臨床微生物檢查課件 第13章炭疽芽胞等

第十三章需氧革蘭陽性桿菌需氧芽胞桿菌屬炭疽芽胞桿菌、蠟樣芽胞桿菌1炭疽芽胞桿菌

（Bacillusanthracis)引起動物和人類——炭疽病是人類歷史上第一個被發(fā)現(xiàn)的病原菌，俗稱炭疽桿菌2致病物質(zhì)莢膜：

炭疽毒素：直接損傷微血管內(nèi)皮細(xì)胞，增加血管通透性而形成水腫3所致疾病

炭疽?。簜魅驹矗夯疾∈巢輨游锛捌渲破坊虮晃廴疚飩鞑ネ緩剑航佑|——皮膚炭疽食用——腸炭疽吸入——肺炭疽可并發(fā)敗血癥→炭疽性腦膜炎死亡率極高4乙類傳染病發(fā)生肺炭疽按甲類處理感染炭疽后可獲得持久免疫力5基本特性形態(tài)結(jié)構(gòu):致病菌中最大的G+桿菌，兩端平切、竹節(jié)狀有毒株有明顯莢膜6芽胞——橢圓形，小于菌體，位于菌體中央多在有氧條件下形成，25～30℃，在培養(yǎng)基中、土壤內(nèi)、動物尸體解剖后暴露在空氣中，都易形成芽胞在活體或完整未解剖尸體內(nèi)不形成芽胞

尸體嚴(yán)禁剝皮、解剖7培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧最適溫度30～35℃普通培養(yǎng)基:扁平、粗糙、不透明、灰白色、無光澤，邊緣不整齊的菌落，低倍鏡下菌落邊緣呈卷發(fā)狀8

BAP:12～15h不溶血，18～24h后可輕微溶血其他需氧芽胞桿菌大多溶血明顯而快速9肉湯——絮狀沉淀生長NaHCO3BAP：接種于含0.5%NaHCO3和10%馬血清的平板，10%CO2、37℃、24～48h

有毒株——粘液型菌落

無毒株——粗糙型菌落10菌體多糖抗原：--與毒力無關(guān)，耐熱、耐腐敗，長時間煮沸仍能與特異性抗體發(fā)生環(huán)狀沉淀反應(yīng)（Ascoli熱沉淀反應(yīng)）--特異性不高，能與其他需氧芽胞桿菌、14型肺炎鏈球菌、人A血型抗原發(fā)生交叉反應(yīng)抗原構(gòu)造11莢膜多肽抗原：莢膜腫脹試驗，對本菌鑒定有意義芽胞抗原：

有免疫原性和血清學(xué)診斷價值12炭疽毒素：--保護性抗原（PA)、致死因子（LF）、水腫因子（EF）三個組分--單獨皆無致病性，與PA結(jié)合才顯示出致病性13抵抗力芽胞抵抗力強，煮沸10min或干熱140℃3h才能殺滅在干燥土壤中或皮毛中常溫下存活數(shù)十年致病力不減，牧場一旦污染，傳染性可持續(xù)數(shù)十年生物武器14芽胞對化學(xué)消毒劑抵抗力不一，對碘和氧化劑較敏感（1：2500碘10min、3%H2O21h、4%高錳酸鉀15min、0.5%過氧乙酸10min殺死）對磺胺、青霉素、鏈霉素、四環(huán)素、紅霉素、氯酶素均敏感15實驗檢查要求快速檢出、分離鑒定病原菌，以利早期確診、查清疫源、及時治療和采取預(yù)防對策炭疽芽胞桿菌的芽胞抵抗力強，毒力強，能經(jīng)多種途徑傳播，要在三級生物安全實驗室進行實驗工作16標(biāo)本的采集與處理皮膚炭疽：病灶深部標(biāo)本肺炭疽：痰和血液腸炭疽：糞、嘔吐物腦膜炭疽：CSF、血液死于敗血癥的動物，嚴(yán)禁宰殺和解剖，可消毒皮膚后割取耳朵、舌尖采集少量血液，局限性病灶可取病變組織或附近淋巴結(jié)17涂片染色：G染色、莢膜染色、芽胞染色莢膜熒光抗體染色核酸檢測：核酸雜交標(biāo)本直接檢查18分離培養(yǎng)2%兔血清肉湯增菌→分離培養(yǎng)BAP、戊烷脒多粘菌素B平板19形態(tài)和菌落特征生化試驗:表13-1噬菌體裂解試驗：AP631炭疽噬菌體

鑒定20串珠試驗:

--接種于含青霉素(0.05～0.5U/ml)的肉湯中,37℃6h→大而均勻成串的圓球狀菌體

--與青霉素抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成有關(guān)

--類炭疽無此現(xiàn)象

21青霉素抑制試驗：接種于含青霉素5、10、100U/ml瓊脂平板，37℃24h

生長受抑制不生長串珠和青霉素抑制聯(lián)合試驗：兔血瓊脂平板抑菌環(huán)青霉素紙片22莢膜腫脹試驗：重碳酸鹽生長毒力試驗：

有毒株——M型菌落無毒株——R型菌落毒素動物試驗：

小鼠、家兔或豚鼠皮下接種23

復(fù)習(xí)要點炭疽桿菌的形態(tài)染色特點、分離培養(yǎng)、主要鑒定試驗24蠟樣芽胞桿菌

(Bacilluscereus)食物中毒含菌量達105/g以上嘔吐型——耐熱腸毒素腹瀉型——不耐熱腸毒素全眼球炎（外傷后）心內(nèi)膜炎、敗血癥和腦膜炎25夏、秋季多見食物有米飯、乳品、禽畜肉類、果汁飲料等，大多為加熱烹調(diào)過的熟食在米飯中極易繁殖，由米飯受污染引起的食物中毒在國內(nèi)、外均為常見中毒食物大多無腐敗、變質(zhì)現(xiàn)象，感官性狀正常，應(yīng)引起注意26基本特性形態(tài)結(jié)構(gòu)：G+大桿菌生長6h后即形成圓形芽胞、位于菌體中心或次末端、不突出菌體菌體兩端平截，多呈鏈狀排列引起食物中毒的菌株多有周鞭毛、無莢膜27培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，最適溫度30~35℃普通瓊脂平板——菌落較大，灰白色，表面粗糙似毛玻璃狀或融蠟狀，有蠟樣光澤28BAP——有β溶血卵黃平板——生長迅速，培養(yǎng)3h后，雖看不到菌落，但該菌可分解卵磷脂而形成白色的混濁環(huán)，稱乳光反應(yīng)/卵黃反應(yīng)29生化反應(yīng)：能分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、水楊素、糊精，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣能胨化牛乳，液化明膠，卵磷脂酶（+）VP（+）30抵抗力：耐熱，肉湯中細(xì)菌需100℃20min才能殺死，食物中毒菌株的游離芽胞耐受100℃30min、干熱120℃60min才能殺死對氯霉素、紅霉素、慶大霉素敏感，對青霉素、磺胺、呋喃類耐藥31實驗檢查標(biāo)本采集：

可疑食物、糞便、嘔吐物

32確診由該菌引起的食物中毒必須：從食物中分離出菌數(shù)＞105CFU/g（ml)，提示本菌活躍生長，構(gòu)成潛在危險從可疑食物分離到的菌株與從病人糞便和（或）嘔吐物中分離到的菌株屬同一血清型33

檢驗方法直接鏡檢分離培養(yǎng)與活菌計數(shù)(涂布法/傾注平板法）普通瓊脂平板

BAP

卵黃瓊脂平板34鑒定與分型：根據(jù)菌落特點、形態(tài)染色、生化反應(yīng)等初步鑒定生化分型、血清分型、噬菌體分型腸毒素檢測腹瀉毒素測定——家兔腸管結(jié)扎試驗嘔吐毒素測定——幼