臨床輸血與檢驗(yàn)第二部分

臨床輸血與檢驗(yàn)張循善2015.3現(xiàn)在是1頁\一共有50頁\編輯于星期三醫(yī)療機(jī)構(gòu)輸血科（血庫）承擔(dān)工作和研究領(lǐng)域免疫血液學(xué)實(shí)驗(yàn)室血液相容性試驗(yàn)血型不合新生兒溶血病實(shí)驗(yàn)室診斷輸血不良反應(yīng)研究成分輸血與自身輸血血液治療血液成分單采和置換術(shù)（造血干細(xì)胞移植）細(xì)胞治療臨床輸血質(zhì)量管理現(xiàn)在是2頁\一共有50頁\編輯于星期三免疫血液學(xué)血液相容性試驗(yàn)ABO血型鑒定RhD鑒定紅細(xì)胞意外抗體篩查和鑒定交叉配血試驗(yàn)現(xiàn)在是3頁\一共有50頁\編輯于星期三AABBRequirementsforPretransfusionTestingPositiveidentificationofrecipientandrecipientsampleABOgroupandRhtypingofrecipientanddonorblood.Redcellantibodydetectiontestsforclinicallysignificantantibodiesusingrecipientsserumorplasma.Comparisonofcurrentfindingsofrecipientssamplewithrecordofpreviouspatientresults.SelectionofcomponentsofABOgroupandRhtypeappropriatefortherecipient.Performanceofaserologicorcomputercrossmatch.Labelingofproductswiththerecipientsidentifyinginformation.現(xiàn)在是4頁\一共有50頁\編輯于星期三血型鑒定試驗(yàn)ABO血型鑒定（試管法）原理紅細(xì)胞膜上只有B抗原只有A抗原A、B抗原均有A、B抗原均無A型B型AB型O型有A抗體有B抗體無A、B抗體有A、B抗體血清中現(xiàn)在是5頁\一共有50頁\編輯于星期三ABO血型鑒定正定型：被檢者紅細(xì)胞與ABO標(biāo)準(zhǔn)血清反定型：被檢者血清或血漿與ABO試劑紅細(xì)胞現(xiàn)在是6頁\一共有50頁\編輯于星期三正定型試驗(yàn)方法（試管法）（1）取試管2支分別標(biāo)上A、B字樣（2）向A管滴加抗A標(biāo)準(zhǔn)血清1滴，向B管滴加抗B標(biāo)準(zhǔn)血清1滴（3）向A、B管各滴加5％的待檢紅細(xì)胞懸液各1滴。（4)搖勻，后以1000rpm離心1min，或按說明書要求操作。（5）將試管輕輕搖動(dòng)，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，以肉眼觀察有無凝集現(xiàn)象?，F(xiàn)在是7頁\一共有50頁\編輯于星期三ABO血型鑒定卡式法現(xiàn)在是8頁\一共有50頁\編輯于星期三反定型試驗(yàn)方法（試管法）（1）取試管3支分別標(biāo)上A、B、O字樣（2）向A、B、O三管各滴加待檢血清（漿）1滴（3）向A管滴加A型試劑紅細(xì)胞1滴，向B管滴加B型試劑紅細(xì)胞1滴,向O管滴加O型試劑紅細(xì)胞1滴。（4）搖勻，后以1000rpm離心1min，或按說明書要求操作。（5）將試管輕輕搖動(dòng)，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，以肉眼觀察有無凝集（或溶血）現(xiàn)象?，F(xiàn)在是9頁\一共有50頁\編輯于星期三結(jié)果判定正定型現(xiàn)在是10頁\一共有50頁\編輯于星期三結(jié)果判定

反定型現(xiàn)在是11頁\一共有50頁\編輯于星期三ABO血型鑒定的臨床意義（1）輸血血型鑒定是實(shí)施輸血治療的首要步驟，應(yīng)該在受血者與供血者血型相同，交叉配血完全相合的情況下才能輸血。正反定型一致，保證輸血安全，例如類B。（2）器官移植受者與供者最好選擇ABO血型相同進(jìn)行移植，血型不符易引起排斥反應(yīng)導(dǎo)致移植失?。?）新生兒溶血母子ABO血型不合可引起新生兒溶血病，主要是依據(jù)血型血清學(xué)檢查來診斷（4）其他ABO血型檢查還可用于親子鑒定，法醫(yī)學(xué)鑒定以及某些疾病相關(guān)的調(diào)查等現(xiàn)在是12頁\一共有50頁\編輯于星期三RhD血型鑒定（試管法）原理

從理論上講人類紅細(xì)胞上的Rh抗原主要有C、c、D、d、E、e六種抗原，但目前尚未發(fā)現(xiàn)抗d，因此也未肯定d抗原，故Rh抗原主要有五種。其中RhD抗原性最強(qiáng)，因此，臨床意義最大。一般情況，患者常規(guī)進(jìn)行RhD血型鑒定?，F(xiàn)在是13頁\一共有50頁\編輯于星期三RhD遺傳現(xiàn)在是14頁\一共有50頁\編輯于星期三RhD血型鑒定（試管法）操作方法1.取試管3支，分別標(biāo)記檢測管、陽性對照管、陰性對照管2.各管均加入抗D血清1滴3.檢測管加入受檢者紅細(xì)胞懸液1滴4.對照管分別加入RhD陽性紅細(xì)胞和RhD陰性紅細(xì)胞各1滴5.搖勻，以1000rpm離心1分鐘或按說明書操作，取出試管，判定結(jié)果現(xiàn)在是15頁\一共有50頁\編輯于星期三結(jié)果判定

如陽性對照管凝集，陰性對照管不凝集，受檢管凝集，為RhD陽性；陽性對照管凝集，陰性對照管不凝集，受檢管不凝集，則為RhD陰性現(xiàn)在是16頁\一共有50頁\編輯于星期三

RhD血型鑒定的臨床意義

（1）輸血前檢查為了保證安全輸血，輸血前應(yīng)做RhD血型鑒定。避免Rh陰性個(gè)體誤輸RhD陽性血液，防止發(fā)生同種免疫。（2）新生兒溶血病診斷由于IgG類的RhD抗體易通過胎盤，與相應(yīng)抗原反應(yīng)從而破壞胎兒紅細(xì)胞，引起嚴(yán)重的新生兒溶血病現(xiàn)在是17頁\一共有50頁\編輯于星期三Coomb’sTestUsehemagglutinationtodetect:1)Antibody–coatedRBC’s(“Direct”)2)Anti-RBCantibodyinserum(“Indirect”)現(xiàn)在是18頁\一共有50頁\編輯于星期三Directvs.IndirectCoomb’sTestagglutinationagglutination現(xiàn)在是19頁\一共有50頁\編輯于星期三TwoModesofAutoimmuneRBCDestruction*現(xiàn)在是20頁\一共有50頁\編輯于星期三交叉配血試驗(yàn)鹽水介質(zhì)配血法原理ABO、MN、P等血型系統(tǒng)產(chǎn)生的抗體為IgM抗體，可在鹽水介質(zhì)中與紅細(xì)胞表面的相應(yīng)抗原發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生肉眼可見的凝集現(xiàn)象。IgG抗A、抗B的濃度足夠大時(shí)，在鹽水介質(zhì)里中與紅細(xì)胞也能發(fā)生凝集現(xiàn)象現(xiàn)在是21頁\一共有50頁\編輯于星期三試驗(yàn)方法1.取小試管兩支分別標(biāo)注主、次管2.主側(cè)管內(nèi)加入受血者血清和供血者紅細(xì)胞懸液各1滴；次側(cè)管內(nèi)加入供血者血清和受血者紅細(xì)胞懸液各1滴3.混勻，1000rpm離心1min4.輕輕搖勻后鏡檢現(xiàn)在是22頁\一共有50頁\編輯于星期三結(jié)果判定

主、次管均不凝集且無溶血為配血相合，有凝集或/和溶血為不合?，F(xiàn)在是23頁\一共有50頁\編輯于星期三凝聚胺配血法原理凝聚胺是一種多價(jià)陽離子聚合物，在溶液中有多個(gè)陽離子基團(tuán)，能中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，縮短了紅細(xì)胞之間的距離，紅細(xì)胞之間排斥力的減弱，導(dǎo)致紅細(xì)胞非特異性聚凝，這種凝聚是可逆的。當(dāng)紅細(xì)胞與血清在低離子介質(zhì)中孵育，IgG抗體與紅細(xì)胞上相應(yīng)抗原結(jié)合后，在凝聚胺的作用下發(fā)生凝集。凝聚和凝集外觀上是不能區(qū)分的，再加入枸櫞酸鈉重懸液，枸櫞酸根的負(fù)電荷與凝聚胺上的正電荷中和，凝聚現(xiàn)象消失，而抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)生的凝集不會(huì)消失?，F(xiàn)在是24頁\一共有50頁\編輯于星期三試驗(yàn)方法1.取3支潔凈小試管，分別標(biāo)記主、次側(cè)管及對照管2.主側(cè)管：加入受血者血清（漿）2滴，供血者5%紅細(xì)胞懸液1滴，再加入低離子介質(zhì)溶液0.5ml，室溫靜置1min3.次側(cè)管：加入供血者血清（漿）2滴，受血者5%紅細(xì)胞懸液1滴，再加入低離子介質(zhì)溶液0.5ml，室溫靜置1min4.各加入2滴凝聚胺試劑，輕輕混勻，室溫靜置15s5.1000rpm，離心1min，取出試管，檢查上清液有無溶血反應(yīng)，若無溶血反應(yīng)，將上清液輕輕倒出，使管底保留大約0.1ml液體6.目測紅細(xì)胞是否形成凝塊，若無凝塊出現(xiàn)必須重做。有凝塊再輕搖試管，使紅細(xì)胞凝塊浮起7.各加入重懸液試劑2滴，并輕輕混勻。8.肉眼觀察無凝集后，必須使用顯微鏡觀察結(jié)果現(xiàn)在是25頁\一共有50頁\編輯于星期三結(jié)果判定1.若為凝聚胺引起的非免疫性凝聚應(yīng)在1min內(nèi)散開，表示兩血相容，可以使用2.若是抗原抗體引起的凝集則不會(huì)散開，表示兩血不相容，不宜使用現(xiàn)在是26頁\一共有50頁\編輯于星期三抗人球蛋白配血法試驗(yàn)原理在適合的溫度、時(shí)間等條件下，IgG型血型抗體與紅細(xì)胞膜上相應(yīng)抗原結(jié)合，使紅細(xì)胞致敏，但不能在鹽水介質(zhì)中直接凝集帶有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞。由于抗人球蛋白試劑是馬或兔抗人球蛋白抗體，加入此類試劑后，在離心力的作用下，這種抗體（二抗）與致敏在紅細(xì)胞膜上的IgG型血型抗體（一抗）發(fā)生抗原抗體結(jié)合反應(yīng)，經(jīng)抗人球蛋白抗體的“搭橋”作用，使原來已經(jīng)致敏的紅細(xì)胞發(fā)生凝集。因此，為了檢測出此類抗體，需要使用抗人球蛋白介質(zhì)進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)?，F(xiàn)在是27頁\一共有50頁\編輯于星期三試驗(yàn)方法取2支試管，分別標(biāo)明主側(cè)和次側(cè)。主側(cè)管加入受血者血清2滴和獻(xiàn)血者紅細(xì)胞懸液1滴，次側(cè)管加入獻(xiàn)血者血清2滴和受血者紅細(xì)胞1滴。各試管經(jīng)輕輕混勻后，置37℃水浴30min，分別取出后用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3次，傾去上清液。各試管內(nèi)加最適稀釋度抗人球蛋白血清1滴，120g/rpm離心1min或1300g/rpm離心15S后，觀察結(jié)果?，F(xiàn)在是28頁\一共有50頁\編輯于星期三結(jié)果判定主、次管均不凝集且無溶血為配血相合，有凝集或/和溶血為不合?，F(xiàn)在是29頁\一共有50頁\編輯于星期三意外抗體篩選的意義和方法意外抗體是指除ABO血型系統(tǒng)抗體以外的其他抗體，如抗－D、抗－E等。主要經(jīng)輸血或妊娠等免疫刺激產(chǎn)生，人群檢出率為0.3％～2.0％，是引起遲發(fā)性免疫反應(yīng)的主要原因。臨床有意義抗體：引起新生兒溶血病、溶血性輸血反應(yīng)，或者使輸入的紅細(xì)胞存活期減少的、在37℃反應(yīng)的同種異型抗體?，F(xiàn)在是30頁\一共有50頁\編輯于星期三試劑紅細(xì)胞抗原表達(dá)的要求：D,C,E,c,e,M,N,S,s,PI,Le,Lea,Leb,K,k,Fya,Fyb,Jka,Jkb.現(xiàn)在是31頁\一共有50頁\編輯于星期三實(shí)驗(yàn)方法鹽水直接凝集試驗(yàn)：是最簡單的血型血清學(xué)方法，在室溫下立即離心?？蓹z出室溫或低于室溫反應(yīng)的臨床意義不大的抗體如抗－M、抗－N、抗－P、抗－Lea等?？骨虻鞍自囼?yàn)：可檢出絕大部分臨床有意義的不完全抗體，抗球蛋白試劑要有多特異性抗球蛋白抗體，其中含有抗－IgG和抗－C3d。含抗補(bǔ)體的球蛋白也能夠檢出結(jié)合補(bǔ)體的無臨床意義的冷抗體，如抗－I、抗－HI等現(xiàn)在是32頁\一共有50頁\編輯于星期三抗體篩選的意義發(fā)現(xiàn)臨床有意義的抗體減少溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生有利于免疫溶血性疾病的診斷有利于提前選擇和準(zhǔn)備相合的血液確保臨床輸血安全、及時(shí)、有效現(xiàn)在是33頁\一共有50頁\編輯于星期三輸血不良反應(yīng)分類

即發(fā)反應(yīng)遲發(fā)反應(yīng)

免疫性反應(yīng)發(fā)熱反應(yīng)

溶血反應(yīng)

過敏反應(yīng)TA-GVHD

溶血反應(yīng)

輸血后紫癜

輸血相關(guān)的急性肺損傷血細(xì)胞或血漿蛋白同種免疫非免疫性反應(yīng)細(xì)菌污染反應(yīng)

含鐵血黃素沉著癥循環(huán)超負(fù)荷血栓性靜脈炎

空氣栓塞

經(jīng)輸血傳播的傳染病

出血傾向

枸櫞酸中毒

非免疫性溶血反應(yīng)

電解質(zhì)紊亂現(xiàn)在是34頁\一共有50頁\編輯于星期三現(xiàn)在是35頁\一共有50頁\編輯于星期三成分輸血意義提高輸血療效減少和預(yù)防輸血不良反應(yīng)和并發(fā)癥有利于血液各種成分的保存節(jié)約血液資源現(xiàn)在是36頁\一共有50頁\編輯于星期三自身輸血定義

自身輸血（亦稱自體輸血）是指采集某一個(gè)體的血液或/和血液成分并予以保存，或當(dāng)其處于出血狀態(tài)收集其所出血液并作相應(yīng)處理，需要時(shí)將其本人的血液或/和血液成分實(shí)施自我回輸?shù)囊环N輸血治療方法?，F(xiàn)在是37頁\一共有50頁\編輯于星期三自身輸血分類預(yù)存式自身輸血稀釋式自身輸血回收式自身輸血現(xiàn)在是38頁\一共有50頁\編輯于星期三自體輸血的優(yōu)點(diǎn)1.杜絕輸血傳播疾病的危險(xiǎn)如：病毒性肝炎、艾滋病、巨細(xì)胞病毒等。

2.避免紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板以及蛋白質(zhì)等抗原、抗體產(chǎn)生的同種異體免疫反應(yīng)。3.節(jié)省政府開支及患者費(fèi)用，節(jié)約同種血源。解決特殊血型供血。

4.無輸血反應(yīng)及輸血意外。

5.血液新鮮，細(xì)胞活力好，功能強(qiáng)。

6.避免了輸血導(dǎo)致的免疫功能抑制，術(shù)后感染大幅減少。

7.大出血搶救成功率高，血液供應(yīng)及時(shí)。

8.解決宗教信仰人員的用血問題?，F(xiàn)在是39頁\一共有50頁\編輯于星期三預(yù)存式自身輸血

指在某一個(gè)體計(jì)劃或可能需要施行輸血治療前，有計(jì)劃地采集其全血或/和血液成分并作相應(yīng)保存，在