貽貝SOD純化方法的

貽貝SOD純化方法的比較

姓名:白超內(nèi)容簡(jiǎn)介貽貝、超氧化物歧化酶（SOD）論文摘要實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理貽貝貽貝也稱“海紅”，“殼菜”，“淡菜”，是我國(guó)重要的養(yǎng)殖貝類之一。貽貝肉鮮味美，營(yíng)養(yǎng)豐富，富含蛋白質(zhì)，素有“海中雞蛋”的美稱。貽貝作為一種優(yōu)質(zhì)的海產(chǎn)養(yǎng)殖貝類，不僅具有很高的食用價(jià)值，而且具有獨(dú)特的保健功能。但是，隨著貽貝養(yǎng)殖產(chǎn)量的迅速增加，如何充分高效地利用貽貝資源，開發(fā)出更多更好的深加工貽貝產(chǎn)品，既是貽貝產(chǎn)業(yè)面臨的巨大機(jī)遇，也是貽貝產(chǎn)業(yè)面臨的一個(gè)嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。超氧化物歧化酶超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase,E.C.l.15.l.l,簡(jiǎn)稱SOD)是一類廣泛存在于生物體內(nèi)的金屬酶。早在1939年Mann和Keilin就從牛紅細(xì)胞中分離出這種金屬蛋白，并命名為血銅蛋白。直至1969年McCord和Fridovich發(fā)現(xiàn)了它的酶活性后，才命名為SOD，并引起了人們的高度重視。目前人們按金屬輔基的不同已發(fā)現(xiàn)了四種SOD，分別是Cu/Zn一SoD、Mn一SOD、Fe一SoD和Ni-SOD。論文摘要摘要：采用熱變性——硫酸銨分級(jí)沉淀——并分別采用兩種柱層析方法——SephadexG-100；DEAE-SephadexA-50和SephadexG-100兩次柱層析的方法從貽貝中分離純化超氧化物歧化酶。結(jié)果表明粗酶液比活力58.91U/mg；SephadexG-100提純酶液比活力為555.49U/mg；DEAE-SephadexA-50提純酶液比活力為246.61U/mg；兩次柱層析提純酶液比活力為506.19U/mg。從提純酶液的比活力可以看出只經(jīng)過SephadexG-100的純化效果優(yōu)于經(jīng)過DEAE-SephadexA-50和SephadexG-100柱層析兩次柱層析的方法。實(shí)驗(yàn)?zāi)康哪壳?，我?guó)的貽貝產(chǎn)品，多為初加工產(chǎn)品，貽貝活性物質(zhì)沒有得到充分利用。如何采用現(xiàn)代生物技術(shù)及食品加工高新技術(shù)，開發(fā)更多更好的貽貝活性物質(zhì)新型產(chǎn)品成為目前的重要課題。SOD廣泛存在于動(dòng)物，植物及微生物體內(nèi)，近幾十年來，SOD的純化、性質(zhì)、結(jié)構(gòu)的研究多見于人，哺乳動(dòng)物，植物酵母等陸地生物的報(bào)道，海洋生物尤其是貝類SOD純化等方面的研究較少。本實(shí)驗(yàn)采用兩種純化方法，即①SephadexG-100②DEAE-SephadexA-50和SephadexG-100進(jìn)行粗酶液的純化提取。比較兩種方法提純后的SOD的比活力，酶的純化倍數(shù)。非變性聚丙烯酰胺凝膠檢測(cè)比較酶的提純效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果G-100柱層析收集液在280nm（系列1）和酶活力（系列2）圖實(shí)驗(yàn)結(jié)果A-50柱層析收集液在280nm（系列1）和酶活力（系列2）圖實(shí)驗(yàn)結(jié)果兩次柱層析后收集液在280nm（系列1）和酶活力（系列2）圖實(shí)驗(yàn)結(jié)果電泳結(jié)果如圖分析從只經(jīng)過G-100柱層析的收集液與經(jīng)過兩次柱層析收集液的比活力的比較可以看出，只經(jīng)過G-100柱層析的收集液的提純效果要好?？赡苁且?yàn)榇置敢航?jīng)過A-50柱層析后并未立即進(jìn)行第二次G-100柱層析，由于經(jīng)過A-50提純后的酶液濃度變小，低濃度酶液儲(chǔ)存時(shí)易于解離、吸附或發(fā)生表面變性失效],使得部分酶失活，再經(jīng)過第二次柱層析酶活力下降。從貽貝SOD的非變性聚丙烯酞胺凝膠電泳的NBT活性染色圖譜可以看出A-50和粗酶液均共有四條帶，G-100和兩次柱層析后的酶液均有三條帶。因SOD具有抑制NBT光化還原的作用，故說明均屬SOD。由于SOD在一定環(huán)境下可呈現(xiàn)不同聚合度，不同聚合度的SOD可能帶不同電荷，所以SOD經(jīng)PAGE呈現(xiàn)多條電泳帶。另外，SOD結(jié)構(gòu)松馳，無(wú)規(guī)卷曲較多，易發(fā)生構(gòu)象改變，不同構(gòu)象分子會(huì)呈現(xiàn)不同電泳譜