緩解體力疲勞功能評價(jià)方法

3.23.2人體試食試驗(yàn)：緩解體力疲勞功能試驗(yàn)項(xiàng)目、試驗(yàn)原則及結(jié)果判定.實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)力竭實(shí)驗(yàn)人體試食試驗(yàn)臨床癥狀與體征跑臺試驗(yàn)試驗(yàn)原則動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所列指標(biāo)均為必做項(xiàng)目，動(dòng)物負(fù)重游泳和力竭實(shí)驗(yàn)前，對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行運(yùn)動(dòng)能力篩選。實(shí)驗(yàn)前必須對同批受試樣品進(jìn)行違禁藥物的檢測。運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)與生化指標(biāo)檢測相結(jié)合。在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)對受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察。停止給予受試物一天后進(jìn)行效果觀察。結(jié)果判定動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性，力竭實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性（特指無顯著不利影響） ，可判定該受試樣品緩解體力疲勞功能的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性。（1）試食前后，受試組自身對照，肌酐、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶無不利的顯著性改變；（2）跑臺試驗(yàn)：試食組自身對照，試食后運(yùn)動(dòng)時(shí)間與試食前相比顯著性增加，首次試食后運(yùn)動(dòng)時(shí)間與試食前相比無顯著性差異。滿足（1）和（ 2）可判定該受試樣品具有緩解體力疲勞的功能。緩解體力疲勞功能評價(jià)方法動(dòng)物實(shí)驗(yàn)原理在一定時(shí)間內(nèi)給予一定量的受試樣品， 通過持續(xù)服用， 調(diào)整特定人群機(jī)體狀態(tài)，使其擁有更好的調(diào)節(jié)功能， 該功能包括應(yīng)對潛在需求、 使機(jī)體處于良好狀態(tài)，具有更長時(shí)間作業(yè)能力或在相同作業(yè)時(shí)間內(nèi)不出現(xiàn)更重的疲勞表現(xiàn)。負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)儀器與器材游泳箱（大小約 80cm×50cm×60cm），電子天平、鉛皮。實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物推薦使用雄性小鼠， 6周齡，體重 20-24g。劑量分組及受試樣品給予時(shí)間實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)劑量組和一個(gè)陰性對照組， 一個(gè)空白對照組， 一個(gè)單次中劑量受試組。其中以人體推薦量的 10倍為其中的一個(gè)劑量組，另設(shè)二個(gè)劑量組，必要時(shí)設(shè)陽性對照組。陰性對照組灌胃給予安慰劑。受試樣品給予時(shí)間 30天，必要時(shí)可延長至 45天。實(shí)驗(yàn)步驟末次給受試樣品 24小時(shí)后，將尾根部負(fù)荷 6%體重鉛皮的小鼠臵于游泳箱中游泳。水深不少于 40cm，水溫 30℃±2.0℃，記錄小鼠自游泳開始至力竭時(shí)間，即小鼠負(fù)重游泳時(shí)間。力竭判斷標(biāo)準(zhǔn)為：小鼠沉入水中超過 10秒，且放在平面上無法完成翻正反射。數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定游泳時(shí)間為計(jì)量資料， 采用方差分析， 但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算 F值，F(xiàn)值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性； F值≥F0.05，P≤0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)； 若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的， 改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。（1）受試樣品組負(fù)重游泳時(shí)間明顯長于陰性對照組和空白對照組，且差異有顯著性；（2）單次中劑量組與陰性對照組相比，負(fù)重游泳時(shí)間無顯著差異。同時(shí)滿足（ 1）和（ 2）時(shí)，可判定該實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。力竭實(shí)驗(yàn)儀器與器材全自動(dòng)生化儀，游泳箱，電子天平、鉛皮。實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性SD大鼠，體重 160-200g。劑量設(shè)計(jì)和分組大鼠以人體推薦量的 5倍為基本劑量。其余同 1.2.2.2。實(shí)驗(yàn)步驟末次給受試樣品 24小時(shí)后，采用尾部負(fù)重 3%體重鉛皮的大鼠臵于游泳箱中游泳。水深不少于 50cm，水溫 31℃±1.0℃，當(dāng)大鼠游至連續(xù) 3次沒入水底，每次超過10秒，視為力竭。記錄大鼠自游泳開始至力竭時(shí)間，大鼠腹主動(dòng)脈采血全血，臵 4℃冰箱約 3h，血凝固后 2000rpm離心 15min，取血清備用，測定尿素氮、肌酐、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶活性。數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定血液生化數(shù)據(jù)為計(jì)量資料， 可用方差分析， 但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算 F值，F(xiàn)值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)； 若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的， 改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。（1）受試樣品組與陰性對照組和空白對照組相比，血清尿素氮、肌酐、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶活性應(yīng)無顯著性差異；（2）單次中劑量組與陰性對照組相比，血清尿素氮、肌酐、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶活性應(yīng)無顯著性差異；同時(shí)滿足（ 1）和（ 2）時(shí)，可判定該實(shí)驗(yàn)結(jié)果陰性（特指無顯著不利影響） 。注意事項(xiàng)每一游泳箱一次放入動(dòng)物不宜太多，每只小鼠占用的水面積大多在 300平方厘米以上， 每平方米水面同時(shí)不超過 6只大鼠游泳， 否則互相擠靠， 影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。水溫對小鼠的游泳時(shí)間有明顯的影響，因此要求各組水溫控制一致，每一批實(shí)驗(yàn)動(dòng)物下水之前都應(yīng)測量水溫，水溫以 30-31℃為宜，如果過低可能引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物痙攣，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。鉛皮纏繞松緊應(yīng)適宜。觀察者應(yīng)在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中使每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物四肢保持運(yùn)動(dòng)。如果實(shí)驗(yàn)動(dòng)物漂浮在水面四肢不動(dòng)， 可用木棒在其附近攪動(dòng)。 同時(shí)適時(shí)清除水中雜質(zhì)， 以避免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。不同批的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物因飼養(yǎng)環(huán)境、季節(jié)等原因的變化體質(zhì)上會(huì)出現(xiàn)差異。因此受試樣品組和對照組應(yīng)采用同一批動(dòng)物同時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)、力竭實(shí)驗(yàn)前對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行能力篩選。結(jié)果判定負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性， 力竭實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性， 可判定該受試樣品緩解體力疲勞功能的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性。2人體試食試驗(yàn)2.4.1.32.4.1.3肝、腎功能檢查受試者的選擇標(biāo)準(zhǔn)納入受試者標(biāo)準(zhǔn)：需要較長時(shí)間持續(xù)中等強(qiáng)度作業(yè)或易于疲勞的自愿受試者人群。排除受試者標(biāo)準(zhǔn)：年齡在20歲以下或 45歲以上男性，年齡在 20歲以下或 55歲以上女性及妊娠或哺乳期婦女，過敏體質(zhì)及對本樣品過敏者。已知患有心血管、肺臟（如哮喘等）和（或）代謝疾病（如糖尿病等），精神病患者；心血管、肺臟和（或）代謝疾病的癥狀或體征。經(jīng)常用藥、嗜酒吸煙或戒煙不足 6個(gè)月，血漿膽固醇 ≥200mg/d，l4周內(nèi)參加過其它實(shí)驗(yàn)。正在服用其它營養(yǎng)補(bǔ)充劑、治療藥物或接受其它治療者。未按規(guī)定服用樣品，無法判斷功效，或資料不全等影響功效或安全性判斷者。試驗(yàn)設(shè)計(jì)及分組要求：采用自身對照設(shè)計(jì)。受試者不少于 50例。受試樣品的劑量和使用方法：受試者在試食觀察期間， 按推薦服用方法、 服用量服用受試產(chǎn)品， 連續(xù)給予受試樣品 30天，必要時(shí)可延長至 45天。觀察指標(biāo)安全性指標(biāo)一般狀況包括精神、睡眠、飲食、大小便等試食前后進(jìn)行血、尿、便常規(guī)檢查（肌酐、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶）2.4.1.42.4.1.4心電圖功效性指標(biāo)一般情況詳細(xì)詢問病史， 了解受試者飲食情況、 活動(dòng)量。觀察主要癥狀： 頭痛、眩暈、心悸、耳鳴、失眠、煩躁、腰膝酸軟等。跑臺試驗(yàn)（1）試食前測試在跑步機(jī)上 0坡度，以 8km/小時(shí)速度進(jìn)行跑步運(yùn)動(dòng)，對心率進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測。從55%最大心率開始計(jì)時(shí)，連續(xù)運(yùn)動(dòng) 60分鐘以上，且心率達(dá)到 69%最大心率時(shí)為止，為試食前運(yùn)動(dòng)時(shí)間，并于運(yùn)動(dòng)后采血。其中最大心率 =220-年齡。（2）試食中測試第二次試食 2小時(shí)后，在跑步機(jī)上 0坡度，以 8km/小時(shí)速度進(jìn)行跑步運(yùn)動(dòng)，對心率進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測。從 55%最大心率開始計(jì)時(shí)，連續(xù)運(yùn)動(dòng) 60分鐘以上，且心率達(dá)到 69%最大心率時(shí)為止，為首次試食運(yùn)動(dòng)時(shí)間。其中最大心率 =220-年齡。（2）試食后測試試食結(jié)束 24小時(shí)，在跑步機(jī)上 0坡度，以 8km/小時(shí)速度進(jìn)行跑步運(yùn)動(dòng)，對心率進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測。從 55%最大心率開始計(jì)時(shí)，連續(xù)運(yùn)動(dòng) 60分鐘以上，且心率達(dá)到69%最大心率時(shí)為止，為試食后運(yùn)動(dòng)時(shí)間，并于運(yùn)動(dòng)后采血。其中最大心率 =220-年齡。注意事項(xiàng)跑臺試驗(yàn)中三次測試為測試當(dāng)日同一時(shí)間，以避免時(shí)間周期對運(yùn)動(dòng)時(shí)長產(chǎn)生的影響；跑臺試驗(yàn)中試食前測試 60分鐘以內(nèi)即超過 69%最大心率者不可納入受試者人群；跑臺試驗(yàn)中試食后測試前，先對受試者進(jìn)行安全性觀察和一般性觀察，若受試者不符合測試條件，該受試者不進(jìn)行試食后測試。數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定測得數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，可用 t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。凡自身對照資料可以采用配對t檢驗(yàn)，兩組均數(shù)比較采用成組 t檢驗(yàn)，后者需進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，對非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換， 待滿足正態(tài)方差齊后， 用轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)；若轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)仍不能滿足正態(tài)方差齊要求，改用 t’檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)；但變異系數(shù)太大（如 CV>50%）的資料應(yīng)用秩和檢驗(yàn)。結(jié)果判定（1）試食前后，受試組自身對照，肌酐、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶無不利的顯著性改變；（2）跑臺試驗(yàn)：試食組自身對照，試食后運(yùn)動(dòng)時(shí)間與試食前