《ESI的工作原理》word版

ESI的工作原理是：內(nèi)襯彈性石英管的不銹鋼毛細(xì)管（內(nèi)徑約0.1mm）被加以3?5kV的正電壓，與相距約1cm接地的反電極形成強靜電場。被分析的樣品溶液從毛細(xì)管流出時在電場作用和輔助氣流的作用下形成高電荷的霧狀小液滴；在加熱的氣體作用下，液滴因溶劑的揮發(fā)逐漸縮小，其表面上的電荷密度不斷增大。當(dāng)電荷之間的排斥力足以克服表面X力時，液滴發(fā)生裂分，產(chǎn)生帶電的更小微滴；這些液滴中溶劑再蒸發(fā)，此過程不斷重復(fù)，直到液滴變得足夠小、表面電荷形成的電場足夠強，最終把樣品離子從液滴中解析出來，形成的樣品離子通過錐孔、聚焦透鏡進(jìn)入質(zhì)譜儀分析器后被檢測?；|(zhì)輔助激光解吸電離（Matrix-assistlaserdesorption/ionizatin,MALDI）通過激光束與固體樣品分子的作用是其產(chǎn)生分子離子和具有結(jié)構(gòu)信息的碎片；所研究的是結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜、不易氣化的大分子。采用固體基質(zhì)以分散被分析樣品?ALDI技術(shù)的主要特色和創(chuàng)新之處。基質(zhì)的主要作用是作為把能量從激光束傳遞給樣品的中間體。此外，大量過量的基質(zhì)（基質(zhì)：樣品=10000：1）使樣品得以有效分散，從而減少被分析樣品分子間的相互作用。基質(zhì)的選擇主要取決于所采用的激光波長，其次是被分析對象的性質(zhì)。TOF--開始時，所有離子都在一起。小的離子移動的快，大的離子移動的慢。根據(jù)到達(dá)檢測器時間的不同，而檢測出不同質(zhì)量的離子?？梢圆捎脙杉壖铀倩蚍瓷涫教岣邇x器的分辨率

1湖111542.0.31EMEJ3鴕n152780152g15^QC力和。1197.4197百1-11.414Q2辦uiac11^94-3137必之』1116.5■14263Q3"LlDfl600L.-l_.$T3士—中葉川*"I>.'I;I1 1?IP'li|?"TI?^|■*?電口55niodolew飛行時間質(zhì)譜儀的工作原理:1湖111542.0.31EMEJ3鴕n152780152g15^QC力和。1197.4197百1-11.414Q2辦uiac11^94-3137必之』1116.5■14263Q3"LlDfl600L.-l_.$T3士—中葉川*"I>.'I;I1 1?IP'li|?"TI?^|■*?電口55niodolew飛行時間質(zhì)譜儀的工作原理:在離子源中產(chǎn)生的離子經(jīng)電壓\/皿加速后獲得的速度為:經(jīng)過長度為L的漂移管到達(dá)檢測器，離子的長行需要的時間:蛋白的ESI質(zhì)譜圖可以看出，質(zhì)荷比大的離子飛行速度越小，到達(dá)檢測器的時間也越長，質(zhì)荷比小的離子先到達(dá)檢測器.在通常情況卜，離子的飛行時間為微秒數(shù)量級U154!63jWc715416.3(M)還原譜23?汨H159C051如Q1560015.瑞白M+n1186.9ESI多電荷譜M+n-11285.712附了M為分子量13T;提孔-L-L53OO「15333后:一.1.一113CG丁千:LTT □己口J65A二維核磁共振譜：是有兩個時間變量，經(jīng)兩次傅利葉變換得到的兩個獨立的頻率變量的譜圖。一般用第二個時間變量t2表示采樣時間，第一個時間變量t1那么是與t2無關(guān)的獨立變量，是脈沖序列中的某一個變化的時間間隔。預(yù)備期(preparationperiod)：是一個較長的時期，它使實驗前體系能回復(fù)到平衡狀態(tài)。演化期(evolutionperiod,t1)：在t1開始時由一個或幾個脈沖使體系激發(fā)，使之處于非平衡狀態(tài)。t1是變化的?；旌掀?mixingperiod,tm)：建立信號檢出的條件。混合期有可能不存在。檢測期(detectionperiod,t2)：以通常方式檢出FID信號。二維iH-iH核磁共振基本實驗：COSY:建立a.a.殘基內(nèi)標(biāo)量耦合iH核自旋間的化學(xué)位移關(guān)聯(lián)iH之間通過二鍵或者三鍵形成交叉峰TOCSY:建立a.a.殘基內(nèi)iH核自旋間的化學(xué)位移全關(guān)聯(lián)iH之間通過接力傳遞跨鍵產(chǎn)生交叉峰NOESY:建立a.a.殘基內(nèi)或者殘基之間，偶擷耦合iH之間的NOE相關(guān)兩個iH之間空間距離小于或者等于5A時，產(chǎn)生NOE交叉峰?氨基酸序列指認(rèn)在指紋區(qū)(fingerprintregion)作序歹U識另U(sequentialassignment)是有方向性的，即由橫向路徑到縱向路徑(iHai玲iHNi+i)除了脯氨酸(Pro)和甘氨酸(Gly),每個氨基酸殘基都各包含一個iHN和iHa基本規(guī)那么為：(i)由COSY交叉峰橫向引直線，找出在此線上的某一NOESY交叉峰。該NOESY交叉峰是由前一位氨基酸殘基的iHa與后一位氨基酸殘基的iHN之間建立的。是表示氨基酸殘基內(nèi)的NOE相關(guān)。⑵再由該NOESY交叉峰豎向引直線，找出在此線上的某一COSY交叉峰。⑶由后一個COSY交叉峰重復(fù)上述步驟。在1HN—1HN區(qū)域作序列識別。HSQC:?建立a.a.殘基內(nèi)1H-15N或1H-13C之間的化學(xué)位移相關(guān).1H與異核(15N或13C)之間通過單鍵1JNH或1JCH形成交叉峰.HSQC-TOCSY:建立a.a.殘基內(nèi)1H之間的化學(xué)位移全相關(guān).1H之間通過1H-13C之間的化學(xué)位移相關(guān)的介導(dǎo)而產(chǎn)生接力交叉峰.HSQC-NOE:建立a.a.殘基內(nèi)或者殘基之間，1H之間的NOE相關(guān).1H之間空間距離小于或者等于5A時，通過1H-15N或1H-13C單鍵1JNH相關(guān)的介導(dǎo)而產(chǎn)生NOE交叉峰.二維異核波譜譜峰指認(rèn)基本方法自旋系統(tǒng)指認(rèn)(Spinsystemassignment)——識別波譜中出現(xiàn)的交叉峰屬于哪一類氨基酸殘基HSQC+HSQC-TOCSY的綜合分析氨基酸序列指認(rèn)(Sequentialassignment)——識別正確的氨基酸殘基的序列HSQC+HSQC-NOE波譜的綜