感染性疾病病原體快速診斷

感染性疾病病原體快速診斷第1頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五概述感染性疾病：由某種病原體所致，通過(guò)不同方式引起人體發(fā)生感染并出現(xiàn)臨床癥狀的疾病,主要表現(xiàn)為發(fā)熱。病原體：細(xì)菌（含TB）、支原體、衣原體

病毒真菌原蟲等2第2頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五感染的診斷依據(jù)臨床表現(xiàn)：感染的全身中毒癥狀：畏寒、發(fā)熱、皮疹等實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢查：血常規(guī)：WBC、DC影像學(xué)檢查：X-RAY、B超病原學(xué)檢查：染色、培養(yǎng)血清學(xué)檢查：抗原或抗體檢測(cè)危重病人：臨床表現(xiàn)、WBC+DC不典型3第3頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五感染的分類按病原學(xué)分類細(xì)菌感染（包括結(jié)核）真菌感染病毒感染支原體、衣原體按部位分類局部感染全身感染4第4頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五臨床希望第一時(shí)間知道的信息感染或非感染細(xì)菌感染或非細(xì)菌感染是結(jié)核感染或普通細(xì)菌感染酵母樣真菌感染或絲狀真菌感染白色假絲酵母或其他念珠菌感染曲菌感染或毛霉菌感染因?yàn)樯鲜龈腥局委煼椒ú煌?第5頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五感染標(biāo)志物細(xì)菌感染標(biāo)志物白細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類血沉C-反應(yīng)蛋白（CRP）白介素-6降鈣素元內(nèi)毒素真菌感染標(biāo)志物:G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)結(jié)核感染證據(jù)：夾層杯、T-SPOT6第6頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五內(nèi)容提要臨床常見細(xì)菌感染快速診斷技術(shù)結(jié)核分枝桿菌的快速診斷技術(shù)123臨床常見真菌的快速診斷技術(shù)7第7頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五臨床常見細(xì)菌感染快速診斷技術(shù)降鈣素原檢測(cè)內(nèi)毒素檢測(cè)分子診斷8第8頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五降鈣素原(ProcalcitoninPCT)降鈣素原是正常人血清中存在的含116個(gè)氨基酸組成的糖蛋白，最初由甲狀腺細(xì)胞產(chǎn)生，血清水平很低。在非感染或病毒性感染疾病時(shí)保持非常低的血清水平，在細(xì)菌性感染時(shí)含量升高，并與感染程度和預(yù)后呈正相關(guān)。PCT含量的變化穩(wěn)定，并出現(xiàn)在疾病的早期（3-4h）。短半衰期(24h)國(guó)外把PCT作為最敏感的感染標(biāo)志。正常血清水平:100-150pg/ml9第9頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五降鈣素原PCT

:分子結(jié)構(gòu)血清降鈣素(CT)的前肽物質(zhì)分子量：14.5kDa由116個(gè)氨基酸組成的糖蛋白質(zhì)無(wú)激素活性11號(hào)染色體上的單拷貝基因轉(zhuǎn)錄甲狀腺濾泡細(xì)胞降鈣素原前體內(nèi)源多肽酶降鈣素原PCT分解細(xì)胞內(nèi)特殊蛋白酶正常情況下降鈣素10第10頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五LinscheidP,etalCritCareMed04;32:1715-21

Endocrinology03;144:5578-84&05;146:2699-708在病毒感染時(shí)，大量產(chǎn)生的IFN-，將會(huì)抑制PCT的激活及產(chǎn)生.因此，病毒感染時(shí)，PCT的濃度將會(huì)保持在較低的水平BacterialInfection

(e.g.Endotoxin)IL-6IL-611第11頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五細(xì)菌感染后PCT快速升高

Kineticsofprocalcitonininiatrogenicsepsis

BrunkhorstF.Metal,IntensCareMed1998,24:888-89212第12頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五PCT來(lái)源LeftLane:正常組,在不存在感染的情況下，甲狀腺外CALCI表達(dá)被抑制，而主要局限于甲狀腺和肺的神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞有一定程度的表達(dá)RightLane:膿毒癥組,在細(xì)菌感染時(shí)可誘導(dǎo)全身各種組織多種類型細(xì)胞CALCI表達(dá)和PCT連續(xù)性釋放13第13頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五PCT動(dòng)力學(xué)2-3h開始增加；

6-8h快速升高；12h-48到達(dá)峰值；

2-3d正常血漿濃度在＜0.05ng/ml-1000ng/ml半衰為15-20h左右,且不受腎功能影響14第14頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五PCT檢測(cè)方法快速半定量法（PCT-Q）全自動(dòng)快速定量法（VIDAS)15第15頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五快速半定量法（PCT-Q）樣本：200μl血清/血漿結(jié)果：30min同膠體金免疫層析法，即在標(biāo)準(zhǔn)品上結(jié)合有膠體金的小鼠單克隆抗降鈣素抗體和綿羊多克隆抗降鈣素抗體，待檢標(biāo)本加上后，示蹤元素即與標(biāo)本中的PCT結(jié)合，形成一個(gè)“三明治式”的復(fù)合物，然后通過(guò)發(fā)光比色判斷PCT濃度當(dāng)PCT濃度≥0.5μg/ml時(shí)，夾心復(fù)合物呈紅色帶，顏色深淺與樣品中的PCT濃度成正比例，未結(jié)合的示蹤物擴(kuò)散到對(duì)照區(qū)，結(jié)合并產(chǎn)生了紅色的對(duì)照帶。16第16頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五全自動(dòng)快速定量法儀器：法國(guó)梅里埃公司VIDAS全自動(dòng)酶聯(lián)熒光分析儀及配套試劑標(biāo)本要求：靜脈抗凝血注意無(wú)菌操作，使用新鮮標(biāo)本，如果4小時(shí)內(nèi)不使用，應(yīng)將標(biāo)本放置-20℃保存。血漿中的PCT非常穩(wěn)定，收集標(biāo)本24h后，PCT濃度在室溫下大約下降12％，在4℃大約下降6％17第17頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五PCT用于細(xì)菌感染和膿毒癥診斷是一種非常有價(jià)值的標(biāo)志物

細(xì)菌感染/膿毒癥診斷及嚴(yán)重程度判斷膿毒癥治療效果監(jiān)測(cè)及預(yù)后評(píng)估抗生素的有效管理18第18頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五細(xì)菌感染診斷及嚴(yán)重程度判斷膿毒性休克嚴(yán)重膿毒癥系統(tǒng)性感染(膿毒癥)局部感染正常值

PCT的濃度隨感染的擴(kuò)散和感染嚴(yán)重程度的加重而升高19第19頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五膿毒癥患者治療效果及預(yù)后監(jiān)測(cè)(n=109)F.Stüber,UniversityBonn,LectureatISICEM,Brussels2001通過(guò)PCT不斷在體內(nèi)衰減，反映出抗生素治療策略的成功隨著患者對(duì)抗生素治療的響應(yīng)，引起了PCT血中濃度水平的典型變化過(guò)程AB-antibiotics20第20頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五抗生素有效管理PCT濃度（ng/ml）臨床意義＜0.05無(wú)細(xì)菌感染0.05-0.1非細(xì)菌感染0.1-0.25可能是局部細(xì)菌感染，不建議使用抗生素，6-24小時(shí)內(nèi)復(fù)查0.25-0.5局部細(xì)菌感染，建議使用抗生素0.5-2.0嚴(yán)重細(xì)菌感染、膿毒癥2.0-10.0重癥膿毒癥＞10.0 重度膿毒癥、膿毒性休克或MODS21第21頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五PCT的臨床應(yīng)用急診住院病房外科手術(shù)血液科內(nèi)科ICU外科ICU兒科急診兒科病房?jī)嚎艻CU新生兒科嚴(yán)重細(xì)菌感染或膿毒癥的檢測(cè)（鑒別診斷）疾病或治療反應(yīng)的監(jiān)測(cè)局部與全身性感染膿毒癥的診斷和監(jiān)測(cè)新生兒膿毒癥的檢測(cè)22第22頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五<48hr的新生兒

->生理性一過(guò)性峰值創(chuàng)傷后炎癥綜合癥:多發(fā)性創(chuàng)傷,大面積燒傷,大手術(shù)后(心臟,移植,腹部)使用致炎細(xì)胞因子治療后(OKT3,注射TNFα,IL-2,抗淋巴細(xì)胞球蛋白)某些腫瘤(甲狀腺髓樣細(xì)胞癌,肺小細(xì)胞癌和支氣管癌)長(zhǎng)時(shí)間循環(huán)衰竭(心源性休克,出血性休克,熱休克)PCT水平增加但沒(méi)有系統(tǒng)細(xì)菌感染的幾種情況23第23頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五感染早期(->6-12小時(shí)后重復(fù)檢測(cè)!)亞急性心內(nèi)膜炎局部感染細(xì)菌感染而PCT不升高的情況24第24頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五對(duì)PCT檢測(cè)的影響受以下因素影響

*

甲狀腺功能

是功能性甲狀腺髓樣癌的腫瘤標(biāo)志物*

腎功能

嚴(yán)重腎功能受損者中水平較高不受以下因素影響*

類固醇藥物*自身免疫性疾病*

年齡、性別*免疫功能低下狀態(tài):肝硬化、HIV感染25第25頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五細(xì)菌內(nèi)毒素革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁上的一種脂多糖（LPS）和蛋白的復(fù)合物，細(xì)菌死亡或自溶后釋放進(jìn)入機(jī)體將會(huì)出現(xiàn)發(fā)熱、血壓降低、寒顫、引起DIC、內(nèi)毒素?cái)⊙Y等一系列臨床反應(yīng)。26第26頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五27第27頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)原理：儀器檢測(cè)試管內(nèi)反應(yīng)物的光密度OD值，取當(dāng)OD上升到0.02的點(diǎn)的時(shí)間作為反應(yīng)時(shí)間，該點(diǎn)在反應(yīng)曲線上的位置為濁度開始快速變化的時(shí)期，該取值能夠快速、穩(wěn)定的獲得反應(yīng)時(shí)間，從而判斷內(nèi)毒素的含量動(dòng)態(tài)濁度法28第28頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五儀器和試劑BET-24A細(xì)菌內(nèi)毒素分析儀

MB-80微生物快速動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)29第29頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五標(biāo)本要求患者早上尚未進(jìn)行藥物靜脈治療時(shí):MB-80：“無(wú)熱源真空采血管”,靜脈抗凝血，采血量2-4ml，30min內(nèi)送檢BET-24A：抽取1mL靜脈抗凝血，配1mL1號(hào)處理液其它體液如腦脊液﹑胸腹水與血標(biāo)本要求相同。注意無(wú)菌操作30第30頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五內(nèi)毒素活性定量檢測(cè)意義G-所致膿毒癥早期鑒別診斷指導(dǎo)抗生素正確使用判定抗感染治療效果幫助判斷患者的預(yù)后31第31頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五內(nèi)毒素定量檢測(cè)的適應(yīng)癥各種急、慢性病理性發(fā)熱患者各種類型“中重度感染、肝病、休克、腸道疾病、臟器功能衰竭、大手術(shù)術(shù)后”患者慢性疾病長(zhǎng)期臥床、免疫力低下患者急診及ICU病房收治的生命體征不穩(wěn)定的患者32第32頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五分子診斷技術(shù)檢測(cè)致病菌PCR技術(shù)擴(kuò)增16srRNA基因鑒定常見致病菌革蘭陽(yáng)性球菌革蘭陰性桿菌mecA基因VanA/VanB基因PBP2b基因PCR擴(kuò)增耐藥基因特異性基因ESBLs基因AmpC基因碳青霉烯酶基因mecA：耐甲氧西林葡萄球菌屬（MRS）特異性基因VanAVanB

：耐萬(wàn)古霉素腸球菌（VRA）特異性基因PBP2b

：青霉素不敏感肺炎鏈球菌（pNSSp）特異性基因ESBLs基因：主要包括TEM、SHV、CTX-M、OXAAmpC基因包括質(zhì)粒介導(dǎo)型和染色體誘導(dǎo)型。其中前者主要包括MOX、CMY、DHA、ACC、ACT、FOX等亞型，后者主要包括：ADC。碳青霉烯酶基因：A類酶，以KPC為代表；金屬酶，以IMP、VIM、NDM為代表；D類酶，以O(shè)XA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-48為主。33第33頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五16SrRNA具有多拷貝多信息的特點(diǎn)34第34頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五結(jié)核分枝桿菌的快速診斷是引起結(jié)核病的病原菌。它可侵犯全身各器官，但以肺結(jié)核為最多見。結(jié)核病至今仍為重要的傳染病。估計(jì)世界人口中1/3感染結(jié)核分枝桿菌。結(jié)核分枝桿菌生長(zhǎng)緩慢，一般需2-4周長(zhǎng)成肉眼可見的落菌?？顾崛旧ㄊ菣z測(cè)TB的傳統(tǒng)方法，但存在假陽(yáng)性因此，快速診斷對(duì)TB至關(guān)重要。35第35頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五結(jié)核感染現(xiàn)狀全球范圍內(nèi)結(jié)核病疫情急劇惡化結(jié)核病與艾滋病同時(shí)流行結(jié)核菌耐藥現(xiàn)象益發(fā)嚴(yán)重人口大規(guī)模流動(dòng)我國(guó)是世界上僅低于印度的第二結(jié)核病大國(guó)結(jié)核菌感染率44.5%新發(fā)活動(dòng)性結(jié)核患者130萬(wàn)/年死亡13萬(wàn)/年早期快速診斷與治療成為制約結(jié)核病控制的關(guān)鍵常規(guī)實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)核病方法陽(yáng)性率不到60%36第36頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五全球結(jié)核疫情37第37頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五結(jié)核檢測(cè)方法一、現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)技術(shù)細(xì)菌學(xué)診斷─涂片、培養(yǎng)免疫學(xué)診斷─抗原、抗體膠體金分子生物學(xué)診斷─PCR二、其它檢測(cè)技術(shù)PPD（TST）實(shí)驗(yàn)影像學(xué)檢查38第38頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五

結(jié)核夾層杯技術(shù)結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)分子生物學(xué)技術(shù)結(jié)核分枝桿菌的快速診斷39第39頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五結(jié)核夾層杯技術(shù)原理：通過(guò)專用消化滅活液消化組織細(xì)胞和粘蛋白等，將結(jié)核桿菌裸露出來(lái)，并結(jié)合高速震蕩，使痰標(biāo)本充分液化而有利于其中的抗酸桿菌沉淀于特制彭氏杯底部的菌膜上，在夾層杯中直接抗酸染色、干燥，并用取片針頂出內(nèi)底，經(jīng)封片等步驟后，鏡下檢測(cè)抗酸桿菌。40第40頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五檢測(cè)流程示意圖41第41頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五鏡下比較圖2.夾層杯法（新方法）：

菌量多，背景清晰，易于觀察圖1.直接涂片法（傳統(tǒng)方法）：菌量少，背景不清晰42第42頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五夾層杯診斷技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)陽(yáng)性率高背景清晰，易于觀察易于標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)速度快生物安全性好夾層杯診斷技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)43第43頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五結(jié)核夾層杯技術(shù)標(biāo)本要求：（1）痰液要求新鮮，留取清晨深咳出的第一口痰液，留痰時(shí)，患者以清水漱口３次，然后用力咳出氣管深處的痰（2）用氫氧化鈉處理完全。臨床應(yīng)用：用于結(jié)核分枝桿菌的初篩44第44頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)是以ELISPOT技術(shù)

檢測(cè)結(jié)核感染的新方法

，ELISPOT是近20年發(fā)展起來(lái)的檢測(cè)抗原特異性T細(xì)胞的技術(shù)，是目前最敏感的檢測(cè)抗原特異性T細(xì)胞的方法之一。45第45頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五原理結(jié)核感染的免疫應(yīng)答反應(yīng)以細(xì)胞免疫為主，作為免疫應(yīng)答的一部分，T細(xì)胞受結(jié)核抗原刺激致敏，形成活化的效應(yīng)T細(xì)胞，包括CD4和CD8。結(jié)核桿菌感染者外周血單核細(xì)胞中存在結(jié)核特異的活化T淋巴細(xì)胞，這些淋巴細(xì)胞在體外再次受到結(jié)核桿菌特異抗原刺激后分泌γ-干擾素，通過(guò)檢測(cè)體外分泌的IFN-γ來(lái)診斷是否存在結(jié)核感染。46第46頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五活動(dòng)性結(jié)核與潛伏感染接觸活動(dòng)性結(jié)核病患者暴露程度不足，結(jié)核桿菌被機(jī)體免疫力清除沒(méi)有癥狀,結(jié)核桿菌仍舊存在而不能被發(fā)現(xiàn)

X-光/CT掃描顯示正常沒(méi)有抗體應(yīng)答診斷困難傳統(tǒng)的結(jié)核感染檢測(cè)只有TST（PPD）機(jī)體被感染受機(jī)體免疫力抑制沒(méi)有臨床癥狀終身處于感染狀態(tài)潛伏感染有臨床癥狀具有傳染性結(jié)核桿菌可以通過(guò)涂片、培養(yǎng)檢測(cè)出胸部的X-光或CT掃描顯示異常

肺外結(jié)核難以診斷(特別是兒童)活動(dòng)性結(jié)核5%5%再次激活47第47頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五活動(dòng)性結(jié)核與潛伏感染新發(fā)TB病例來(lái)自潛伏性結(jié)核感染人群潛伏性結(jié)核感染（hiddenepidemic）人群數(shù)量巨大

——“定時(shí)炸彈”若想控制活動(dòng)性TB，必須先控制潛伏性結(jié)核感染鑒別高危人群預(yù)防性治療免疫接種活動(dòng)性TB–

每年900萬(wàn)新發(fā)病例僅為冰山一角LatentTB-“hiddenepidemic”-2billionpeopleinfected48第48頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)49第49頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五γ-干擾素釋放實(shí)驗(yàn)（IGRA，interferon-gammareleaseassay）酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)（ELISPOT，Enzyme-LinkedImmunoSpotassay）結(jié)核桿菌特異抗原早期抗原靶6（ESAT-6）

earlysecretedantigenictarget6

培養(yǎng)濾液蛋白10（CFP10）

culturefiltrateprotein10）技術(shù)背景50第50頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五結(jié)核感染者體內(nèi)存在特異的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞，效應(yīng)T淋巴細(xì)胞再次受到結(jié)核抗原刺激時(shí)會(huì)分泌多種細(xì)胞因子（IFN-γ）。因此，檢測(cè)效應(yīng)T淋巴細(xì)胞可用于結(jié)核病或結(jié)核潛伏感染者的診斷。由于效應(yīng)T細(xì)胞存活時(shí)間很短，而且具有特異性，因此可以作為機(jī)體是否正處于被感染的指標(biāo)，無(wú)論是否有臨床癥狀。基于IGRA原理的檢測(cè)項(xiàng)目目前已被美國(guó)、加拿大、英國(guó)、德國(guó)、意大利、瑞士、法國(guó)、荷蘭、日本等二十余個(gè)國(guó)家寫入本國(guó)的結(jié)核診療指南中γ-干擾素釋放實(shí)驗(yàn)（IGRA）51第51頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)（ELISPOT）52第52頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)（ELISPOT）近二十多年來(lái)，隨著技術(shù)改良，ELISPOT分析技術(shù)已經(jīng)是當(dāng)世公認(rèn)的最靈敏的抗原特定T細(xì)胞的體外檢測(cè)技術(shù)結(jié)合了細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（即ELISA技術(shù)），能夠在單細(xì)胞水平檢測(cè)細(xì)胞因子的分泌情況，靈敏度高。其技術(shù)原理，可一句話概括為：用抗體捕獲培養(yǎng)中細(xì)胞所分泌的細(xì)胞因子，并以酶聯(lián)斑點(diǎn)顯色方式將其表現(xiàn)出來(lái)（SedgwickJD2005）。53第53頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五結(jié)核桿菌特異抗原ESAT-6與CFP10抗原由結(jié)核桿菌基因組RD1區(qū)相同的操縱子編碼的蛋白所有的卡介苗（BCG）均丟失該基因序列絕大多數(shù)的環(huán)境分枝桿菌也不存在RD1區(qū)54第54頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五操作步驟①②55第55頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五操作步驟⑤⑥④③孵育1小時(shí)56第56頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五實(shí)際效果圖陰性結(jié)果陽(yáng)性結(jié)果空白對(duì)照抗原AESAT-6抗原BCFP10陽(yáng)性對(duì)照（PHA）57第57頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五T-SPOT.TB特點(diǎn)特異性好，不受卡介苗（BCG）接種和環(huán)境分枝桿菌影響靈敏度高，在免疫力低下/受抑制人群中有很高的檢出率快速，24小時(shí)報(bào)告結(jié)果58第58頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五寫入診療指南的國(guó)家（Guidelines）美國(guó)（CDC和兒科學(xué)會(huì)）；加拿大（加拿大結(jié)核病委員會(huì)）；巴西（衛(wèi)生部）英國(guó)（國(guó)家衛(wèi)生和臨床協(xié)會(huì)）；法國(guó)（國(guó)家衛(wèi)生局）；西班牙（西班牙肺病和胸部手術(shù)協(xié)會(huì)）；德國(guó)（德國(guó)抗結(jié)核病中央委員會(huì)）；意大利；瑞士（瑞士肺科協(xié)會(huì)）；荷蘭（實(shí)用結(jié)核病控制委員會(huì)）；丹麥（丹麥肺部醫(yī)學(xué)會(huì)）；挪威（挪威公共衛(wèi)生協(xié)會(huì)）；芬蘭（國(guó)家衛(wèi)生和福利協(xié)會(huì)）；愛爾蘭（國(guó)家結(jié)核病咨詢委員會(huì)）；葡萄牙；捷克共和國(guó)；斯洛伐克；波蘭；保加利亞；克羅地亞澳大利亞（國(guó)家結(jié)核病咨詢委員會(huì)、傳染病協(xié)會(huì)和澳大利亞風(fēng)濕病協(xié)會(huì)）；沙特阿拉伯；南朝鮮；日本（日本結(jié)核病預(yù)防協(xié)會(huì)）

WHO和ECDC中國(guó)（專家組推薦）59第59頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五1、結(jié)核病輔助診斷/療效評(píng)價(jià)“菌陰”結(jié)核病患者的輔助診斷肺外結(jié)核的鑒別診斷抗癆治療的療效評(píng)價(jià)2、免疫力低下/受抑制患者的結(jié)核診斷/感染篩查使用生物制劑/免疫抑制劑患者的結(jié)核感染篩查HIV感染者/腎透析患者/器官移植患者3、兒童結(jié)核病的輔助診斷4、結(jié)核密切接觸者/高危人群的結(jié)核感染篩查結(jié)核病患者的家屬/醫(yī)務(wù)工作者/監(jiān)獄囚犯5、接觸追蹤臨床應(yīng)用60第60頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五結(jié)核相關(guān)疾病肺結(jié)核菌陽(yáng)（痰涂片、痰培養(yǎng)）------結(jié)核?？漆t(yī)院菌陰------感染科、呼吸科、胸外科、結(jié)核科肺外結(jié)核淋巴結(jié)結(jié)核------外科、血液科、感染科結(jié)核性胸膜炎------感染科、呼吸科、結(jié)核科結(jié)核性腹膜炎------外科、消化科、感染科結(jié)核性腦膜炎------感染科、神經(jīng)科骨關(guān)節(jié)結(jié)核------骨科、風(fēng)濕科、感染科泌尿生殖系統(tǒng)結(jié)核------泌尿外科、腎臟科、感染科、性病科其他：如結(jié)核性心包炎、脾結(jié)核、胰腺結(jié)核等61第61頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五評(píng)價(jià)不能夠提示臨床患者的病變部位不能夠根據(jù)斑點(diǎn)數(shù)量的多少來(lái)判斷受試者是活動(dòng)性結(jié)核病患者或是潛伏感染者兒童結(jié)核的輔助診斷，需要結(jié)合臨床62第62頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五基因診斷TB特異性位點(diǎn)：1.rRNA基因：高度保守，主要包括23S、16S及5S基因。其中最為常用的是16SrRNA基因。2.插入序列：IS6110和IS1081。3.蛋白編碼的基因：65KD熱休克蛋白基因(hsp65)、32KD蛋白基因、DnaJ蛋白基因、RNA聚合酶B(rpoB)和MPB64蛋白基因(mpb64）等?；蛟\斷的意義主要表現(xiàn)在：

a.區(qū)分TB與其它分枝桿菌；

b.檢測(cè)TB耐藥基因；

c.提高TB的陽(yáng)性檢出率。63第63頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五TB分子分型技術(shù)IS6110-RFLP（插入序列6110限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析）方法目前依然被認(rèn)為是結(jié)核分枝桿菌基因分型的“金標(biāo)準(zhǔn)”。直接重復(fù)片段及寡核苷酸多態(tài)性分型可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列及MLVA分型單核苷酸多態(tài)性和MLST分型64第64頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五多重耐藥結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)結(jié)核桿菌產(chǎn)生耐藥性主要是由不合理用藥引起的結(jié)核桿菌內(nèi)抗結(jié)核藥物作用靶基因突變所致。藥敏試驗(yàn)周期長(zhǎng)，因此檢測(cè)耐藥基因成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。耐藥檢測(cè)包括用PCR擴(kuò)增基因組內(nèi)攜帶的耐藥性區(qū)域，和進(jìn)行擴(kuò)增產(chǎn)物的突變分析。結(jié)核分支桿菌耐藥性的基因檢測(cè)技術(shù)分為雜交系統(tǒng)和放大系統(tǒng)兩大部分。多數(shù)放大系統(tǒng)基于雜交系統(tǒng)，其另一部分是PCR擴(kuò)增技術(shù)。65第65頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五臨床常見真菌的快速診斷G試驗(yàn)GM試驗(yàn)分子生物學(xué)技術(shù)66第66頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五1.1,3-β-D-葡聚糖-G試驗(yàn)1，3-β-D-葡聚糖是酵母和絲狀真菌細(xì)胞壁的多聚糖成分，以假絲酵母菌屬含量最高，而其他微生物動(dòng)物及人的細(xì)胞成分和細(xì)胞外液都不含這種成分。因此，血液及無(wú)菌體液中檢出1，3-β-D-葡聚糖在很大程度上可以視為IFI的標(biāo)志，如念珠菌、曲霉、鐮刀霉、酵母和絲孢酵母感染等。目前的檢測(cè)方法為G試驗(yàn)，其原理是1，3-β-D-葡聚糖有特異性激活鱟變形細(xì)胞裂解物中的G因子引起裂解物凝固，故稱為G試驗(yàn)。國(guó)內(nèi)已經(jīng)使用微生物快速動(dòng)態(tài)檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)。67第67頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五標(biāo)本要求采樣過(guò)程要求無(wú)菌操作常規(guī)病人早上用藥治療前空腹采血取樣（血透患者透析前采血）標(biāo)本類型：抗凝靜脈血，使用無(wú)熱原真空采血管采血量：2-3ml，立即混勻半小時(shí)內(nèi)送檢。實(shí)驗(yàn)前未打開標(biāo)本在2-8℃可保存5天。打開后標(biāo)本需在48小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。如需長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存，存儲(chǔ)溫度應(yīng)為-70℃。血清標(biāo)本最多可凍融四次。解凍標(biāo)本檢測(cè)之前要充分混勻68第68頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五G試驗(yàn)的臨床意義早期、快速診斷侵襲性真菌感染可用于真菌感染早期篩查，適用于念珠菌、曲霉、肺孢子菌、鐮刀菌、地霉、組織胞漿菌和毛孢子菌等，不能用于檢測(cè)隱球菌和接合菌感染。對(duì)真菌感染癥狀進(jìn)行診斷，陽(yáng)性結(jié)果代表存在侵襲性真菌感染69第69頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五2.半乳甘露聚糖(GM)半乳甘露聚糖(GM)是一種對(duì)熱穩(wěn)定的水溶性的物質(zhì)，是廣泛存在于曲霉和青霉細(xì)胞壁中的一類多糖。一般在曲霉感染者出現(xiàn)臨床癥狀和影像學(xué)檢查異常前數(shù)天，其體內(nèi)循環(huán)中GM即可呈陽(yáng)性表達(dá)，其靈敏度和特異度均可達(dá)到80%以上。原理：是一種微孔板雙抗體夾心法，采用小鼠單克隆抗體EBA-2，檢測(cè)人血清中的曲霉菌半乳甘露聚糖。70第70頁(yè)，共80頁(yè)，2023年，2月20日，星期五標(biāo)本要求標(biāo)本采集：靜脈采血5ml（紅帽管）。檢測(cè)標(biāo)本：血清標(biāo)本，密封，無(wú)菌操作。實(shí)驗(yàn)前未打開標(biāo)本在2-8℃可保存5天。打開后標(biāo)本需在48小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。如需長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存，存儲(chǔ)溫度應(yīng)為-70℃。血清標(biāo)本最多可凍融四次。解凍標(biāo)本檢測(cè)之前要充分混勻20mg/L膽紅素，或2g/L甘油三酯