社區(qū)醫(yī)院檢驗(yàn)專業(yè)技能培訓(xùn)

2、化學(xué)學(xué)說：G+菌含有大量核糖核酸鎂鹽，與進(jìn)入細(xì)胞漿內(nèi)的結(jié)晶紫和碘牢固結(jié)合成大分子復(fù)合物，不易被95％乙醇脫色，而G-菌含此種物質(zhì)少，故易被乙醇脫色。第一頁(yè)，共93頁(yè)。3、細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)學(xué)說：G+菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)較致密，肽聚糖層厚且具有三維空間結(jié)構(gòu)，脂類含量低，乙醇不易透入，而且95％乙醇可使細(xì)胞壁脫水，細(xì)胞壁間隙縮小，通透性降低，阻礙結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物滲出，而G-菌的細(xì)胞壁較疏松，肽聚糖層薄且無三維空間結(jié)構(gòu)，含脂質(zhì)量高，第二頁(yè)，共93頁(yè)。易被乙醇溶解，致使細(xì)胞壁通透性增高，細(xì)胞內(nèi)的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物被溶出而脫色。目前認(rèn)為細(xì)胞壁與化學(xué)組成上的差異是染色反應(yīng)不同的主要原因。第三頁(yè)，共93頁(yè)。(二)試劑：

l、結(jié)晶紫溶液

2、革蘭碘液

3、95％乙醇

4、稀釋石炭酸復(fù)紅第四頁(yè)，共93頁(yè)。(三)操作步驟：

細(xì)菌標(biāo)本涂片固定后，先用結(jié)晶紫(或龍膽紫)初染lmin；小水流沖洗后加碘液媒染1min；小水流沖洗后用95％乙醇脫色1min；小水流沖洗后稀釋復(fù)紅復(fù)染30sec，小水流沖洗后使涂片自然干燥，鏡檢。第五頁(yè)，共93頁(yè)。(四)結(jié)果判定：

1、革蘭陽(yáng)性細(xì)菌：不被乙醇脫色仍保留紫色為革蘭陽(yáng)性菌(G+菌)，如葡萄球菌、鏈球菌等。

2、革蘭陰性細(xì)菌：若被乙醇脫色后再被復(fù)染成紅色者，為革蘭陰性菌(G-菌)，如大腸埃希菌、傷寒沙門菌、腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等。第六頁(yè)，共93頁(yè)。(五)革蘭染色的重要實(shí)際意義：1、鑒別細(xì)菌：可將所有細(xì)菌分為革蘭陽(yáng)性菌和革蘭陰性菌兩大類，有助于進(jìn)一步鑒別。

2、選擇藥物的參考，臨床上可根據(jù)病原菌的革蘭染色性，考慮選擇有效的藥物進(jìn)行治療。第七頁(yè)，共93頁(yè)。3、與致病性有關(guān)：許多革蘭陽(yáng)性菌能產(chǎn)生外毒素，而革蘭陰性菌則大多能產(chǎn)生內(nèi)毒素，兩者致病作用不同。

第八頁(yè)，共93頁(yè)。細(xì)菌的接種方法

(一)器材：

l、接種針和接種環(huán):它們由鎳鉻合金或白金絲制成。接種環(huán)的直徑約2--4mm，一個(gè)合格的接種環(huán)是正圓形，連接端沒有空隙；接種針長(zhǎng)50—80mm。兩者上端連接有一絕緣柄的金屬棒，全長(zhǎng)為145mm。第九頁(yè)，共93頁(yè)。2、固體培養(yǎng)基

3、酒精燈

第十頁(yè)，共93頁(yè)。

(二)接種方法：

主要應(yīng)用平板劃線法。另外還有瓊脂斜面接種法、穿刺接種法、液體培養(yǎng)基接種法、傾注平板接種法和涂布接種法。平板劃線法分為分區(qū)劃線法和連續(xù)劃線法。

第十一頁(yè)，共93頁(yè)。(三)平板劃線法操作步驟：

1、接種環(huán)在火焰上滅菌。

2、用滅菌后的接種環(huán)取標(biāo)本。

3、在固體培養(yǎng)基上劃線接種。

(四)判斷接種效果：要求接種后平板上劃線軌跡連續(xù)、平滑，平行的劃線之間不可重合，平板經(jīng)孵育培養(yǎng)后，應(yīng)沿劃線出現(xiàn)單個(gè)菌落。第十二頁(yè)，共93頁(yè)。室內(nèi)質(zhì)控操作步驟

(一)前期準(zhǔn)備工作

室內(nèi)質(zhì)控分為最佳條件下的變異(OCV)和常規(guī)條件下的變異(RCV)兩種情況，前者反映實(shí)驗(yàn)室最佳狀況下的質(zhì)控情況，而后者反映實(shí)驗(yàn)室日常情況下的質(zhì)控情況。第十三頁(yè)，共93頁(yè)。l、最佳條件下的變異(OCV)

OCV表示本室在當(dāng)前條件下該項(xiàng)目檢測(cè)所能達(dá)到的最好精密度水平，是本室工作水平的一個(gè)基礎(chǔ)指標(biāo)。OCV測(cè)定采用與常規(guī)工作相同的檢測(cè)方法、試劑和儀器，但應(yīng)保證測(cè)定是在本室所能達(dá)到的最理想、最穩(wěn)定的情況下進(jìn)行。第十四頁(yè)，共93頁(yè)。比如所用儀器等應(yīng)新近經(jīng)過校準(zhǔn)，試劑新鮮配制，由操作熟練、富有經(jīng)驗(yàn)的人員進(jìn)行。在測(cè)定全過程中應(yīng)盡量控制溫度、光照、反應(yīng)時(shí)間等一切可能影響測(cè)定結(jié)果的因素。第十五頁(yè)，共93頁(yè)。選擇瓶間差小、穩(wěn)定性良好的質(zhì)控品，每天做4、5批測(cè)定，每批一瓶質(zhì)控品，在4、5天內(nèi)即可得到至少20份數(shù)據(jù)，分別計(jì)算其、S、CV值，此CV值即為OCV。所測(cè)得的OCV綜合表達(dá)了批間和日間精密度。第十六頁(yè)，共93頁(yè)。2、常規(guī)條件下的變異(RCV)RCV表示本室在當(dāng)前條件下常規(guī)工作中該項(xiàng)目檢測(cè)的精密度水平。RCV的測(cè)定方法與對(duì)應(yīng)的OCV測(cè)定方法相似。不同點(diǎn)僅在于測(cè)定RCV時(shí)應(yīng)使用與常規(guī)工作完全相同的條件，而不要有任何特殊對(duì)待。第十七頁(yè)，共93頁(yè)。即應(yīng)當(dāng)把質(zhì)控品完全當(dāng)成病人標(biāo)本，每天由該項(xiàng)目常規(guī)檢測(cè)的操作者將它隨病人標(biāo)本同批檢測(cè)，以便真實(shí)反映常規(guī)檢測(cè)的精密度。在常規(guī)室內(nèi)質(zhì)量控制工作中，每更換一次質(zhì)控品的批號(hào)，第十八頁(yè)，共93頁(yè)。均應(yīng)對(duì)新批號(hào)的質(zhì)控品進(jìn)行RCV測(cè)定。RCV是常規(guī)條件下的變異，是日間精密度的表達(dá)指標(biāo)。因此，測(cè)定時(shí)質(zhì)控品必須保證使用和標(biāo)本相同的處理?xiàng)l件，而且每天要重新啟用一瓶，并只測(cè)一次。第十九頁(yè)，共93頁(yè)。20個(gè)數(shù)據(jù)要來自20天測(cè)定。一天內(nèi)測(cè)多個(gè)數(shù)據(jù)，甚至一批內(nèi)測(cè)多個(gè)數(shù)據(jù)，或每天將一瓶質(zhì)控品分成若干份，測(cè)定后求均值作為當(dāng)天的數(shù)據(jù)等做法均是錯(cuò)誤的。這樣得出的RCV往往比真實(shí)情況要小一些。RCV的計(jì)算方法與OCV完全相同。第二十頁(yè)，共93頁(yè)。3、室內(nèi)質(zhì)量控制工作的進(jìn)行

完成了OCV和RCV的測(cè)定和計(jì)算后，根據(jù)計(jì)算出的靶值和允許誤差范圍等數(shù)據(jù)繪制質(zhì)控圖，然后正式開始常規(guī)工作中的室內(nèi)質(zhì)量控制，每天隨常規(guī)標(biāo)本對(duì)該批質(zhì)控品進(jìn)行測(cè)定，并將結(jié)果畫在基于RCV測(cè)定得到的質(zhì)控圖上。第二十一頁(yè)，共93頁(yè)。特別要注意的是，根據(jù)RCV繪制的質(zhì)控圖對(duì)于同一批號(hào)質(zhì)控品是不變的，它與每個(gè)月常規(guī)室內(nèi)質(zhì)量控制工作中所得到的數(shù)值無關(guān)。第二十二頁(yè)，共93頁(yè)。(二)室內(nèi)質(zhì)控的實(shí)際操作

設(shè)定質(zhì)控圖的中心線(均值)

(1)暫定中心線(均值)的確定

在開始室內(nèi)質(zhì)控時(shí)，首先要建立質(zhì)控圖的中心線(均值)。均值必須在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)使用自己現(xiàn)行的測(cè)定方法進(jìn)行確定。第二十三頁(yè)，共93頁(yè)。定值質(zhì)控品只能作為確定中心線的參考，不能用質(zhì)控品上標(biāo)明的量作為均值。為了確定中心線，新批號(hào)的質(zhì)控品應(yīng)與當(dāng)前使用的質(zhì)控品一起進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)20或更多批獲得的質(zhì)控測(cè)定結(jié)果，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行離群值檢驗(yàn)(剔除超過3s外的數(shù)據(jù))，計(jì)算平均值，作為暫定中心線(均值)。第二十四頁(yè)，共93頁(yè)。此暫定中心線作為下一個(gè)月室內(nèi)質(zhì)控圖的中心線(均值)進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控；一個(gè)月結(jié)束后，將該月的在控結(jié)果與前20個(gè)質(zhì)控測(cè)定結(jié)果匯集在一起，計(jì)算累積平均值(第一個(gè)月)，以此累積的平均數(shù)作為下一個(gè)月質(zhì)控圖的中心線(均值)。重復(fù)上述操作過程，連續(xù)3—5個(gè)月。第二十五頁(yè)，共93頁(yè)。(2)常規(guī)中心線(均值)建立

以最初20個(gè)數(shù)據(jù)和3--5個(gè)月在控?cái)?shù)據(jù)匯集的所有數(shù)據(jù)計(jì)算的累積平均數(shù)作為質(zhì)控品在有效期內(nèi)的常規(guī)中心線(均值)，并以此作為今后室內(nèi)質(zhì)控的中心線(平均值)。第二十六頁(yè)，共93頁(yè)。對(duì)個(gè)別在有效期內(nèi)濃度水平不斷變化的項(xiàng)目，則需不斷調(diào)整中心線(均值)。

第二十七頁(yè)，共93頁(yè)。(二)設(shè)定控制限

對(duì)新批號(hào)質(zhì)控品應(yīng)確定控制限，控制限通常以標(biāo)準(zhǔn)差倍數(shù)表示。

1、穩(wěn)定性較長(zhǎng)的質(zhì)控品

(1)暫定標(biāo)準(zhǔn)差的設(shè)定操作過程與設(shè)定中心線(均值)過程基本相同，只是計(jì)算公式不同。第二十八頁(yè)，共93頁(yè)。(2)常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)差的設(shè)定(同上)

以前的標(biāo)準(zhǔn)差是幾個(gè)月數(shù)據(jù)的簡(jiǎn)單平均或者是累積的標(biāo)準(zhǔn)差。標(biāo)準(zhǔn)差等于平均數(shù)乘以變異系數(shù)。第二十九頁(yè)，共93頁(yè)。2、控制限的確定

通常以標(biāo)準(zhǔn)差的倍數(shù)表示控制限。在日常測(cè)定中，連續(xù)測(cè)定同一批號(hào)的質(zhì)控血清20天以上或一個(gè)月，求出均值和標(biāo)準(zhǔn)差，再確定質(zhì)控上限(UCL)和質(zhì)控下限(LCL)。第三十頁(yè)，共93頁(yè)。(三)室內(nèi)質(zhì)控的具體操作程序

以均值-標(biāo)準(zhǔn)差(X-SD)質(zhì)控圖為例：

1、目的：監(jiān)測(cè)分析的精密度。

2、方法：每天將質(zhì)控品隨病人標(biāo)本在相同的條件下(環(huán)境、儀器、試劑和操作者)進(jìn)行測(cè)定，并將測(cè)定結(jié)果描繪在事先做好的質(zhì)控圖上。第三十一頁(yè)，共93頁(yè)。三分類血細(xì)胞分析儀(COULTERSTKS血細(xì)胞分析儀)(一)工作原理

運(yùn)用電阻抗原理測(cè)量細(xì)胞大小和對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，用比色法來測(cè)定血紅蛋白，通過VCS技術(shù)對(duì)白細(xì)胞系統(tǒng)進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。第三十二頁(yè)，共93頁(yè)。(二)操作方法

分兩種模式：手工操作模式和自動(dòng)進(jìn)樣模式。

1、手工操作模式：檢查各種試劑存量→啟電源→STARTUP沖洗儀器→檢查儀器空白背景是否正常*→儀器準(zhǔn)備就緒→用質(zhì)控品操作檢查各參數(shù)是否在控**→輸入樣本條型碼號(hào)→將樣本插入吸樣針內(nèi)→第三十三頁(yè)，共93頁(yè)。按START→分析開始，結(jié)束→準(zhǔn)備就緒→分析后檢查試劑→按SHUTDOWN運(yùn)行關(guān)機(jī)程序→關(guān)閉電源。第三十四頁(yè)，共93頁(yè)。2、自動(dòng)進(jìn)樣模式：檢查各種試劑存量→開啟電源→按STARTUP沖洗儀器→檢查儀器空白背景是否正常*→儀器準(zhǔn)備就緒→用質(zhì)控品操作檢查各參數(shù)是否在控**→設(shè)置樣本號(hào)和條形碼號(hào)→將樣本放入試管架內(nèi)→第三十五頁(yè)，共93頁(yè)。將試管架放入進(jìn)樣池中→按START→分析開始，結(jié)束→準(zhǔn)備就緒→分析后檢查試劑→按SHUTDOWN運(yùn)行關(guān)機(jī)程序→關(guān)閉電源。第三十六頁(yè)，共93頁(yè)。說明：

*一般要求WBC≤0．2*109／L，RBC：<005*1012／L，Hb<01．Og/L，PLT<10*109／L，未達(dá)要求清洗后重測(cè)。

**按照均值+SD法進(jìn)行評(píng)價(jià)。第三十七頁(yè)，共93頁(yè)。(三)保養(yǎng)與維護(hù)

l、每日保養(yǎng)

(1)開機(jī)后檢查儀器電壓是否正常。

(2)儀器溫度要保持在20攝氏度以上；中午休息前做DRAINF12，讓殘留在小孔后少量廢血排除，然后做PRIMEAPERTURE，重新沖洗管道即可，一般中午可不關(guān)機(jī)。第三十八頁(yè)，共93頁(yè)。(3)關(guān)機(jī)時(shí)必須先關(guān)SHUTDOWN，然后再關(guān)機(jī)。

(4)及時(shí)清洗吸樣針及廢液槽積血。

(5)及時(shí)清潔儀器表面灰塵。

第三十九頁(yè)，共93頁(yè)。2、每月保養(yǎng)。

(1)清洗分血片

(2)清洗計(jì)數(shù)孔

①準(zhǔn)備飽和NaClO溶液，l：1稀釋。

②在主機(jī)鍵盤上按DRAIN，然后拿注射器吸入NaClO溶液，分別注入紅／白計(jì)數(shù)池各10ml，浸泡5-10分鐘后，按F12，DRAIN，按APERTUREPRIME,然后做一個(gè)血樣，再按STARTUP。第四十頁(yè)，共93頁(yè)。(3)清洗過濾網(wǎng)

(4)清洗管道

第四十一頁(yè)，共93頁(yè)。3、每季度保養(yǎng)

(1)打開分析儀前面的門檢查儀器內(nèi)管路和閥門周圍是否有鹽類結(jié)晶殘跡。

(2)用蒸餾水清洗去掉鹽類結(jié)晶然后仔細(xì)擦干，如有必要清洗系統(tǒng)的兩個(gè)樣杯。第四十二頁(yè)，共93頁(yè)。4、年度保養(yǎng)

年度維修保養(yǎng)只能由COULTER當(dāng)?shù)氐腃OULTER代理商指定的維修工程師來進(jìn)行,年度保養(yǎng)包括：

(1)檢查HgB光電比色計(jì)燈的狀況并清洗比色通道。

(2)檢查真空壓力。

第四十三頁(yè)，共93頁(yè)。(3)檢查起點(diǎn)和重點(diǎn)液面的準(zhǔn)確性。

(4)檢查閥門的狀況。

(5)檢查管路系統(tǒng)的狀況。

(6)清洗儀器內(nèi)部積塵。

(7)檢查所有電子部分。

(8)檢查或更換一些關(guān)鍵部分管道。

(9)更換液體過濾器。第四十四頁(yè)，共93頁(yè)。(10)更換儀器稀釋部分的接頭。

(11)檢查清洗稀釋部分的旋轉(zhuǎn)閥

(12)更換進(jìn)樣器的針頭。

第四十五頁(yè)，共93頁(yè)。(四)室內(nèi)質(zhì)控

1、質(zhì)控物選擇

由各儀器公司提供，與儀器配套的全血質(zhì)控品。

2、質(zhì)控方法

按照常規(guī)質(zhì)控方法進(jìn)行或啟用儀器內(nèi)部的X—B質(zhì)控流程。第四十六頁(yè)，共93頁(yè)。尿分析儀操作程序

(一)尿干化學(xué)試帶結(jié)構(gòu)和檢測(cè)原理

試紙條采用了多層膜的結(jié)構(gòu)，第一層尼龍膜起保護(hù)作用，防止大分子物質(zhì)對(duì)反應(yīng)的污染；第二層絨制層可破壞維生素C等干擾物質(zhì)；第三層是固有試劑的吸水層(即反應(yīng)層)，可使尿液均勻地浸入，第四十七頁(yè)，共93頁(yè)。與固定在本層物質(zhì)上的化學(xué)物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生顏色反應(yīng)，并能抑制尿液流到相鄰反應(yīng)區(qū)；最后一層選取尿液不浸潤(rùn)的塑料片作為支持物。第四十八頁(yè)，共93頁(yè)。(二)尿分析儀工作原理

儀器由機(jī)械系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)和電路系統(tǒng)三部分組成。機(jī)械部分主要功能是將待測(cè)的試紙條傳送到位，再將檢測(cè)后的試紙條排進(jìn)廢物盒。光學(xué)系統(tǒng)通常包括光源、單色處理和光電轉(zhuǎn)換三部分。第四十九頁(yè)，共93頁(yè)。光線照射到反應(yīng)區(qū)的表面產(chǎn)生反射光，反射光的強(qiáng)度與各個(gè)項(xiàng)目的反應(yīng)顏色成正比。不同強(qiáng)度的反射光再經(jīng)光電轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)換為電信號(hào)進(jìn)行處理。然后電路系統(tǒng)將轉(zhuǎn)換后的電信號(hào)放大，經(jīng)模/數(shù)轉(zhuǎn)換后送到CPU處理，計(jì)算第五十頁(yè)，共93頁(yè)。出最終檢測(cè)結(jié)果，然后將結(jié)果輸出到屏幕顯示并送打印機(jī)打印出報(bào)告。其中CPU不僅負(fù)責(zé)檢測(cè)數(shù)據(jù)的處理，還控制整個(gè)儀器機(jī)械，光學(xué)系統(tǒng)的運(yùn)作，并通過軟件實(shí)現(xiàn)多功能操作。第五十一頁(yè)，共93頁(yè)。反射率計(jì)算公式:

R(%)=(Tm*Cs/Ts*Cm)*100%第五十二頁(yè)，共93頁(yè)。Tm：

試劑塊對(duì)測(cè)定波長(zhǎng)的反射強(qiáng)度

Ts：

試劑塊對(duì)參考波長(zhǎng)的反射強(qiáng)度

Cm：

標(biāo)準(zhǔn)塊對(duì)測(cè)定波長(zhǎng)的反射強(qiáng)度

Cs：

標(biāo)準(zhǔn)塊對(duì)參考波長(zhǎng)的反射強(qiáng)度第五十三頁(yè)，共93頁(yè)。尿液分析儀測(cè)試原理的本質(zhì)是光的吸收和反射。試劑塊顏色的深淺對(duì)光的吸收、反射不一樣。顏色越深，吸收光量值越大，反射光量值越小，反射率越小;反之，顏色越淺，吸收光量值越小，反射光量值越大，第五十四頁(yè)，共93頁(yè)。反射率也就越大。換句話說，特定試劑塊顏色的深淺與尿液樣本中特定的化學(xué)成分濃度成正比。第五十五頁(yè)，共93頁(yè)。(三)操作程序

1、打開電源開機(jī)進(jìn)入測(cè)試界面。2、將室內(nèi)質(zhì)控品均勻滴在測(cè)試條上，放在儀器標(biāo)本架上，進(jìn)行檢測(cè)，符合要求(不超過±2+的范圍)，可開始病人標(biāo)本的檢測(cè)：否則尋找原因。3、將尿液均勻滴加在測(cè)試條上，并沾去多余尿液。第五十六頁(yè)，共93頁(yè)。4、將測(cè)試條放入儀器，儀器自動(dòng)測(cè)試并打印報(bào)告。

5、如白細(xì)胞、紅細(xì)胞、亞硝酸鹽及蛋白陽(yáng)性四項(xiàng)檢查中有任何一項(xiàng)呈陽(yáng)性結(jié)果，則需鏡檢。

6、將儀器結(jié)果及鏡檢結(jié)果報(bào)告一起發(fā)送。

7、關(guān)機(jī)。第五十七頁(yè)，共93頁(yè)。(四)室內(nèi)質(zhì)控

1、質(zhì)控物的選擇

多數(shù)采用人工尿液加入標(biāo)準(zhǔn)物作為質(zhì)控物。實(shí)踐證明：對(duì)于尿糖、尿蛋白、血紅蛋白和白細(xì)胞基本能滿足要求；但對(duì)于尿膽紅質(zhì)、尿膽原就不甚滿意。配制后不能久放等原因，所以有的學(xué)者采用濃縮尿質(zhì)控物，能得到較好效果。第五十八頁(yè)，共93頁(yè)。2、質(zhì)控步驟

首先應(yīng)將質(zhì)控物放入室溫，使其溫度與室溫一致，否則會(huì)因溫度影響使部分結(jié)果偏低。每次必須使用“正?！焙汀爱惓！眱煞N濃度的質(zhì)控物進(jìn)行試驗(yàn)：一天內(nèi)最好使用同一份質(zhì)控標(biāo)本。第五十九頁(yè)，共93頁(yè)。3、結(jié)果分析

如果質(zhì)控物的“正?！苯Y(jié)果變成“異?！苯Y(jié)果或“異?！苯Y(jié)果變成“正常”結(jié)果，均為失控?；蛘哔|(zhì)控物某一模塊的測(cè)定結(jié)果超過靶值正負(fù)1和等級(jí)，即±2以上(含±2)也為失控。第六十頁(yè)，共93頁(yè)。生化分析儀操作程序

(一)以日立7960為例

1、開電源開機(jī)儀器進(jìn)入開機(jī)程序(儀器自檢、清洗探針等)。

2、進(jìn)入主界面。

3、根據(jù)需要查看試劑量，運(yùn)行加試劑程序加入測(cè)試試劑，加入后再次查看新試劑量。第六十一頁(yè)，共93頁(yè)。4、新批號(hào)試劑需要定標(biāo)，進(jìn)入定標(biāo)程序，選擇項(xiàng)目、定標(biāo)液測(cè)試位置進(jìn)行定標(biāo)。

5、每日質(zhì)控，根據(jù)測(cè)試項(xiàng)目選擇質(zhì)控，可選高、中低值，進(jìn)入質(zhì)控操作程序，選擇項(xiàng)目、質(zhì)控品測(cè)試位置開始測(cè)試，第六十二頁(yè)，共93頁(yè)。測(cè)試后查看結(jié)果，是否在控制范圍內(nèi)(一般為標(biāo)準(zhǔn)值±2SD)，如不在控，需要分析失控原因重新測(cè)定，達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)方可測(cè)定病人標(biāo)本。

6、病人樣本檢測(cè)：將離心后的病人標(biāo)本放入測(cè)試架，進(jìn)入測(cè)第六十三頁(yè)，共93頁(yè)。試界面，輸入標(biāo)本編號(hào)、標(biāo)本位置、測(cè)試項(xiàng)目，按測(cè)試鍵開始測(cè)試，同時(shí)在中文電腦中輸入病人信息(編號(hào)、姓名、年齡、性別、科室等)，注意儀器與中文電腦的病人編號(hào)及信息相對(duì)應(yīng)。

第六十四頁(yè)，共93頁(yè)。7、審核結(jié)果:對(duì)結(jié)果進(jìn)行審核分析，如發(fā)現(xiàn)可疑結(jié)果需要重復(fù)測(cè)定，并標(biāo)明結(jié)果為重復(fù)測(cè)定結(jié)果，審核無誤后發(fā)送化驗(yàn)單

8、測(cè)試結(jié)束后取出試劑，清洗儀器，進(jìn)入關(guān)機(jī)程序關(guān)機(jī)，程序結(jié)束后關(guān)閉電源。第六十五頁(yè)，共93頁(yè)。(二)以日立7170生化分析儀為例：

1、特別注意在開機(jī)自檢時(shí)、在定標(biāo)、測(cè)定時(shí)，請(qǐng)不要進(jìn)行以下操作：(1)打開或關(guān)閉標(biāo)本盤2的蓋：(2)添加1D1或2D1：(3)添加或移動(dòng)試劑盤Rl或R2中的試劑。第六十六頁(yè)，共93頁(yè)。2、開機(jī)及儀器狀態(tài)的確認(rèn)

(1)光度計(jì)的檢查(每天一次)，選主菜單MAINT／UTILITY

(2)選Maintenance，選PhotometerCheck，選Select。

(3)選Start打印出檢查結(jié)果。

(4)檢查打印結(jié)果：與上次相比不應(yīng)有較大的增加。第六十七頁(yè)，共93頁(yè)。3、準(zhǔn)備試劑

(1)選REAGENT查看各試劑是否足夠;

(2)添加了試劑后，選Level(讓儀器測(cè)試試劑剩余量)。

(3)打開儀器左前門：添加清洗反應(yīng)杯用的清洗劑(1NNaOH)。第六十八頁(yè)，共93頁(yè)。4、檢查校準(zhǔn)品和質(zhì)控樣品是否足夠。

5、一般樣品輸入及確認(rèn)

(1)逐個(gè)樣品輸入：選

WORKPLACE．選NormalTs。

1)在Sample#輸入標(biāo)本順序號(hào)(1-10000)，規(guī)定周一：從1001開始，周二：從2001開始，……體檢標(biāo)本：9001開始。第六十九頁(yè)，共93頁(yè)。2)輸入標(biāo)本盤號(hào)：數(shù)字1—9任選。

3)輸入標(biāo)本的位置號(hào)：數(shù)字l-

100。

4)輸入項(xiàng)目。

5)然后Enter鍵

6)重復(fù)(5)一(6)進(jìn)行下一標(biāo)本項(xiàng)目的輸入。第七十頁(yè)，共93頁(yè)。(2)批量輸入：第一個(gè)標(biāo)本按上述(1)一(4)輸入選RepeatTS在LastSample#輸入要重復(fù)項(xiàng)目的最后樣品號(hào)，按Enter鍵。

(3)輸入樣品的修改或確認(rèn)：在Sample#輸入標(biāo)本順序號(hào)，(顯示已輸入樣品的項(xiàng)目)確認(rèn)或修改后，按Enter或Next顯示下一個(gè)樣品。第七十一頁(yè)，共93頁(yè)。6、標(biāo)本的放置：1-100放一般樣品；E101-E110放急測(cè)樣品；可用7170的樣品杯；或上層至少有5mm不含纖維蛋白的血清和標(biāo)本高度不低于5mm的試管：也可用RA的樣品杯，但要小心放置，不能放到底。第七十二頁(yè)，共93頁(yè)。7、校正、質(zhì)控及分析樣品

(1)選主菜單的START，在StartSample#打入開始測(cè)定的樣本號(hào)(1—10000)。

(2)如果要先進(jìn)行校正：在CalibrationStartup處選Yes(要先設(shè)定項(xiàng)目等)。(3)如果要先對(duì)個(gè)別項(xiàng)目進(jìn)行重新校正：在cafibrationReCalib處選Yes(要先設(shè)定項(xiàng)目等)。第七十三頁(yè)，共93頁(yè)。(4)如果要先測(cè)質(zhì)控標(biāo)本：在ControlStartup處選Yes。

(5)如果要對(duì)超過設(shè)定范圍的項(xiàng)目進(jìn)行自動(dòng)稀釋重測(cè)：在Rerun(Normal)處選Auto，(接著可選實(shí)時(shí)或批量重測(cè))，然后按右下角的Start。第七十四頁(yè)，共93頁(yè)。8、在測(cè)定過程中需要停止：

(1)按s．stop則停止加樣，等待已加樣的樣品檢測(cè)結(jié)果。

(2)按stop則停止所有操作，已加樣的標(biāo)本檢測(cè)無效。

第七十五頁(yè)，共93頁(yè)。9、在操作中進(jìn)行急診樣品的測(cè)定

(1)在樣品盤1的急查樣品位置(。E101-E110)上放急查的樣品。

(2)選WORKPLACE，選StatTS，在Position處輸入放置樣品的位置號(hào)(101—110)。

(3)選項(xiàng)目鍵(輸入急測(cè)項(xiàng)目)，然后按Enter鍵。急測(cè)樣品會(huì)自動(dòng)優(yōu)先測(cè)定并打印。第七十六頁(yè)，共93頁(yè)。10、測(cè)定結(jié)果的確認(rèn)

用于審核測(cè)定結(jié)果及反應(yīng)過程(反應(yīng)曲線)，整批傳送測(cè)定結(jié)果。

測(cè)定結(jié)果的審核。

(1)選WORKPLACE，選DataReview。

(2)左邊為樣品編號(hào)及其它信息，右邊為該樣品的測(cè)定結(jié)果。第七十七頁(yè)，共93頁(yè)。(3)可以選ReactionMonitor(反應(yīng)曲線)，加以確認(rèn)。

11、關(guān)機(jī)及保養(yǎng)

完成所有檢測(cè)，解決操作中出現(xiàn)的問題，添加好必要的試劑，進(jìn)行每日的保養(yǎng)，關(guān)閉電源。第七十八頁(yè)，共93頁(yè)。酶聯(lián)免疫技術(shù)操作

(一)儀器、

1、吸頭和微量移液器

2、洗板機(jī)

3、37℃孵育箱

4、酶標(biāo)儀第七十九頁(yè)，共93頁(yè)。(二)常規(guī)操作步驟：

1、操作步驟：

(1)標(biāo)本編號(hào)、離心，1500r／min，15min。

(2)取出試劑盒，包括陰性和陽(yáng)性對(duì)照品，檢查試劑盒有無破損，是否在使用有效期內(nèi)。第八十頁(yè)，共93頁(yè)。(3)在室溫環(huán)境里平衡溫度30min。

(4)打開試劑盒，取出酶標(biāo)板，按照說明書規(guī)定的步驟進(jìn)行操作。(5)根據(jù)操作要求將待測(cè)血清原液或用稀釋液做適當(dāng)稀釋(一般1：10到1：100)，每孔加100l血清，依次加樣。第八十一頁(yè)，共93頁(yè)。(6)將96孔板用蓋蓋好，放進(jìn)37℃恒溫箱，1h。

(7)取出酶標(biāo)板放進(jìn)自動(dòng)洗板機(jī)，進(jìn)行洗滌?；蛘呤止は礈臁?/p>

(8)每孔加入最適濃度的HRO標(biāo)記抗體100l。

(9)將96孔板用蓋蓋好，放進(jìn)37℃恒溫箱，1h。第八十二頁(yè)，共93頁(yè)。(10)取出酶標(biāo)板放進(jìn)自動(dòng)洗扳機(jī)，進(jìn)行洗滌?；蛘呤止は礈?。(11)每孔加入底物溶液100l。(12)將96孔板用蓋蓋好，放進(jìn)37℃恒溫箱，15-30min。

(13)取出酶標(biāo)板每孔加入2mol／LH2SO450l終止反應(yīng)。第八十三頁(yè)，共93頁(yè)。(14)用底物溶液(空白對(duì)照)校正酶標(biāo)儀零點(diǎn)。

(15)于492nm處測(cè)各孔的光密度(吸光度OD值)。

(16)每批試驗(yàn)均應(yīng)設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照孔。第八十四頁(yè)，共93頁(yè)。2、結(jié)果判斷：目前無統(tǒng)一方法，常用的有：

(1)以P／N比值≥2．1，即以

待