常規(guī)培養(yǎng)基的制作

常規(guī)培養(yǎng)基制作

疾控中心歲源E-mail：Tel：QQ：37316315現在是1頁\一共有81頁\編輯于星期四第一節(jié)基本理論培養(yǎng)基的定義：培養(yǎng)基是按照微生物生長繁殖或積累代謝產物所需要的各種營養(yǎng)物質，由人工配制而成的營養(yǎng)基質，它專供微生物培養(yǎng)、分離、鑒別、研究和保存用。培養(yǎng)基的用途：主要用于繁殖及分離純化細菌、傳代和保存菌種、鑒別細菌種屬、研究細菌生理及生化特性、制造菌苗、疫苗和其他微生物制劑等?，F在是2頁\一共有81頁\編輯于星期四一、培養(yǎng)基的分類1.按用途分類：基礎培養(yǎng)基、營養(yǎng)培養(yǎng)基、增菌培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、顯色培養(yǎng)基現在是3頁\一共有81頁\編輯于星期四基礎培養(yǎng)基含細菌所需最基本營養(yǎng)成分，可供大多數細菌生長。常用的如含適量蛋白胨、氯化鈉、磷酸鹽、的營養(yǎng)肉湯和營養(yǎng)瓊脂。營養(yǎng)培養(yǎng)基基礎培養(yǎng)基再加入一些其他營養(yǎng)成分，如葡萄糖、血液、血清、酵母浸膏、生長因子等，以滿足營養(yǎng)要求較高的細菌生長繁殖所需要的營養(yǎng)?，F在是4頁\一共有81頁\編輯于星期四增菌培養(yǎng)基多為液體培養(yǎng)基，主要目的是增加標本中目的菌數量，以提高目的菌檢出率。選擇性培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入抑制物質，使之具有選擇性，有利于目的菌檢出和識別，而抑制其他非目的菌生長或者使其生長不佳?，F在是5頁\一共有81頁\編輯于星期四加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基：分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基：分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基：分離固氮菌不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基：分離自養(yǎng)型微生物加入氨基嘌呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培養(yǎng)基：分離雜交瘤細胞現在是6頁\一共有81頁\編輯于星期四鑒別培養(yǎng)基利用各種細菌分解糖類和蛋白質的能力及其代謝產物的不同，即生化反應能力不同，在培養(yǎng)基中加入特定的作用底物和指示劑，以此來區(qū)別各種細菌。主要用于檢查各種細菌的生化反應。如伊紅—美藍培養(yǎng)基可鑒別大腸桿菌，其代謝產物有機酸與伊紅—美藍結合，使菌落呈現綠色金屬現在是7頁\一共有81頁\編輯于星期四大腸桿菌EMB平板現在是8頁\一共有81頁\編輯于星期四沙門氏菌BS瓊脂現在是9頁\一共有81頁\編輯于星期四沙門氏菌XLD（木糖賴氨酸去氧膽酸鹽）瓊脂現在是10頁\一共有81頁\編輯于星期四顯色培養(yǎng)基細菌在生長繁殖過程中可合成和釋放某些特異性酶，按酶的特性，選用相應底物和指示劑，將其配制在相關培養(yǎng)基中。根據細菌反應后出現的菌落顏色變化，確定待分離可疑菌株，有助于細菌快速診斷?，F在是11頁\一共有81頁\編輯于星期四副溶血性弧菌現在是12頁\一共有81頁\編輯于星期四副溶API20E現在是13頁\一共有81頁\編輯于星期四2.按物理性狀分類液體培養(yǎng)基流體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基現在是14頁\一共有81頁\編輯于星期四液體培養(yǎng)基：不含凝固劑，利于菌體的快速繁殖、代謝和積累產物流體培養(yǎng)基：含0.05-0.07%瓊脂粉，可降低空氣中氧進入培養(yǎng)基的速度，利于一般厭氧菌的生長繁殖半固體培養(yǎng)基：含0.2-0.8%瓊脂粉，多用于細菌的動力觀察、菌種傳代保存及貯運細菌標本材料；固體培養(yǎng)基：含1.5-2%瓊脂，用于細菌的分離、鑒定、菌種保存及細菌疫苗制備等多方面現在是15頁\一共有81頁\編輯于星期四液體培養(yǎng)基現在是16頁\一共有81頁\編輯于星期四固體培養(yǎng)基現在是17頁\一共有81頁\編輯于星期四半固體培養(yǎng)基現在是18頁\一共有81頁\編輯于星期四液體培養(yǎng)基：主要用于工業(yè)生產；固體培養(yǎng)基：主要用于分離、鑒定等；半固體培養(yǎng)基：主要用于觀察、保藏菌種?，F在是19頁\一共有81頁\編輯于星期四3.按成分分類合成培養(yǎng)基由化學物質和成分已知的各種物質所組成，可以是無機鹽和有機物質等。天然培養(yǎng)基由化學物質不完全清楚或各批物質很難一致的天然物質所組成，如蛋白胨、牛肉膏、血液、馬鈴薯等。半合成培養(yǎng)基由不明化學成分的天然物質和已知化學成分的物質組成現在是20頁\一共有81頁\編輯于星期四天然培養(yǎng)基化學成分不明確，主要用于工業(yè)生產；合成培養(yǎng)基化學成分明確，主要用于分類、鑒定?，F在是21頁\一共有81頁\編輯于星期四天然培養(yǎng)基：優(yōu)點：取材便利、營養(yǎng)豐富、配制簡便；缺點：營養(yǎng)成分難以控制、實驗結果的重復性較差。天然培養(yǎng)基如培養(yǎng)細菌的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；血清、血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸液）?，F在是22頁\一共有81頁\編輯于星期四合成培養(yǎng)基:優(yōu)點：化學成分及其含量明確、實驗的可重復性好；缺點：配制繁瑣、成本較高?，F在是23頁\一共有81頁\編輯于星期四二、培養(yǎng)基的主要成分及其作用1.營養(yǎng)物質：細菌在生長繁殖過程中所需要的營養(yǎng)成分，因細菌種類不同而異，有的對營養(yǎng)要求不高，僅需碳源、氮源即可；有的則要求較高，除碳源、氮源外，還需要雞蛋、血清、血液等。主要有蛋白胨、牛肉浸液、牛肉浸膏、糖醇類、血液、雞蛋和動物血清、生長因子、無機鹽類等?，F在是24頁\一共有81頁\編輯于星期四1.1蛋白胨：蛋白胨是培養(yǎng)基中作為氮源應用最廣泛的基本成分，它用于合成菌體蛋白質、酶類以及細菌生長繁殖。其特點是易溶于水，吸水性強，故須干燥密封保存。此外，蛋白胨受高熱不凝固，遇酸不沉淀，在培養(yǎng)基中具緩沖作用，并含有各種游離氨基酸，易被細菌所利用?，F在是25頁\一共有81頁\編輯于星期四蛋白胨是動物或植物蛋白質經酶或酸堿分解而產生的中間產物。蛋白質消化越徹底，含氨基酸越多，越有利于細菌生長繁殖。由于蛋白質來源不同，消化程度不同，制成的胨質量相差很大。通常的商品蛋白胨是由胃蛋白酶消化蛋白質而制成的含胨、多肽及多種氨基酸的混合物，可供大多數細菌生長需要。其缺點是含某些氨基酸較少。胰蛋白胨是胰蛋白酶在堿性條件下消化蛋白質所獲得的分解產物，其中含有很多氨基酸和多肽，特別是富含色氨酸，更適合作靛基質試驗用的蛋白胨水?，F在是26頁\一共有81頁\編輯于星期四1.2牛肉浸液牛肉浸液是將新鮮不含脂肪、肌膜、肌腱等精牛肉浸泡煮沸制成的肉汁。包括兩類浸出物。一類為含氮可溶性浸出物（如肌酸、尿酸、腺苷酸、黃嘌呤、核苷酸、尿素、谷氨酸、肌肽等），另一類為非含氮浸出物質（如肝糖、磷酸己糖、乳糖、琥珀酸、肌醇、脂肪與無機鹽等）。牛肉浸液可作為細菌氮源和碳源，但因含氮物質較少，尚不能滿足細菌生長需要。現在是27頁\一共有81頁\編輯于星期四1.3牛肉浸膏為牛肉浸液經長時間加熱，蒸發(fā)掉水分后濃縮而成的膏狀制品。牛肉浸液中的不耐熱物質如糖類等已被破壞，因而其營養(yǎng)價值不如肉浸液，但其因不含糖和使用方便，故可作腸道細菌鑒別培養(yǎng)基基礎成分?，F在是28頁\一共有81頁\編輯于星期四1.4糖、醇類糖類是細菌生長繁殖所需的碳源、能源的基本成分。最常用的單糖是葡萄糖、阿拉伯糖等；雙糖是乳糖、蔗糖等；多糖有菊糖和淀粉.醇類有甘露醇、衛(wèi)矛醇等。其他的糖類和醇類主要用于發(fā)酵反應以及鑒定細菌。糖不耐熱，過久的高熱會被破壞，在堿性及與氮源一起高溫情況下，破壞更快，制備這類培養(yǎng)基時，通常不用高溫，并與培養(yǎng)基中其他成分分別滅菌?，F在是29頁\一共有81頁\編輯于星期四1.5血液培養(yǎng)基中加入血液，可增加蛋白質、多種氨基酸、糖類、無機鹽等營養(yǎng)成分，同時還能提供輔酶、血紅素等特殊生長因子，供某些對營養(yǎng)要求高的細菌生長繁殖之用。此外，含血液的培養(yǎng)基還可以用于觀察細菌溶血反應，作為細菌鑒定的一項指標?，F在是30頁\一共有81頁\編輯于星期四血平板溶血現象現在是31頁\一共有81頁\編輯于星期四1.6雞蛋和動物血清雞蛋和動物血清對一部分細菌來說是必須營養(yǎng)成分，可作為養(yǎng)料直接被細菌利用。常用于制備特殊培養(yǎng)基，如Braid-Praker瓊脂培養(yǎng)結核桿菌的羅氏培養(yǎng)基和白喉棒狀桿菌的呂氏血清培養(yǎng)基等。此外雞蛋和血清還具有凝固劑作用，便于觀察細菌菌落形態(tài)和生長情況?，F在是32頁\一共有81頁\編輯于星期四1.7生長因子在細菌生長繁殖過程中，需要一定的輔助生長因子。生長因子根據化學結構及代謝功能不同分為三大類：維生素、氨基酸和嘌呤與嘧啶。細菌對這些物質需要量不大，但如缺少，某些細菌就不能生長。通常肝浸液、肉浸液、酵母浸液和血液中含有大部分生長因子，但有時需要另外加入?，F在是33頁\一共有81頁\編輯于星期四1.8無機鹽類制備培養(yǎng)基時常加入氯化鈉和磷酸鹽，這是因為細菌生長繁殖需要無機鹽類，如K、Na、Mg、Fe、磷酸鹽、氯化物等。其中，有的需要量極微，如Mn、Cu等。這些無機離子除作為構成菌體的成分外，還是酶的激活劑，并起維持一定滲透壓的作用?，F在是34頁\一共有81頁\編輯于星期四2.水分細菌細胞75%-80%由水組成。水是細菌營養(yǎng)、代謝過程中不可缺少的物質；水又是良好的溶劑，培養(yǎng)基中許多營養(yǎng)物質均需溶于水才能被細菌吸收。蒸餾水和離子交換水不含雜質，在制備培養(yǎng)基時，一般需使用蒸餾水和離子交換水。無蒸餾水可以用自來水代替，因其中含有某些微量元素，有利于細菌生長，但應先煮沸使部分鹽類沉淀，過濾澄清后再使用?，F在是35頁\一共有81頁\編輯于星期四3.凝固物質配制固體培養(yǎng)基的凝固物質有瓊脂、明膠和蛋白、血清等，最常用瓊脂，特殊目的也可用明膠等。瓊脂是從石花菜等海藻中提取出來的一種膠狀物質，屬多糖類，一般不被細菌分解利用，無營養(yǎng)價值。瓊脂在98攝氏度以上融化，在低于45攝氏度時則凝固成膠凍狀態(tài)。用途不同的培養(yǎng)基中瓊脂含量不同，固體培養(yǎng)基含量為2%-2.5%，半固體培養(yǎng)基瓊脂含量為0.3%-0.5%?，F在是36頁\一共有81頁\編輯于星期四4.抑制劑和指示劑抑制劑和指示劑是由于選擇、鑒定和判斷結果的需要而加入到培養(yǎng)基中的物質，并不為細菌生長繁殖所需。4.1抑制劑加入目的是抑制非檢出菌生長或其少生長，以利于檢出菌生長。根據所要抑制選擇不同抑制劑。常用抑制劑有膽鹽、煌綠、玫瑰紅酸、亞硫酸鈉、四硫磺酸鹽、疊氮鈉及一些染料和某些抗生素等。在選擇抑制劑時需注意抑制劑應具有選擇性抑制作用?，F在是37頁\一共有81頁\編輯于星期四4.2指示劑是為方便了解和觀察細菌是否利用和分解培養(yǎng)基中糖、醇類物質，而在培養(yǎng)基中加入的成分。常用指示劑多為酸堿指示劑，如酚紅、溴甲酚紫、溴麝香草酚藍、中性紅、甲基紅、堿性復紅等，還有氧化還原指示劑，如亞甲藍。此外，一些新的氧化還原指示劑如四氮唑鹽類等，也已廣泛用于細菌快速培養(yǎng)和鑒定以及快速藥敏試驗方面?，F在是38頁\一共有81頁\編輯于星期四三、培養(yǎng)基配制原則：（1）目的要明確：根據微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制培養(yǎng)基的種類，因為不同的微生物對培養(yǎng)物質的需求不同。（2）營養(yǎng)要協(xié)調：注意各種營養(yǎng)物質的濃度和比例。（3）pH要適宜：各種微生物適宜生長的pH范圍不同。細菌pH為：；放線菌pH為：；真菌pH為：?，F在是39頁\一共有81頁\編輯于星期四第二節(jié)實驗內容現在是40頁\一共有81頁\編輯于星期四一、實驗目的掌握在真菌、細菌、放線菌分離培養(yǎng)工作中常用的合成和半合成培養(yǎng)基配制的一般原理、方法、程序、環(huán)節(jié)及要求和注意事項?，F在是41頁\一共有81頁\編輯于星期四二、實驗原理培養(yǎng)基的配制是進行微生物學實驗工作的重要基礎。由于微生物種類及代謝類型的多樣性，因而用于培養(yǎng)微生物培養(yǎng)基的種類也很多，它們的配方組成及配制方法雖各有差異,但一般培養(yǎng)基配制的常規(guī)程序卻大致相同，例如器皿的準備，培養(yǎng)基的配制與分裝，棉塞的制作，培養(yǎng)基的滅菌，斜面與平板的制作以及培養(yǎng)基的無菌檢查等基本環(huán)節(jié)?，F在是42頁\一共有81頁\編輯于星期四肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種廣泛用于培養(yǎng)細菌的培養(yǎng)基，屬于半合成培養(yǎng)基。其主要成分是牛肉膏、蛋白胨和NaCl。它們分別提供微生物生長繁殖所需要的碳源、氮源、能源、生長因子和無機鹽等。培養(yǎng)基都是水溶液，這是因為一切生物細胞都必須要有水的參與?，F在是43頁\一共有81頁\編輯于星期四高氏一號培養(yǎng)基是一種用于培養(yǎng)放線菌的合成培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中的可溶性淀粉作為碳源和能源，KNO3作為氮源，K2HPO4、MgSO4和FeSO4作為無機鹽等?，F在是44頁\一共有81頁\編輯于星期四馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基被廣泛用于培養(yǎng)酵母菌和霉菌，為半合成培養(yǎng)基。食品檢測國標使用虎紅培養(yǎng)基?，F在是45頁\一共有81頁\編輯于星期四1.培養(yǎng)基的配制過程1.1液體培養(yǎng)基的配制稱量一般可用1/100粗天平稱量配制培養(yǎng)基所需的各種藥品。先按培養(yǎng)基配方計算各成分的用量然后進行準確稱量。注意：染料、指示劑、膽鹽等物質何時加入？調整pH后。溶化將稱好的藥品置于一燒杯中，先加入少量水，然后加熱溶解，并不斷用玻璃棒攪動。注意：含銅大于0.3mol/L時，細菌不易生長；含鐵大于0.14mol/L妨礙細菌產生毒素?，F在是46頁\一共有81頁\編輯于星期四定容待全部藥品溶解后，倒入一量筒中，加水至所需體積。問：如某種藥品用量太少如何稱量？答：可先配置成較濃溶液，然后按比例吸收一定體積溶液，加入到培養(yǎng)基中?，F在是47頁\一共有81頁\編輯于星期四調PH一般用pH試紙測定培養(yǎng)基pH。用剪刀剪出一段pH紙，然后用鑷子夾取此段pH試紙，在培養(yǎng)基中蘸一下，觀察其pH范圍，如培養(yǎng)基偏酸或偏堿時，可用1mol/LNaOH或1mol/LHCl溶液進行調節(jié)。注意：調節(jié)pH時，應逐漸加入NaOH或HCl溶液，防止局部過酸或過堿，破壞培養(yǎng)基中成分。邊加邊攪拌，并不時用pH試紙測試，直至達到所需pH為止?，F在是48頁\一共有81頁\編輯于星期四注：一般將培養(yǎng)基pH調整高出所需值的個pH單位，經高壓滅菌后，其pH要降低個單位?，F在是49頁\一共有81頁\編輯于星期四過濾用濾紙或多層紗布過濾培養(yǎng)基。一般無特殊要求時，此步可省去?，F在是50頁\一共有81頁\編輯于星期四1.2固體培養(yǎng)基的配制配制固體培養(yǎng)基時，應將已配好的液體培養(yǎng)基加熱煮沸，再將稱好的瓊脂加入，并用玻棒不斷攪拌，以免糊底燒焦。繼續(xù)加熱至瓊脂全部融化，最后補足因蒸發(fā)而失去的水分?，F在是51頁\一共有81頁\編輯于星期四2.培養(yǎng)基的分裝根據不同需要，可將已配好的培養(yǎng)基分裝入試管或錐形瓶內，分裝時注意不要使培養(yǎng)基沾污管口或瓶口，造成污染。如操作不小心，培養(yǎng)基沾污管口或瓶口時，可用鑷子夾一小塊脫脂棉，擦去管口或瓶口的培養(yǎng)基，并將脫脂棉棄去?，F在是52頁\一共有81頁\編輯于星期四2.1試管的分裝取一個玻璃漏斗，裝在鐵架上，漏斗下連一根橡皮管，橡皮管下端再與玻璃管相接，橡皮管的中部加一彈簧夾。分裝時，用左手拿住空試管中部，并將漏斗下的玻璃管嘴插入試管內，以右手拇指及食指開放彈簧夾，中指及無名指夾住玻璃嘴，使培養(yǎng)基直接流入試管內。注：分裝在不同規(guī)格三角燒瓶、試管等容器中，分裝量不宜超過容器的2/3，否則會溢出?，F在是53頁\一共有81頁\編輯于星期四裝入試管培養(yǎng)基的量，視試管大小及需要而定。若所用試管大小為15*150mm時，液體培養(yǎng)基可分裝至試管高度1/4左右為宜；如分裝固體或半固體培養(yǎng)基時，瓊脂完全融化后，應趁熱分裝于試管中?，F在是54頁\一共有81頁\編輯于星期四2.2錐形瓶的分裝用于振蕩培養(yǎng)微生物時，可在250ml錐形瓶中加入50ml的液體培養(yǎng)基；若用于制作平板培養(yǎng)基時，可在250ml錐形瓶中加入150ml培養(yǎng)基，然后再加入3g瓊脂粉（按2%計算）。滅菌時瓶中瓊脂粉同時被融化?，F在是55頁\一共有81頁\編輯于星期四3.棉塞的制作及試管、錐形瓶的包扎為了培養(yǎng)好氧性微生物，需提供優(yōu)良通氣條件，同時為防止雜菌污染，則必須對通入試管或錐形瓶內空氣先進行過濾，除菌。通常方法是在試管及錐形瓶口加上棉花塞等?，F在是56頁\一共有81頁\編輯于星期四3.1試管棉塞的制作制棉塞時，應選取用大小，厚薄適中的普通棉花一塊，鋪展于左手拇指和食指扣成的圓孔中，用右手食指將棉花從中央壓入圓孔中制成棉塞，然后直接壓入試管或錐形瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折疊法制作棉塞。制作的棉塞應緊貼管壁，不留縫隙，以防外界微生物沿縫隙侵入，棉塞不宜過緊或過松，塞好后以手提棉塞，試管不下落為準。棉塞的2/3在試管內，1/3在試管外。現在是57頁\一共有81頁\編輯于星期四將裝好培養(yǎng)基并塞好棉塞或蓋好管帽的試管捆成一捆，外面包上一層牛皮紙。用鉛筆注明培養(yǎng)基名稱及配制日期。滅菌待用?，F在是58頁\一共有81頁\編輯于星期四3.2錐形瓶棉塞制作通常在棉塞外包上一層紗布，再塞在瓶口上。有時為了進行液體振蕩培養(yǎng)加大通氣量，則可用8層紗布代替棉塞包在瓶口上。在裝好培養(yǎng)基并塞好棉塞或包上8層紗布或蓋好培養(yǎng)容器封口膜的錐形瓶口上，再包上一層牛皮紙并用線捆好，滅菌待用?，F在是59頁\一共有81頁\編輯于星期四4.培養(yǎng)基的滅菌下一章節(jié)詳述?，F在是60頁\一共有81頁\編輯于星期四5.斜面和平板的制作5.1斜面的制作將已滅菌裝有瓊脂培養(yǎng)基的試管，趁熱傾斜固定，凝固后即成斜面。斜面長度不超過試管長度1/2為宜。如制作半固體或固體深層培養(yǎng)基時，滅菌后則應垂直放置至冷凝?，F在是61頁\一共有81頁\編輯于星期四葡萄糖：乳糖＝1：9下黃上不黃為分解葡萄糖，不分解乳糖上下均黃為分解葡萄糖、乳糖上下均不黃為非發(fā)酵菌中間變?yōu)楹谏珵楫aH2S現在是62頁\一共有81頁\編輯于星期四5.2平板的制作將裝在錐形瓶或試管中已滅菌的瓊脂培養(yǎng)基融化后，冷卻至50攝氏度左右傾入無菌培養(yǎng)皿中。溫度過高時，皿蓋上冷凝水太多，溫度低于50攝氏度，培養(yǎng)基易于凝固而無法制作平板。平板的制作應在酒精燈旁進行，左手拿培養(yǎng)皿，右手拿錐形瓶的底部或試管，左手同時用小指和手掌將棉塞打開，灼瓶口。用左手大拇指將培養(yǎng)皿蓋打開一縫。置于桌上，輕輕旋轉平皿。使培養(yǎng)基均勻分布于整個平皿中，冷凝后即成平板。現在是63頁\一共有81頁\編輯于星期四三、實驗材料3.1藥品牛肉膏、蛋白胨、NaCl、酵母膏、可溶性淀粉、KNO3、K2HPO4、MgSO4?7H2O和FeSO4?7H2O、馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂等?，F在是64頁\一共有81頁\編輯于星期四3.2溶液1mol/LNaOH、1mol/LHCl。現在是65頁\一共有81頁\編輯于星期四3.3儀器天平、高壓蒸汽滅菌器?，F在是66頁\一共有81頁\編輯于星期四3.4玻璃器皿移液管、試管、量筒、錐形瓶、培養(yǎng)皿、玻璃漏斗等?，F在是67頁\一共有81頁\編輯于星期四3.5其他常用器皿藥匙、pH試紙、稱量紙、記號筆、棉花、紗布、線繩、塑料試管蓋、牛皮紙、報紙等?，F在是68頁\一共有81頁\編輯于星期四四、實驗內容4.1肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基成分牛肉膏5g蛋白胨10gNaCl5g瓊脂15-20g水1000mlPh7.2現在是69頁\一共有81頁\編輯于星期四配制方法（1）稱量及融化分別稱取蛋白胨和NaCl的所需量，置于燒杯中，加入所需水量的2/3左右的蒸餾水，用玻璃棒挑取牛肉膏置于另一燒杯中，進行稱量。然后加入少量蒸餾水于小燒杯中，加熱融化。倒入上述燒杯中。將燒杯置于石棉網上加熱，用玻璃棒攪拌，使藥品全部融化?，F在是70頁\一共有81頁\編輯于星期四（2）調Ph待溶液冷卻至室溫時，用1mol/lNaOH溶液調pH至7.2。（3）定容將溶液倒入量筒中，補充水量至所需體積。（4）加瓊脂加入所需量的瓊脂，加熱融化，補充失水。（5）分裝、加塞、包扎。（6）高壓蒸汽滅菌0.1MPa滅菌20min?，F在是71頁\一共有81頁\編輯于星期四4.2高氏合成一號培養(yǎng)基4.3馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基現在是72頁\一共有81頁\編輯于星期四4.4培養(yǎng)基使用注意事項配制培養(yǎng)基所用的化學藥品，均應化學純凈。配制培養(yǎng)基時各種成分應準確稱量。培養(yǎng)基的酸堿度，必須準確測定，特別對含有指示劑的培養(yǎng)基；測定酸堿度須于冷卻后測定為準。制備的培養(yǎng)基必須保持澄清，以便細菌生長后，容易觀察。液體培養(yǎng)基沉淀法和濾紙法；固體培養(yǎng)基可用脫脂棉花濾清?，F在是73頁\一共有81頁\編輯于星期四培養(yǎng)基使用注意事項培養(yǎng)基必須達到完全無菌的目的。要注意有些