第14章維生素類藥物的分析

第十四章維生素類藥物的分析

TheAnalysisofVitamines概述＊維生素是維持人體正常生理機(jī)能所必需的生物活性物質(zhì)。＊如果人體缺少某種維生素，就會(huì)引起維生素缺乏癥，而影響人體的正常生理機(jī)能。

例如:VA缺乏—夜盲癥VB1缺乏—腳氣病

脂溶性：水溶性：按溶解性分類VA、VD、VE、VK等B族（VB1、VB2等）、VC、煙酸、葉酸、泛酸等

第一節(jié)維生素A的分析

一．結(jié)構(gòu)與性質(zhì)1．化學(xué)結(jié)構(gòu)R=HVA醇VA1R=—COCH3VA醋酸酯R=—COC15H31

VA棕櫚酸酯結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：（1）環(huán)己烯+共軛多烯側(cè)鏈；（2）天然VA側(cè)鏈為全反式；（3）天然來源主要是魚肝油，為醋酸酯，棕櫚酸酯等,目前多由人工合成。

2.性質(zhì)a.

紫外吸收＊具有共軛多烯側(cè)鏈—紫外吸收。＊最大吸收波長(zhǎng)在325~328nm，隨VA存在狀態(tài)以及所用的溶劑，最大吸收波長(zhǎng)的位置有所不同b.溶解性：＊不溶于水＊溶于乙醚，氯仿，異丙醇，環(huán)己烷，脂肪和油。＊共軛多烯側(cè)鏈—性質(zhì)非常活潑.c.

不穩(wěn)定性◆維生素A的氧化產(chǎn)物：▲?。h(huán)氧化物▲

ⅱ．維生素A醛▲ⅲ．維生素A酸ord.與SbCl3作用—Carr-Price反應(yīng)★鑒別★含量測(cè)定二.鑒別試驗(yàn)1.

三氯化銻反應(yīng)

無水2.

紫外吸收光譜VA的無水乙醇溶液在326nm有最大吸收。3、TLC：確認(rèn)醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯，▲例：VA和其標(biāo)準(zhǔn)品用環(huán)己烷溶解展開劑：環(huán)己烷—乙醚（80：20）板：硅膠G顯色：SbCl3T.S.Rf：VA醇0.08VA醋酸酯0.41VA棕櫚酸酯0.75三．含量測(cè)定紫外分光光度法－三點(diǎn)校正法

1.概述＊共軛多烯的結(jié)構(gòu)—具有特征的紫外吸收。＊相關(guān)物質(zhì)—結(jié)構(gòu)相似,維生素A最大吸收波長(zhǎng)附近也有吸收，對(duì)測(cè)定有影響。＊Morton和Stubbs等人提出了三點(diǎn)校正法。2.

原理（根據(jù)、假定）?。镔|(zhì)對(duì)光的吸收具有加和性，即ⅱ．維生素A中的不相關(guān)吸收在310~340nm范圍內(nèi)近似一條直線,并且隨著波長(zhǎng)的增加，吸光度遞減。VitAUV法校正公式

第一法

A328(校正)=3.25(2A328-A316-A340)第二法

A325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334

VitA含量表示I.U.(internationalUnit)國(guó)際單位效價(jià)(I.U./g)按WHO規(guī)定VAacetateVAalcohol效價(jià)(I.U./g)2.907×1063.33×106

1gpure

VA

acetate≈2.907×106I.U.

測(cè)定波長(zhǎng)吸光度吸光度比值吸光度比值差計(jì)算值規(guī)定值300

0.555

316

0.907

(326)

328

1.000

(329)

340

0.811

360

0.299

第二節(jié)維生素C的分析一.化學(xué)結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：①

維生素C分子中具有2個(gè)手性C原子，具有4種光學(xué)異構(gòu)體。其中生理活性最強(qiáng)的是L（+）-抗壞血酸D(-)-異抗壞血酸L(+)-異抗壞血酸L(+)-抗壞血酸D(-)-抗壞血酸②具有內(nèi)酯結(jié)構(gòu)。堿性下可水解。③

具有烯二醇基。還原性，能夠被氧化成去氫抗壞血酸。酸性,能與堿成鹽。二．性質(zhì)與鑒別試驗(yàn)1.

酸性烯二醇結(jié)構(gòu)—酸性?！鳦3-OH，pKa=4.17(共軛效應(yīng))▲C2-OH，pKa=11.57(鄰位羰基)一元酸.能與NaHCO3作用生成鈉鹽。2.還原性烯二醇基—還原性。如：3.

水解反應(yīng)

L-二酮古羅糖酸(無生物活性)4.

熒光反應(yīng)5.糖的性質(zhì)VC的結(jié)構(gòu)很象糖結(jié)構(gòu)，具有糖的性質(zhì)。這個(gè)反應(yīng)的摩爾比是1∶1。三．含量測(cè)定1.

碘量法a.

原理b.

操作終點(diǎn)顏色：無色→藍(lán)色1ml0.1mol/L碘液1ml8.806mgC6H8O6c.

討論?。磻?yīng)條件＊酸性使VC在空氣中氧化速度減慢。ⅱ．溶劑＊新沸放冷的水。減少水中溶解氧的影響。ⅲ．還原性物質(zhì)的影響及排除＊VC注射液中常加有亞硫酸鹽如NaHSO3作為抗氧劑.排除：加入丙酮或甲醛。+→2.

2,6-二氯吲哚酚滴定法原理：在酸性下氧化型是紅色的;還原型是無色的酸性下直接用2,6-二氯吲哚酚滴定，用滴定劑自身的顏色變化指示終點(diǎn)，不需要另外的指示劑。所以，終點(diǎn)的顏色是溶液由無色變?yōu)榧t色。氧化型（紅色）還原型（無色）++第三節(jié)維生素B1的分析一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)1.結(jié)構(gòu)：氯化3-[（4-氨基-2-甲基嘧啶-5-）甲基]-5-（2-羥乙基）-4-甲基噻唑的鹽酸鹽2.結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：☆a.氨基嘧啶—次甲基—噻唑環(huán)季銨化合物☆

b.堿性基團(tuán)：嘧啶環(huán)上的氨基可與酸成鹽噻唑環(huán)上的季銨

3.性質(zhì)：①

硫色素反應(yīng)VB1噻唑環(huán)在堿性條件下可被鐵氰化鉀K3Fe(CN)6等一些氧化劑氧化后，與嘧啶環(huán)上的氨基縮合成具有熒光的硫色素。

②

沉淀反應(yīng)VB1的含氮雜環(huán)，能和生物堿沉淀試劑反應(yīng)產(chǎn)生沉淀。如：VB1與硅鎢酸反應(yīng)可生成組成一定的沉淀。＊重量法測(cè)定VB1含量。③

硫胺顯堿性具有兩個(gè)堿性基團(tuán):▲噻唑環(huán)上的季銨▲嘧啶環(huán)上的氨基可以和酸成鹽。如：鹽酸硫胺、硝酸硫胺。④

加堿分解后與醋酸鉛反應(yīng)VB1與NaOH試液一起加熱，分解產(chǎn)生NaS，可與PbAc2反應(yīng)生成PbS的黑色沉淀。⑤維生素B1的水溶液顯氯化物的特征反應(yīng)。二.鑒別試驗(yàn)1.硫色素?zé)晒夥磻?yīng)VB1專屬反應(yīng)，用于鑒別和含量測(cè)定。2、沉淀反應(yīng)：可與某些生物堿沉淀試劑生成組成恒定的沉淀如：與碘化汞鉀產(chǎn)生淡黃色沉淀與碘生成紅色沉淀與硅鎢酸生成白色沉淀與苦味酸生成扇形白色結(jié)晶三.含量測(cè)定非水滴定法（ChP所用方法）硅鎢酸重量法銀量法硫色素?zé)晒夥ㄗ贤夥止夤舛确ū壬ńj(luò)合滴定法非水溶液滴定法：1、原理：VB1分子中含有已成鹽的伯胺和季銨基團(tuán)，在非水溶液中，在醋酸汞存在下，均可被高氯酸滴定。2、方法：溶劑：冰醋酸指示劑：喹哪定紅-亞甲藍(lán)混合指示液滴定劑：高氯酸醋酸汞：終點(diǎn)：天藍(lán)色空白校正：T=16.86mg/ml第四節(jié)維生素E的分析一．化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)名稱：消旋—α—生育酚醋酸酯母核：苯駢二氫吡喃衍生物苯環(huán)上有一乙酰化的酚羥基側(cè)鏈：脂肪烷烴二、鑒別試驗(yàn)1、硝酸反應(yīng)：本品，無水乙醇溶解，加硝酸，75℃加熱約15分鐘，顯橙紅色。2、水解后氧化反應(yīng)：本品，在堿性條件下水解，得α—生育酚，在聯(lián)吡啶和三氯化鐵試液的作用下，反應(yīng)產(chǎn)生血紅色配離子。3、UV吸收：VE的0.01%無水乙醇液：λmax=284nmλmin=254nm三、雜質(zhì)檢查檢查游離生育酚:ChP2000P798取0.1g樣品，按鈰量法用Ce(SO4)2(0.01mol/L)滴定，以二苯胺為指示劑，消耗Ce(SO4)2液不得超過1.0ml。四、含量測(cè)定（一）鈰量法1、原理：VE用硫酸加熱回流，水解成生育酚，用硫酸鈰定量地氧化為對(duì)一生育醌，過量的硫酸鈰氧化二苯胺指示劑而指示滴定終點(diǎn)。終點(diǎn)：亮黃→灰紫空白試驗(yàn)2、反應(yīng)條件（1）VE在H2SO4酸性條件下水解為宜。堿性溶液中游離生育酚易被氧化。Ce(SO4)2液滴定在酸性溶液中進(jìn)行,如在堿性中會(huì)生成堿式鹽而影響測(cè)定。（2）Ce(SO4)2溶于酸水溶液，不溶于醇,α—生育酚溶于酸而不溶于水,滴定過程中應(yīng)有一定濃度的乙醇。（3）本法適用于純度高的VE供試品。（二）氣相色譜法：Chp20001、色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)色譜柱：2m×4mmI.D.硼硅玻璃柱，內(nèi)裝硅藻土（80~100目）固定相：硅酮（OV-17）涂布濃度2%載氣：N2，流速:含2%固定相：以18~20分鐘為宜；含5%固定相：以30~32分鐘為宜柱溫：265℃內(nèi)標(biāo)：正三十二烷檢測(cè)器：FID（氫火焰離子化檢測(cè)器）性能要求：理論塔板數(shù)按VE峰計(jì)算應(yīng)不低于500，VE峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)大于2。2、溶液配制：內(nèi)標(biāo)溶液：正三十二烷的環(huán)己烷溶液（1.0mg/ml）對(duì)照溶液：對(duì)照品溶解于內(nèi)標(biāo)溶液中(1mg/ml)供試品溶液：供試品約50mg，用內(nèi)標(biāo)溶液，溶解并稀釋至50ml

4、供試品測(cè)定mg=F×Ax×Ms/As

Ax：供試品峰面積