè)二極管陣列，各檢測(cè)特定波長(zhǎng)，計(jì)算機(jī)快速處理，三維立體譜圖，如圖所示。當(dāng)前63頁(yè)，總共101頁(yè)。當(dāng)前64頁(yè)，總共101頁(yè)。光電二極管陣列檢測(cè)器當(dāng)前65頁(yè)，總共101頁(yè)。b.熒光檢測(cè)器86/1）原理：許多物質(zhì)，特別是具有對(duì)稱(chēng)共軛結(jié)構(gòu)的有機(jī)芳環(huán)分子受紫外光激發(fā)后，能輻射出比紫外光波長(zhǎng)較長(zhǎng)的熒光，某些不發(fā)射熒光的物質(zhì)亦可通過(guò)化學(xué)衍生轉(zhuǎn)變成能發(fā)出熒光的物質(zhì)而得到檢測(cè)。當(dāng)入射光強(qiáng)度、試樣池長(zhǎng)度不變時(shí)，稀溶液的熒光強(qiáng)度與溶液濃度成正比。

2）光路圖：圖3-11；

3）特點(diǎn)：熒光檢測(cè)器比紫外光度檢測(cè)器的靈敏度要高2個(gè)數(shù)量級(jí)。但線性范圍僅103，利用可調(diào)諧的激光作光源（激光誘導(dǎo)熒光）可使檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確度都得到提高。當(dāng)前66頁(yè)，總共101頁(yè)。熒光檢測(cè)器（fluorescencedetector）

高靈敏度、高選擇性應(yīng)用：對(duì)多環(huán)芳烴，維生素B、黃曲霉素、卟啉類(lèi)化合物、農(nóng)藥、藥物、氨基酸、甾類(lèi)化合物等有響應(yīng)

當(dāng)前67頁(yè)，總共101頁(yè)。c.差示折光檢測(cè)器—通用型87/1）原理：借連續(xù)測(cè)定流通池中溶液折射率的方法來(lái)測(cè)定試樣濃度的檢測(cè)器。溶有試樣的流動(dòng)相和純流動(dòng)相之間折射率之差，表示試樣在流動(dòng)相中的濃度。2）類(lèi)型：偏轉(zhuǎn)式；反射式3）定量方法：偏轉(zhuǎn)式是利用測(cè)量折射角偏轉(zhuǎn)值的大小來(lái)測(cè)定試樣的濃度。4）特點(diǎn)88/-1：幾乎每種物質(zhì)都有各自不同的折射率，因此都可用差示折光檢測(cè)器來(lái)檢測(cè)，如同GC中熱導(dǎo)池一樣，它是一種通用型的濃度檢測(cè)器。5）不足89/1：a.對(duì)溫度變化敏感；b.不能梯度洗提.當(dāng)前68頁(yè)，總共101頁(yè)。當(dāng)前69頁(yè)，總共101頁(yè)。d.電導(dǎo)檢測(cè)器89/1）特點(diǎn)：是離子色譜法中使用最廣泛的檢測(cè)器.

不足：電導(dǎo)檢測(cè)器的響應(yīng)受溫度的影響較大，因此要求嚴(yán)格控制溫度.2）原理：利用物質(zhì)電離后產(chǎn)生的電導(dǎo)變化來(lái)測(cè)定電離物質(zhì)含量.（參P72）3）類(lèi)型：

a.兩電極電導(dǎo)檢測(cè)器—用于低電導(dǎo)背景的抑制型離子色譜.b.五電極式電導(dǎo)檢測(cè)器90/—用于單柱型離子色譜，它有效地消除了極化和電解效應(yīng)的影響，在高背景電導(dǎo)下仍能獲得極低的噪聲水平，適用于單柱型離子色譜系統(tǒng)。當(dāng)前70頁(yè)，總共101頁(yè)。當(dāng)前71頁(yè)，總共101頁(yè)。當(dāng)前72頁(yè)，總共101頁(yè)。

（5）蒸發(fā)光散射檢測(cè)器蒸發(fā)光散射檢測(cè)器是一種通用型的檢測(cè)器，可檢測(cè)揮發(fā)性低于流動(dòng)相的任何樣品，而不需要樣品含有發(fā)色基團(tuán)。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器靈敏度比示差折光檢測(cè)器高，對(duì)溫度變化不敏感，基線穩(wěn)定，適合與梯度洗脫液相色譜聯(lián)用。

蒸發(fā)光散射檢測(cè)器已被廣泛應(yīng)用于碳水化合物、類(lèi)脂、脂肪酸和氨基酸、藥物以及聚合物等的檢測(cè)。當(dāng)前73頁(yè)，總共101頁(yè)。工作原理霧化：液體流動(dòng)相在載氣壓力的作用下在霧化室內(nèi)轉(zhuǎn)變成細(xì)小的液滴，從而使溶劑更易于蒸發(fā)。液滴的大小和均勻性是保證檢測(cè)器的靈敏度和重復(fù)性的重要因素。蒸發(fā)：載氣把液滴從霧化室運(yùn)送到漂移管進(jìn)行蒸發(fā)。在漂移管中，溶劑被除去，留下微?；蚣?nèi)苜|(zhì)的小滴。檢測(cè)：光源采用650nm激光，溶質(zhì)顆粒從漂移管出來(lái)后進(jìn)入光檢測(cè)池，并穿過(guò)激光光束。被溶質(zhì)顆粒散射的光通過(guò)光電倍增管進(jìn)行收集。電信號(hào)的強(qiáng)弱取決于散射室中溶質(zhì)顆粒大小與數(shù)量。當(dāng)前74頁(yè)，總共101頁(yè)。Step1.Eluentisnebulizedandsmalldropletsareselectedtominimizebackgroundnoise.Step2.Smalldropletsareevaporatedatlowtemperaturestoavoidlossofcompounds.

Step3.Thesoluteparticlesarefocussed,usinggas-supportedfocusing(GSF)forenhancedsignal-to-noiseratiosandlessmaintenance,anddetectthelightscattering

當(dāng)前75頁(yè)，總共101頁(yè)。Step1:Nebulization

ColumneffluentpassesthroughnebulizerneedleMixeswithnitrogengasFormsdispersionofdroplets當(dāng)前76頁(yè)，總共101頁(yè)。Step2:MobilePhaseEvaporation

Dropletspassthroughaheatedzone

Mobilephaseevaporatesfromthesampleparticle

Driedsampleparticlesremain

當(dāng)前77頁(yè)，總共101頁(yè)。Step3:Detection

Sampleparticlespassthroughanopticalcell

Sampleparticlesinterruptlaserbeamand

scatterlight

Photodiodedetectsthescatteredlight

當(dāng)前78頁(yè)，總共101頁(yè)。§3.7高效液相色譜分離類(lèi)型的選擇90/1.應(yīng)考慮的因素：

a.試樣的性質(zhì):分子質(zhì)量,化學(xué)結(jié)構(gòu)極性,溶解度參數(shù)；

b.色譜分離類(lèi)型的特點(diǎn)及應(yīng)用范圍；

c.實(shí)驗(yàn)室條件：儀器、色譜柱等.2.應(yīng)用范圍

a.以分子量劃分

1）低分子量，揮發(fā)性高的試樣—用GC；

2）分子量200—2000的試樣—標(biāo)準(zhǔn)LC；

3）分子量大于2000—空間排阻色譜法；

b.以試樣在溶劑中溶解情況劃分3.匯總（table3—3）當(dāng)前79頁(yè)，總共101頁(yè)。

色譜分離方法的選擇:表3-3當(dāng)前80頁(yè)，總共101頁(yè)?！?.8高效液相色譜法應(yīng)用實(shí)例

HPLC更適宜于分離、分析高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、生理活性以及相對(duì)分子質(zhì)量較大的物質(zhì)；因而已應(yīng)用于核酸、肽類(lèi)、內(nèi)酯、稠環(huán)芳烴、高聚物、藥物、人體代謝產(chǎn)物、生物大分子、表面活性劑、抗氧劑、殺蟲(chóng)劑、除莠劑等分析中；在化工、環(huán)保、臨床藥物等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用；目前在生命科學(xué)中又顯示出其突出地位.

具體認(rèn)真觀察、分析P91—97各圖.當(dāng)前81頁(yè)，總共101頁(yè)?！?.9液相制備色譜97/1.作用：制備色譜是以色譜技術(shù)來(lái)分離、制備較大量純組分的有效方法。

2.實(shí)現(xiàn)液相制備色譜主要問(wèn)題：

a.色譜柱的柱容量

b.液相制備色譜方法

c.液相制備色譜儀當(dāng)前82頁(yè)，總共101頁(yè)?！?.10毛細(xì)管電泳

1.定義：在外加電場(chǎng)的影響下，帶電的膠體粒子或離子在分散介質(zhì)中作定向移動(dòng)的現(xiàn)象稱(chēng)為電泳。

2.分類(lèi)：

a.毛細(xì)管區(qū)帶電泳；

b.毛細(xì)管凝膠電泳；

c.膠束電動(dòng)力學(xué)毛細(xì)管色譜；

d.毛細(xì)管等電聚焦；

e.毛細(xì)管等速電泳；

f.毛細(xì)管電滲色譜.當(dāng)前83頁(yè)，總共101頁(yè)。練習(xí)1.

如果樣品的相對(duì)分子量在200到2000之間，一般可考慮使用（）進(jìn)行分離。

A.

氣相色譜法，

B.

空間排阻色譜法，

C.

液相色譜法，

D.

以上都不是。2、下列用于高效液相色譜的檢測(cè)器，（）檢測(cè)器不能使用梯度洗脫。A、紫外檢測(cè)器B、熒光檢測(cè)器C、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器D、示差折光檢測(cè)器3.

對(duì)于正相液相色譜法，是指流動(dòng)相的極性（）固定液的極性。

A.

小于，

B.

大于，

C.

等于，

D.

以上都不是。

4.

對(duì)于反相液相色譜法，是指流動(dòng)相的極性（）固定液的極性。

A.

小于，

B.

大于，

C.

等于，

D.

以上都不是。

當(dāng)前84頁(yè)，總共101頁(yè)。5、液相色譜的流動(dòng)相又稱(chēng)為淋洗液，改變淋洗液的組成、極性可顯著改變組分分離效果。（）6.

液相色譜法中使用的梯度洗提操作是指在分離過(guò)程中按一定的程序連續(xù)改變載液中溶劑的________________；而氣相色譜法中使用的程序升溫操作是指柱溫按預(yù)定的加熱速率隨時(shí)間作________________增加，這些操作的目的都是為了提高分離效果。7、離子色譜法通常以______________為通用檢測(cè)器，為了消除流動(dòng)相中強(qiáng)電解質(zhì)背景離子對(duì)檢測(cè)器的干擾，設(shè)置了___________。8、相對(duì)分子質(zhì)量較低，揮發(fā)性較高的試樣，適于用氣相色譜法，相對(duì)分子質(zhì)量為200~2000適于用________色譜法，相對(duì)分子質(zhì)量大于2000的則宜用______色譜法。當(dāng)前85頁(yè)，總共101頁(yè)。9、反相分配色譜適于極性化合物的分離，正相分配色譜適用于非極性物質(zhì)的分離。（）10、液-固色譜法適用于分離________________________________________試樣，對(duì)具有__________________________________________有較高的選擇性。11、化學(xué)鍵合固定相的分離機(jī)制是______過(guò)程和________過(guò)程的雙重機(jī)制兼而有之的過(guò)程。當(dāng)前86頁(yè)，總共101頁(yè)。本章學(xué)習(xí)結(jié)束.當(dāng)前87頁(yè)，總共101頁(yè)。第三章思考題解答1.從分離原理、儀器構(gòu)造及應(yīng)用范圍上簡(jiǎn)要比較氣相色譜及液相色譜的異同點(diǎn)。解：二者都是根據(jù)樣品組分與流動(dòng)相和固定相相互作用力的差別進(jìn)行分離的。從儀器構(gòu)造上看，液相色譜需要增加高壓泵以提高流動(dòng)相的流動(dòng)速度，克服阻力。同時(shí)液相色譜所采用的固定相種類(lèi)要比氣相色譜豐富的多，分離方式也比較多樣。氣相色譜的檢測(cè)器主要采用熱導(dǎo)檢測(cè)器、氫焰檢測(cè)器和火焰光度檢測(cè)器等。而液相色譜則多使用紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器及電化學(xué)檢測(cè)器等。但是二者均可與MS等聯(lián)用。二者均具分離能力高、靈敏度高、分析速度快，操作方便等優(yōu)點(diǎn)，但沸點(diǎn)太高的物質(zhì)或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)難以用氣相色譜進(jìn)行分析。而只要試樣能夠制成溶液，既可用于HPLC分析，而不受沸點(diǎn)高、熱穩(wěn)定性差、相對(duì)分子量大的限制。當(dāng)前88頁(yè)，總共101頁(yè)。2.液相色譜中影響色譜峰展寬的因素有哪些?與氣相色譜相比較,有哪些主要不同之處?解:液相色譜中引起色譜峰擴(kuò)展的主要因素為渦流擴(kuò)散、流動(dòng)的流動(dòng)相傳質(zhì)、滯留的流動(dòng)相傳質(zhì)以及柱外效應(yīng)。在氣相色譜中徑向擴(kuò)散往往比較顯著，而液相色譜中徑向擴(kuò)散的影響較弱，往往可以忽略。另外，在液相色譜中還存在比較顯著的滯留流動(dòng)相傳質(zhì)及柱外效應(yīng)。當(dāng)前89頁(yè)，總共101頁(yè)。3.在液相色譜中,提高柱效的途徑有哪些?其中最有效的途徑是什么?解:液相色譜中提高柱效的途徑主要有:1.提高柱內(nèi)填料裝填的均勻性;2.改進(jìn)固定相減小粒度;選擇薄殼形擔(dān)體;選用低粘度的流動(dòng)相;

適當(dāng)提高柱溫其中,減小粒度是最有效的途徑.當(dāng)前90頁(yè)，總共101頁(yè)。4.液相色譜有幾種類(lèi)型?