中藥制劑分析-含量測定

第四章中藥制劑的含量測定1了解中藥制劑分析的樣品測定處理方法2熟悉含量測定的方法學(xué)考察3掌握中藥制劑常用定量分析方法的運用學(xué)習(xí)目的：第一頁，共121頁。反映其制劑中有效成分或者毒性成分的含量衡量其制劑工藝的穩(wěn)定性和中藥材的質(zhì)量優(yōu)劣第二頁，共121頁。§1樣品的處理樣品處理的主要作用釋放被測組分，制成穩(wěn)定試樣除去雜質(zhì)，純化濃縮試樣形式符合測定的要求樣品處理的主要步驟1.樣品的粉碎2.樣品的提取3.樣品的分離純化第三頁，共121頁。§1樣品的處理樣品的粉碎目的——1.取樣均勻2.提取完全粉碎設(shè)備——粉碎機、研缽、勻漿機※粒度大小合適

樣品粉末的分級（過篩）※防止污染或損失

儀器設(shè)備潔凈

粉塵和較大顆粒的損失。第四頁，共121頁?！?樣品的處理樣品的提取

關(guān)鍵——提取完全溶劑的選擇水、酸水、堿水親水性的有機溶劑：乙醇（酒精）、甲醇（木精）、丙酮親脂性的有機溶劑：石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷

第五頁，共121頁?！?樣品的處理樣品的提取冷浸法：部分測定法（溶劑易揮發(fā)）全部測定法（殘渣需洗滌完全）優(yōu)點：操作簡單，適于熱不穩(wěn)定的樣品，且提取雜質(zhì)少缺點：費時（12-24h）費溶劑（10-50倍）

第六頁，共121頁?！?樣品的處理樣品的提取

回流提取法連續(xù)回流提取法萬應(yīng)膠囊（黃連等）中鹽酸小檗堿測定+HCl-70%乙醇溶液，加熱回流1h保和丸（陳皮等）中橙皮甙測定+甲醇，加熱回流至提取液無色為止第七頁，共121頁?！?樣品的處理樣品的提取超聲提取法原理：超聲波的助溶作用優(yōu)點：操作簡便，提取速度快※需對超聲頻率、提取時間、提取溶媒等進(jìn)行考察※超聲波可能引起供試品成分的改變第八頁，共121頁?！?樣品的處理樣品的提取超臨界流體提取法

（Supercritical-fluidextraction，SFE）超臨界流體——特殊的物質(zhì)狀態(tài)密度-d液體→溶解能力強粘度-氣體→傳質(zhì)快，有利于待測組分的擴散表面張力幾乎為0→浸潤性能好第九頁，共121頁?！?樣品的處理樣品的提取超臨界流體提取法密度受壓力、溫度的影響大→改變對溶質(zhì)的溶解能力加入甲醇、氯仿、苯等改變極性→提取不同極性的成分優(yōu)點：速度快、萃取效率高、方法準(zhǔn)確度高、選擇性較高、節(jié)省溶劑、易于自動化，而且可避免使用易燃，有毒的有機溶劑，能與色譜和光譜等分析儀器直接聯(lián)用。第十頁，共121頁。§1樣品的處理樣品的分離純化

沉淀法復(fù)方益母草口服液中水蘇堿的含量測定利用雷氏鹽（硫氰酸鉻銨）作沉淀劑，在酸性介質(zhì)中可與大部分有機堿生成難溶于水的配合物與其它雜質(zhì)分離。

蛇膽糖漿口服液含有大量糖，可用無水乙醇回流樣品，冷后過濾，除糖以消除其干擾。

第十一頁，共121頁。§1樣品的處理樣品的分離純化蒸餾法適用于具揮發(fā)性的待測組分，如揮發(fā)油、小分子的生物堿、丹皮酚等最常用水蒸氣蒸餾法共水蒸餾法通水蒸氣蒸餾法水上蒸餾法利用鹽析作用，提高蒸餾效果第十二頁，共121頁?！?樣品的處理樣品的分離純化

液-液萃取法直接萃取法萃取劑的選擇親脂性有機溶劑：如苯、氯仿或乙醚弱親脂性的溶劑：如乙酸乙酯、正丁醇等多次萃?。?-4次）調(diào)整水相酸度，提取有機酸、有機堿利用鹽析作用，提高提取率第十三頁，共121頁。§1樣品的處理樣品的分離純化液-液萃取法離子對萃取法BH+（水相）+In-(水相)BH+·In-（水相）

BH+·In-（有機相）適合于高度電離的有機酸、堿化合物的萃取

※水相酸度的控制

※離子對試劑的選擇第十四頁，共121頁。§1樣品的處理樣品的分離純化

色譜法（層析法）分離的原理：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜按操作方式：柱色譜、薄層色譜、紙色譜裝柱方法：濕法裝柱、干法裝柱微柱色譜（固相萃取）

第十五頁，共121頁?！?樣品的處理樣品的分離純化色譜法（層析法）硅膠：酸性吸附劑，適用于中性或酸性成分的層析，強烈保留堿性化合物。洗脫順序：極性小→大氧化鋁：帶有堿性，分離一些堿性中草藥成分，不宜用于醛、酮、醋、內(nèi)酯等類型的化合物分離中性氧化鋁、酸性氧化鋁：適用于酸性成分的分離第十六頁，共121頁?！?樣品的處理樣品的分離純化色譜法（層析法）鍵合相硅膠（C18或ODS）：分開脂溶性和水溶性成分操作程序：①柱的活化；②上樣；③清洗；④洗脫。洗脫順序：極性大→小第十七頁，共121頁?！?樣品的處理樣品的分離純化色譜法（層析法）大孔樹脂分為極性（丙烯酰胺聚合物）和非極性（苯乙烯和二乙烯苯的共聚物）型非極性型（XAD-2等）：分開脂溶性和水溶性成分※使用前需要用有機溶劑除去雜質(zhì)，有時還需用酸、堿清洗

第十八頁，共121頁。§1樣品的處理樣品的分離純化色譜法（層析法）聚酰胺：與溶質(zhì)形成氫鍵而產(chǎn)生吸附作用，常用于含酚、酸、醌類藥物樣品液的凈化分離。硅藻土、纖維素：以水基質(zhì)液作為固定相，與水不混溶的有機溶劑為流動相的分配色譜洗脫順序：極性小→大第十九頁，共121頁?！?樣品的處理樣品的分離純化色譜法（層析法）離子交換樹脂：用于除去樣品中的離子及萃取可離解化合物(弱酸、弱堿藥物)活性炭：非極性吸附劑使用前需要先用稀鹽酸洗滌，其次用乙醇洗，再以水洗凈，于80℃干燥分開水溶性芳香族物質(zhì)與脂肪族物質(zhì)，單糖與多糖，氨基酸與多肽第二十頁，共121頁?！?樣品的處理樣品的分離純化固相微萃?。⊿PME）集萃取、濃縮、進(jìn)樣于一體的樣品前處理新方法第二十一頁，共121頁?！?樣品的處理樣品的分離純化消化法——測定中藥制劑中的無機元素濕法消化硝酸—高氯酸法：適用于血，尿、組織等生物樣品和含動植物藥制劑的破壞※對含氮雜環(huán)類有機物破壞不夠完全。

硝酸—硫酸法※與硫酸形成不溶性硫酸鹽的金屬離子的測定，不宜采有此法。硫酸—硫酸鹽法：常用于含砷或銻的有機樣品的破壞，破壞后得到三價砷或銻。

第二十二頁，共121頁?！?樣品的處理樣品的分離純化消化法——測定中藥制劑中的無機元素濕法消化硫酸—硫酸鹽法：常用于含砷或銻的有機樣品的破壞，破壞后得到三價砷或銻。

干法消化供試品灰分※控制溫度在420℃以下※不適用于含易揮發(fā)性金屬（如汞、砷等，）有機樣品的破壞。灼燒灰化(+NaCO3/MgO)第二十三頁，共121頁?！?含量測定方法的驗證方法學(xué)考察提取條件的考察測定方法與條件的選擇定量分析方法驗證第二十四頁，共121頁?！?含量測定方法的驗證

定量分析方法驗證

準(zhǔn)確度、精密度線性與范圍專屬性、檢測限、定量限耐用性第二十五頁，共121頁。§2含量測定方法的驗證準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度的高低用誤差大小表示。

是指以測得結(jié)果與真實值之間的接近程度。常用回收率試驗來表示。（加樣回收率）A為供試品所含被測成分量B加入對照品量C為實際測得值第二十六頁，共121頁?！?含量測定方法的驗證準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度的要求

線性范圍內(nèi)進(jìn)行操作

回收率要求

中藥制劑95%-105%回收率的RSD≤3%

對于制劑過程復(fù)雜回收率不得小于90%

生物樣品分析85%-115回收率的RSD≤5%

第二十七頁，共121頁。§2含量測定方法的驗證精密度表示在相同條件下,同一試樣的重復(fù)測定值間的符合程度。

精密度高低常用S或RSD表示。標(biāo)準(zhǔn)偏差相對標(biāo)準(zhǔn)偏差第二十八頁，共121頁?！?含量測定方法的驗證精密度重復(fù)性同一濃度樣品6次，進(jìn)行評價。

不同濃度3個，每個樣品3次，進(jìn)行評價。2.中間精密度考察隨機變動因素的影響。變動因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備。（同一實驗室）第二十九頁，共121頁?！?含量測定方法的驗證精密度3.重現(xiàn)性不同實驗室不同分析人員測定結(jié)果的精密度采用法定標(biāo)準(zhǔn)分析方法時，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗。如建立藥典分析方法時重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說明中。4.數(shù)據(jù)要求報告S、RSD。第三十頁，共121頁?！?含量測定方法的驗證專屬性是指在樣品中存在干擾成分的情況下，分析方法能夠準(zhǔn)確，專一地測定分析物的能力。線性范圍耐用性第三十一頁，共121頁?！?常用定量分析方法

重量分析法：揮發(fā)法、萃取法和沉淀法酸堿滴定法滴定分析法沉淀滴定法配位滴定法氧化還原滴定法

化學(xué)分析法適用于含量較高的成分及無機成分的測定第三十二頁，共121頁?！?常用定量分析方法化學(xué)分析法重量分析揮發(fā)法：如水分測定萃取法：如冰片散中冰片的含量測定沉淀法：如苦參片中苦參總堿的含量測定第三十三頁，共121頁?！?常用定量分析方法化學(xué)分析法滴定分析酸堿滴定法：

測定生物堿、有機酸、內(nèi)酯類

沉淀滴定法銀量法：生物堿的氫鹵酸鹽及有機鹵化物四苯硼鈉法：+生物堿→白色沉淀亞鐵氰化鉀法第三十四頁，共121頁。§3常用定量分析方法化學(xué)分析法滴定分析配位滴定法（EDTA法和硫氰酸銨法）：

測定鞣質(zhì)、生物堿及含Ca2+、Mg2+、Fe3+、Hg2+等礦物類制劑的含量氧化還原滴定法：酚類、糖類及礦物藥中Fe、As等第三十五頁，共121頁?！?常用定量分析方法紫外－可見分光光度法第三十六頁，共121頁?！?常用定量分析方法紫外－可見分光光度法吸收系數(shù)法

A=ECL 對照品比照法對照品溶液濃度應(yīng)與供試品濃度接近（100±10％）計算分光光度法等吸收點法，系數(shù)倍率法，三波長法，導(dǎo)數(shù)光譜法第三十七頁，共121頁?！?常用定量分析方法紫外－可見分光光度法吸收系數(shù)法根據(jù)Beer定律A=εcl，若l和吸光系數(shù)ε或已知，即可根據(jù)測得的A求出被測物的濃度。例:小檗堿溶液在345nm處的為728，現(xiàn)測的某小檗堿溶液在345nm出的吸收度為0.5824，計算該小檗堿溶液的濃度。

第三十八頁，共121頁?！?常用定量分析方法紫外－可見分光光度法工作曲線法從標(biāo)準(zhǔn)品吸光度-濃度曲線求得樣品溶液的濃度。

第三十九頁，共121頁?！?常用定量分析方法紫外－可見分光光度法工作曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL，分別置10mL量瓶中，各加50%甲醇至5mL，加5%亞硝酸鈉溶液0.3mL，搖勻，放置6分鐘，加10%硝酸鋁溶液0.3mL，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液4mL，再加50%甲醇至刻度，搖勻。以相應(yīng)的溶液為空白。照紫外-可見分光光度法（附錄VA），在510nm的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

第四十頁，共121頁?！?常用定量分析方法紫外－可見分光光度法對照品對照法對照品溶液濃度應(yīng)與供試品濃度接近（100±10％）在一定線性范圍內(nèi)根據(jù)Lambert-Beer定律溶液的濃度和吸光度存在以下關(guān)系

第四十一頁，共121頁。對照品對照法例1：某種藥制劑中有效成分的365nm=766，在相同條件下分析某廠生產(chǎn)的該制劑的365nm=759，試計算其含量。例2：水蘇堿在510nm處有最大吸收，現(xiàn)用標(biāo)準(zhǔn)品制的0.002%的水蘇堿標(biāo)準(zhǔn)溶液,A510nm=0.502，某水蘇堿供試品溶液在相同條件下測的A510nm=0.626，試計算該供試品溶液中水蘇堿的含量。

§3常用定量分析方法第四十二頁，共121頁。對照品對照法例:急支糖漿中麻黃堿的含量測定標(biāo)準(zhǔn)液的配制：精密量取麻黃堿對照液（0.1mg/ml）2.5mL置分液漏斗中，精密加入緩沖液25ml，再精密加入氯仿25mL和溴麝香草酚藍(lán)染料2.5mL，搖勻，分層。取氯仿層，即得。樣品液的制備：精密量取急支糖漿2.5mL置分液漏斗中，精密加入緩沖液25ml，再精密加入氯仿25mL和溴麝香草酚藍(lán)染料2.5mL，搖勻，分層。取氯仿層，即得。在410nm處測定六次取平均值，得A樣=0.428，A標(biāo)=0.385，試計算本品中麻黃堿的含量。

第四十三頁，共121頁?！?常用定量分析方法紫外－可見分光光度法計算分光光度法雙波長分光光度法（等吸收點法、系數(shù)倍率發(fā)）三波長法導(dǎo)數(shù)光譜法一般應(yīng)用于供試品溶液中含有2中或2種以上的組分的含量測定。差示光譜法

利用比樣品濃度稍低的標(biāo)準(zhǔn)品作為空白,進(jìn)行測定及計算的方法.第四十四頁，共121頁。§3常用定量分析方法紫外－可見分光光度法計算分光光度法應(yīng)用實例：銀黃口服液由金銀花和黃芩的提取物組成，其主要成分綠原酸和黃芩苷在紫外區(qū)均有吸收，且吸收峰相互重疊干擾，經(jīng)測定綠原酸在278nm和322nm處有等吸收點，且黃芩苷在278nm處有最大吸收。現(xiàn)測的某銀黃口服液A278nm=0.621，A322nm=0.315，黃芩苷278nm=631.20，322nm=368.40。試計算該銀黃口服液的黃芩苷的含量。第四十五頁，共121頁。§3常用定量分析方法紫外－可見分光光度法應(yīng)用實例：差示光譜法測定含牛黃的中成藥中膽紅素的含量1.膽紅素具有高度共軛體系結(jié)構(gòu)，在波長453nm處為最大吸收，在可見光照射下膽紅素易氧化成藍(lán)色產(chǎn)物，在453nm處吸收度顯著降低。2.選用日光下照射30分鐘或在紅外燈下照射4小時測ΔA值。

第四十六頁，共121頁?！?常用定量分析方法紫外－可見分光光度法應(yīng)用實例：差示光譜法測定含牛黃的中成藥中膽紅素的含量3.精密稱取膽紅素2mg于50ml棕色量瓶中，加入適量冷(10℃以下)的酸性氯仿(150ml氯仿中含0.05ml濃鹽酸)，于冰水浴中超聲振蕩20分鐘，稀釋至刻度，制成儲備液。準(zhǔn)確吸取0，4、0．8、1，2、1.6、2.0ml儲備液于10ml量瓶中，加冷酸性氯仿至刻度，測其光照前后在453nm處的吸收度。回歸方程為ΔA=0.0804C+0.00570(r=0.9995)。

注釋：除光照反應(yīng)外，其余操作均需避光

第四十七頁，共121頁?！?常用定量分析方法紫外－可見分光光度法應(yīng)用實例：差示光譜法測定含牛黃的中成藥中膽紅素的含量4.分別制得六應(yīng)丸、六神丸、牛黃消炎丸的空白樣品對照液，在453nm處測得各自光照前后的A值，計算ΔA。實驗表明三種成藥ΔA值為零或幾乎為零。說明其他干擾組分在以上光照條件下不干擾膽紅素的測定。

第四十八頁，共121頁?！?常用定量分析方法紫外－可見分光光度法應(yīng)用實例：差示光譜法測定含牛黃的中成藥中膽紅素的含量5.精密稱取六應(yīng)丸、六神丸各60mg，牛黃消炎丸120mg置10ml帶塞的試管中，準(zhǔn)確加入冷酸性氯仿10ml，冰水浴中振蕩20分鐘，過濾，棄去初濾液，測續(xù)濾液光照前后的A值，算出ΔA值。由回歸方程算得樣品的含量。本法加樣回收率：六應(yīng)丸為98.8％，RSD=1.8％；六神丸為100.7％，RSD=2.2％；牛黃消炎丸為93.0％，RSD＝1.1％。

第四十九頁，共121頁。§3常用定量分析方法紫外－可見分光光度法紫外光譜法中對儀器和試劑的要求（1）儀器的校正和檢定：包括波長精度、吸收度的準(zhǔn)確性、雜散光等。（2）對溶劑的要求：用1cm石英池盛裝溶劑，以空氣為空白，測定其吸光度，溶劑和吸收池的吸光度在220nm—240nm范圍內(nèi)不得超過

0.40；在241nm—250nm范圍內(nèi)不得超過

0.20；在251nm—300nm的范圍內(nèi)不得超過

0.10；300nm以上不得超過0.05。第五十頁，共121頁。0.575光源單色器吸收池檢測器信號處理及顯示§3常用定量分析方法紫外－可見分光光度法紫外分光光度計基本構(gòu)造第五十一頁，共121頁?！?常用定量分析方法薄層掃描法（TLCS）

薄層掃描法是指薄層色譜斑點的色譜掃描，薄層色譜掃描是指固定波長，斑點移動，測定A-l或F-l曲線。根據(jù)薄層掃描的測定方式分為薄層吸收掃描法和薄層熒光掃描法二種方法。第五十二頁，共121頁?！?常用定量分析方法薄層掃描法（TLCS）薄層吸收掃描法

光源：鎢燈和氘燈；

靈敏度：在200-800nm波長范圍內(nèi)選擇合適波長進(jìn)行測定，其靈敏度可達(dá)ng級；

適用范圍：適用于在可見、紫外區(qū)有吸收的物質(zhì)，及通過色譜前或色譜后衍生成上述化合物的樣品組分。

第五十三頁，共121頁?！?常用定量分析方法薄層掃描法（TLCS）

1.薄層吸收掃描法

光源：鎢燈和氘燈；

靈敏度：在200-800nm波長范圍內(nèi)選擇合適波長進(jìn)行測定，其靈敏度可達(dá)ng級；

適用范圍：適用于在可見、紫外區(qū)有吸收的物質(zhì)，及通過色譜前或色譜后衍生成上述化合物的樣品組分。

第五十四頁，共121頁?！?常用定量分析方法薄層掃描法（TLCS）

2.薄層熒光掃描法

光源：氙燈或汞燈。

靈敏度：最低可測到10-50pg。

適用范圍：適合于本身具有熒光或經(jīng)過適當(dāng)處理后可產(chǎn)生熒光的物質(zhì)的測定。

第五十五頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）

基本原理

氣相色譜法（GC）是將汽化后的試樣由載氣（流動相）帶入色譜柱，根據(jù)各組分在流動相和固定相間作用的不同而分離，并隨載氣依次流出氣譜柱，經(jīng)檢測器檢測，利用保留值進(jìn)行定性，色譜峰面積或峰高進(jìn)行定量的分析方法。

第五十六頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）

基本原理

GC分類

1.按固定相分氣-固色譜氣-液色譜

2.按分離原理分吸附色譜分配色譜

3.按柱子粗細(xì)分填充柱色譜毛細(xì)管柱色譜第五十七頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）基本概念

色譜峰：由電信號強度對時間作圖所繪制的曲線。（正態(tài)分布曲線）

不正常的色譜峰：前延峰、拖尾峰

常用定量參數(shù)：峰高、峰面積

常用定性參數(shù)：峰位

用于衡量柱效：峰寬

第五十八頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）基本概念

基線：在操作條件下，沒有組分流出時的流出曲線。橫軸直線。

保留值（保留時間tR和保留體積VR）

保留時間tR保留體積VR

死時間t0死體積V0

調(diào)整保留時間t`R調(diào)整保留體積V`R

第五十九頁，共121頁?！?常用定量分析方法第六十頁，共121頁。§3常用定量分析方法氣相色譜法（GC）塔板理論塔板理論將色譜柱看作一個分餾塔，待分離組分在分餾塔的塔板間移動，在每一個塔板內(nèi)組分分子在固定相和流動相之間形成平衡，隨著流動相的流動，組分分子不斷從一個塔板移動到下一個塔板，并不斷形成新的平衡。一個色譜柱的塔板數(shù)越多，則其分離效果就越好

第六十一頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）柱效指標(biāo)理論塔板數(shù)n及理論塔板高度H衡量色譜柱分離效果的參數(shù)理論塔板數(shù)n。105-106

在一定高度內(nèi)，組分可以在兩項中達(dá)到分配平衡，次高度為理論塔板高度。

第六十二頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）柱效指標(biāo)理論塔板數(shù)n及理論塔板高度H

第六十三頁，共121頁。實例：

在柱長為2m的5%的阿皮松柱、柱溫為1000C，記錄紙速度為2.0cm/min的色譜條件下，測定苯的保留時間為1.5min，半峰寬為0.20cm，求理論塔板數(shù)和理論塔板高度。§3常用定量分析方法第六十四頁，共121頁。解：§3常用定量分析方法第六十五頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）柱效指標(biāo)分離度的計算R=0.8：兩峰的分離程度可達(dá)89%；R=1.0：分離程度98%；R=1.5：達(dá)99.7%（相鄰兩峰完全分離的標(biāo)準(zhǔn)）

第六十六頁，共121頁。§3常用定量分析方法例：已知物質(zhì)A和B在一根30.0cm長的柱上的保留時間分別為16.40和17.63min，不被保留組分通過該柱的時間為1.30min，峰底寬為1.11和1.21min，試計算（1）柱的分離度（2）柱的平均塔板數(shù)（3）塔板高度（4）達(dá)1.5分離所需柱長第六十七頁，共121頁。第六十八頁，共121頁。§3常用定量分析方法氣相色譜法（GC）系統(tǒng)適應(yīng)性試驗1.n※不得低于各種品種的最小理論塔板數(shù)，柱長，柱填充、載體性能等有影響。2.R※R≥1.5（兩峰完全分離）3.重復(fù)性※RSD≤2.0％(n=5)4.拖尾因子T=W0.05h/2d1(d1峰極大至峰前沿之間的距離)※1.05≥T≥0.95

第六十九頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）實驗條件的選擇適用于測定揮發(fā)油及其它揮發(fā)性組分：冰片、桉葉素、樟腦、丁香酚、龍腦等。中藥制劑含水量、含醇量

第七十頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）實驗條件的選擇適用范圍揮發(fā)油及其它揮發(fā)性組分：冰片、桉葉素、樟腦、丁香酚、龍腦等。中藥制劑含水量、含醇量

第七十一頁，共121頁?！?常用定量分析方法色譜柱組成一、氣液分配色譜柱二、氣固吸附色譜柱柱管填充劑填充柱：2~4米柱長，2~6mm內(nèi)徑毛細(xì)管柱：幾十米~幾百米柱長

0.1~0.5mm內(nèi)徑固體吸附劑——氣-固吸附色譜柱載體+固定液——氣-液分配色譜柱氣相色譜法（GC）實驗條件的選擇

第七十二頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）實驗條件的選擇一、固定相的選擇氣-液分配色譜柱（1）載體的選擇比表面積大（多涂漬固定液）無吸附性（不吸附被測組分）化學(xué)惰性（不與固定液發(fā)生化學(xué)反應(yīng)）熱穩(wěn)定性好一定的機械強度一般采用具有一定粒度的多孔性固體微粒

第七十三頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）實驗條件的選擇一、固定相的選擇氣-液分配色譜柱（2）固定液的選擇操作柱溫下固定液呈液態(tài)（易于形成均勻液膜）操作條件下固定液熱穩(wěn)定性和化學(xué)穩(wěn)定性好固定液的蒸氣壓要低（柱壽命長，檢測本底低）固定液對樣品應(yīng)有較好的溶解度及選擇性

第七十四頁，共121頁。§3常用定量分析方法氣相色譜法（GC）實驗條件的選擇一、固定相的選擇氣-液分配色譜柱（3）固定液的分類化學(xué)分類法（官能團(tuán)分類，烴類、硅氧烷類、脂類、醇類、有機皂土、液晶等）極性分類法（極性、非極性）

第七十五頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）實驗條件的選擇一、固定相的選擇氣-液分配色譜柱（3）固定液的選擇按相似相溶原則選擇按組分性質(zhì)的主要差別選擇

第七十六頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）按相似相溶原則選擇固定液與被測組分極性“相似相溶”，K大，選擇性好。非極性組分—選非極性固定液，按沸點順序出柱，低沸點的先出柱中等極性組分—選中等極性固定液，基本按沸點順序出柱強極性組分—選極性固定液按極性順序出柱，極性強的后出柱第七十七頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）按組分性質(zhì)的主要差別選擇組分以沸點差別為主—選非極性固定液按沸點順序出柱、沸點低的先出柱組分的極性差別為主—選極性固定液按極性強弱出柱、極性弱的先出柱例：苯（80.10C），環(huán)己烷（80.70C）選非極性柱——分不開；選中強極性柱——較好分離，環(huán)己烷先出柱第七十八頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）實驗條件的選擇一、固定相的選擇氣-固分配色譜柱（1）固定相的選擇吸附劑：活性炭（非極性）硅膠，AL2O3（極性，吸附力強）分子篩：吸附+分子篩高分子多孔微球：GDX有機合成高分子聚合物、吸附+分配機制

第七十九頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）實驗條件的選擇二、柱溫的選擇根據(jù)樣品的沸點選擇

沸點℃固定液配比%柱溫℃高（300-400）低1-5200-250200-3005-10150-180100-20010-15平均2/3低高15-2550以下第八十頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）實驗條件的選擇三、載氣的選擇柱效、柱壓、靈敏度20-80mL/min低流速氮氣*高流速氫氣氦氣熱導(dǎo)檢測器氫氣氦氣氫焰檢測器、電子捕獲檢測器氮氣

第八十一頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）實驗條件的選擇四、其他條件氣化室（進(jìn)樣口）溫度：不超過沸點50℃高于柱溫30-50℃檢測室溫度：高于柱溫30℃左右進(jìn)樣量：

氣體0.1-1mL液體0.1-1μL

第八十二頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）實驗條件的選擇五、檢測器熱導(dǎo)檢測器（TCD）氫焰離子化檢測器（FID）氮磷檢測器（NPD）電子捕獲檢測器（ECD）

第八十三頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）定量分析方法峰面積的測量正常峰不對稱峰自動求和（自動積分儀或色譜工作站）：直接給出A，h，W1/2

第八十四頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）定量分析方法定量校正因子

第八十五頁，共121頁。§3常用定量分析方法氣相色譜法（GC）定量分析方法定量校正因子絕對校正因子

第八十六頁，共121頁。§3常用定量分析方法氣相色譜法（GC）定量分析方法定量校正因子相對校正因子

第八十七頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）定量分析方法常用的定量分析方法歸一化法外標(biāo)法校正因子內(nèi)標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法

第八十八頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）定量分析方法常用的定量分析方法歸一化法前提：試樣中所有組分都產(chǎn)生信號并能檢出色譜峰依據(jù)：組分含量與峰面積成正比

第八十九頁，共121頁。§3常用定量分析方法氣相色譜法（GC）定量分析方法常用的定量分析方法外標(biāo)法

以待測組分純品為對照物，與試樣中待測組分的響應(yīng)信號相比較進(jìn)行定量的方法a工作曲線法b外標(biāo)一點法c外標(biāo)兩點法

第九十頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）定量分析方法常用的定量分析方法外標(biāo)法

b外標(biāo)一點法一種濃度對照物對比樣品中待測組分含量前提：截距為0，對照品濃度與待測組分濃度接近

第九十一頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）定量分析方法常用的定量分析方法外標(biāo)法

c外標(biāo)兩點法

前提：選取兩點對照品的濃度，需涵蓋待測濃度

外標(biāo)法特點：

1）不需要校正因子，不需要所有組分出峰

2）結(jié)果受進(jìn)樣量、進(jìn)樣重復(fù)性和操作條件影響大→每次進(jìn)樣量應(yīng)一致，否則產(chǎn)生誤差第九十二頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）實例麝香祛痛搽劑中樟腦的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以聚乙二醇(PEG200為固定相，涂布濃度為10％；柱溫為程序升溫80～160℃；初溫保持4min后，每分鐘升高4℃，終溫保持16min。理論塔板數(shù)按樟腦峰計算應(yīng)不低于13000。

第九十三頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）1．對照品溶液的制備精密稱取樟腦對照品適量，加稀乙醇制成每1ml含1mg的溶液，即得。2．供試品溶液的制備精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，即得。3．測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入氣相色譜儀，測得對照品峰面積為1200，供試品峰面積為1600。試計算本品中樟腦的含量。

第九十四頁，共121頁。§3常用定量分析方法氣相色譜法（GC）定量分析方法常用的定量分析方法校正因子內(nèi)標(biāo)法

校正因子的計算取內(nèi)標(biāo)物和待測組分的對照液進(jìn)樣測定A取含有內(nèi)標(biāo)物的供試品溶液進(jìn)樣測定A

第九十五頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法川貝枇杷糖漿中薄荷腦的含量測定

[含量測定]

照氣相色譜（附錄VIE）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

改良聚乙二醇毛細(xì)管柱（柱長30m，內(nèi)徑0.32mm，膜厚度0.25um），柱溫110℃；進(jìn)樣口溫度為250℃；檢測器溫度為250℃；分流比為25:1。理論板數(shù)按萘峰計算應(yīng)不低于5000。

第九十六頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法校正因子測定

精密稱取萘適量，加環(huán)已烷制成每1ml含15mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取薄荷腦對照品75mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加環(huán)已烷稀釋至刻度，搖勻。精密量取1ml，置20ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加環(huán)已烷至刻度，搖勻。吸取1ul，注入氣相色譜儀，計算校正因子。

第九十七頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法測定法

精密量取本品50ml，照揮發(fā)油測定法（附錄XD）試驗，……(加環(huán)已烷回流提取），合并環(huán)已烷液，置20ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加環(huán)已烷至刻度，搖勻。吸取1ul，注入氣相色譜儀，測定，即得。本品每1ml含薄荷腦（C10H20O）應(yīng)不得少于0.20mg。

第九十八頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）實例十滴水軟膠囊中樟腦含量的測定1．色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以聚乙二醇(PEG)一20M為固定相．涂布含量為10％，柱溫150℃。理論塔板數(shù)按樟腦峰計算應(yīng)不低于2000．樟腦峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)大于2。

第九十九頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）實例十滴水軟膠囊中樟腦含量的測定2.校正因子測定精密稱取樟腦對照品50mg．置10ml量瓶中。精密加入薄荷腦內(nèi)標(biāo)物質(zhì)50mg，加無水乙醇至刻度，搖勻．精密量取1～2μ1．注入氣相色譜儀，計算校正因子。

測得樟腦的峰面積為1800，薄荷腦峰面積為1500.

第一百頁，共121頁?！?常用定量分析方法氣相色譜法（GC）實例

3．測定法取裝量差異項下的內(nèi)容物，混勻，取O.8g，精密稱定，置具塞試管中，用無水乙醇提取5次，每次4ml，分取乙醇提取液，合并，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，精密加入薄荷腦125mg，使溶解，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取1～2μ1，注入氣相色譜儀，測定，得薄荷腦峰面積為2400,樟腦峰面積為1800。試計算本品中樟腦的含量。第一百零一頁，共121頁。§3常用定量分析方法氣相色譜法（GC）定量分析方法標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法精密稱量被測組分的對照品，配置成適當(dāng)濃度的對照品溶液，取一定量，精密加入到供試品溶液中，依據(jù)內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法測定含量，再扣除加入對照品的含量，即得。

第一百零二頁，共121頁。§3常用定量分析方法氣相色譜法（GC）實例十滴水軟膠囊中樟腦含量的測定十滴水軟膠囊由樟腦、干姜、大黃、小茴香、肉桂、辣椒、桉油等七味中藥制成，樟腦是其主成分之一，能升華，故可采用氣相色譜法，以樟腦為對照品，薄荷腦為內(nèi)標(biāo)物，用內(nèi)標(biāo)校正因子法測定其含量。

第一百零三頁，共121頁。§3常用定量分析方法高效液相色譜法（HPLC）特點：高柱效、高靈敏度、高選擇性、分析速度快及應(yīng)用范圍廣適用于測定 揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的高分子化合物及離子型化合物，如蛋白質(zhì)、氨基酸、生物堿、甾體、類脂、核酸、維生素及無機鹽類。第一百零四頁，共121頁?！?常用定量分析方法高效液相色譜法（HPLC）

基本原理以氣相色譜為基礎(chǔ)，在經(jīng)典液相色譜實驗和技術(shù)基礎(chǔ)上建立的一種液相色譜法。

第一百零五頁，共121頁?！?常用定量分析方法項目HPLCLC柱長/cm10-25100-200內(nèi)徑/mm2-1010-25壓力/MP2-200.001-0.1柱效/n/m2*103-5*1032-50進(jìn)樣量/g10-6-10-21-10分離、分析時間/h0.05-1.01-20裝置自動化手工檢測方法檢測器檢測收集后定性定量第一百零六頁，共121頁?！?常用定量分析方法項目HPLCGC進(jìn)樣方式溶液氣化或裂解流動相液態(tài)氣態(tài)壓力/MP2-200.1-0.5柱溫常溫常溫-300℃分離原理吸附、分配、離子交換、化學(xué)鍵合吸附、分配應(yīng)用范圍大部分物質(zhì)易揮發(fā)、熱穩(wěn)定第一百零七頁，共121頁?！?常用定量分析方法高效液相色譜法（HPLC）

實驗條件的選擇分類一、液固吸附色譜法（LSC）二、液液分配色譜法（LLC）三、化學(xué)鍵合相色譜法（BPC）

第一百零八頁，共121頁。§3常用定量分析方法高效液相色譜法（HPLC）一、液固吸附色譜法（LSC）

固定相：硅膠、薄膜型氧化鋁、聚酰胺、高分子多孔小球等。

流動相：甲醇、乙醚、苯、乙腈、乙酸乙酯、烷烴等。

出柱順序：強極性組分后出柱，弱極性組分先出柱。

第