醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)精品單基因病致病基因的鑒定

第十章單基因病致病基因的鑒定南方醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)教研室商璇副教授，教學(xué)秘書，Ph.shang80@1精選課件本章主要內(nèi)容:功能克隆定位克隆基于高通量測序技術(shù)的致病基因的鑒定2精選課件功能克隆：從蛋白質(zhì)著手進(jìn)行基因克隆的策略。定位克隆：在蛋白質(zhì)產(chǎn)物未知的情況下進(jìn)行基因克隆的策略。蛋白酶消化、分離氨基酸序列測定設(shè)計合成寡核苷酸篩選cDNA文庫不同多肽片段家系資料連鎖分析獲得差異片段染色體異常篩選cDNA文庫

克隆全長基因精細(xì)定位消減克隆3精選課件第一節(jié)功能克隆通過基因的功能（編碼蛋白）而不依賴定位的信息來分離基因的策略第一個疾病致病基因通過此策略發(fā)現(xiàn)范例：鐮狀細(xì)胞貧血的β-珠蛋白基因苯丙酮尿癥的苯丙氨酸羥化酶基因4精選課件流程示意圖5精選課件☆FⅧ因子基因的功能克隆功能克隆是從蛋白質(zhì)著手進(jìn)行基因克隆的策略。Ⅷ因子多肽不同多肽片段蛋白酶消化分離氨基酸序列測定設(shè)計合成寡核苷酸篩選cDNA文庫6精選課件第二節(jié)定位克隆基于染色體異常的基因定位連鎖分析確定致病基因7精選課件基于染色體異常的基因定位8精選課件連鎖分析9精選課件確定致病基因突變篩查：在家系中該突變與表型共分離是最主要的證據(jù)表型拯救：有些導(dǎo)致疾病的突變通常引起基因功能的喪失，而且其表型是可逆的。如果從一個患者的細(xì)胞中能夠發(fā)現(xiàn)基因突變的表型，我們就可以檢測轉(zhuǎn)染了候選基因野生型等位基因的表達(dá)載體是否能夠“拯救”突變并恢復(fù)正常的表型建立疾病的小鼠模型：如果能夠在某一家系中確定一個致病基因，但又無法利用更多的無關(guān)患者來驗(yàn)證，通過構(gòu)建小鼠模型來驗(yàn)證。對于功能喪失性突變導(dǎo)致的表型可以通過制作基因敲除（knock-out）小鼠。對于功能獲得性突變導(dǎo)致的表型或者突變效應(yīng)不清楚的表型，可以制作突變基因敲入（knock-in）模型10精選課件11精選課件第三節(jié)基于高通量測序技術(shù)的致病基因的鑒定2005年問世的高通量測序技術(shù)是測序技術(shù)發(fā)展歷程的一個里程碑，使得疾病的研究策略發(fā)生了重大轉(zhuǎn)變。高通量測序技術(shù)的突出優(yōu)勢是測序速度快和測序成本大幅度降低。12精選課件NGS技術(shù)策略全基因組測序全外顯子組測序目標(biāo)區(qū)域測序疾病相關(guān)基因平行測序13精選課件NGS技術(shù)在單基因遺傳病致病基因鑒定中的策略基于序列捕獲技術(shù)，研究者可以在全基因組篩選的基礎(chǔ)上對特定區(qū)域進(jìn)行更深層次的研究由于目標(biāo)區(qū)域縮小，在獲得足量目標(biāo)區(qū)域基因變異信息的前提下，樣品的測序成本也會大幅降低