微生物標(biāo)本采集運(yùn)送標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程

操作程序文件編號(hào)SOP-LJ-AQSS版本:1.0生效時(shí)間:2016.12.1第1頁(yè)/共6頁(yè)編寫(xiě)者：戴書(shū)連審核者：批準(zhǔn)人：文件發(fā)放范圍：檢驗(yàn)科各專(zhuān)業(yè)組病原微生物檢驗(yàn)標(biāo)本采集、運(yùn)送操作規(guī)程1、目的：正確的標(biāo)本采集，運(yùn)送，保存和處理對(duì)于微生物檢驗(yàn)工作質(zhì)量至關(guān)重要，為了準(zhǔn)確檢出病原菌，避免漏檢與誤診，臨床醫(yī)護(hù)人員和實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)掌握微生物標(biāo)本的選擇，采集，運(yùn)送，保存及處理的一般原則。2、標(biāo)本采集的一般原則早期采集采集時(shí)間最好在病程早期，急性期，且必須在使用抗菌藥物之前采集，確保病原菌的檢出。無(wú)菌操作采集標(biāo)本時(shí)應(yīng)盡量減少或避免感染部位附近或皮膚黏膜正常菌群的污染，使病原菌與正常菌群混淆，造成臨床誤診。采集的標(biāo)本應(yīng)存放在無(wú)菌容器內(nèi)，容器不能使用消毒劑處理，標(biāo)本中也不能添加防腐劑，以免降低病原菌的檢出。適量的標(biāo)本標(biāo)本量過(guò)少可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。適當(dāng)?shù)牟杉椒▽?duì)于厭氧菌，需氧菌或兼性厭氧菌的采集方法是不同的，用于厭氧菌培養(yǎng)的標(biāo)本應(yīng)盡量用注射器采集抽取物，室溫保存，不能冷藏和冷凍。盛放標(biāo)本的容器采集標(biāo)本應(yīng)存放在無(wú)菌，防漏，應(yīng)帶有螺旋蓋的容器內(nèi)。3、標(biāo)本的運(yùn)送3.1標(biāo)本采集后立即送檢，若有延遲也應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室，否則會(huì)影響病原菌的檢出，一般性的細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本若需延遲送檢時(shí)，應(yīng)置于4度冰箱保存，且不能超過(guò)24小時(shí)。3.2.臨床標(biāo)本最佳運(yùn)送時(shí)間取決于標(biāo)本的量，少量液體（小于 1ml）或組織（小于1cm3）應(yīng)在15~30分鐘內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室，較多量的標(biāo)本置于運(yùn)送培養(yǎng)基中可放操作程序文件編號(hào)SOP-LJ-AQSS版本:1.0生效時(shí)間:2016.12.1第2頁(yè)/共6頁(yè)12~24小時(shí)，厭氧培養(yǎng)標(biāo)本原則上是床邊接種，如延遲送檢，需保存在厭氧運(yùn)送培養(yǎng)基中，室溫保存，不得超過(guò)24小時(shí)。4、不同標(biāo)本的采集，運(yùn)送血液標(biāo)本采集，運(yùn)送4.1.1血培養(yǎng)指針征當(dāng)患者出現(xiàn)：發(fā)熱（大于38度）或低溫（小于36度），寒戰(zhàn)，白細(xì)胞增多,皮膚黏膜出血，休克，多器官衰竭，血壓降低，c反應(yīng)蛋白升高及呼吸加快，血液病患者出現(xiàn)粒細(xì)胞減少，血小板減少等，具備上述一種或幾種體征時(shí)，臨床懷疑菌血癥應(yīng)采集血液標(biāo)本進(jìn)行血培養(yǎng)，對(duì)入院危重感染患者應(yīng)在未使用抗菌藥物治療前，及時(shí)做血培養(yǎng)。4.1.2對(duì)懷疑菌血癥、真菌血癥的患者，在考慮使用抗菌藥物之前，應(yīng)立即采集血培養(yǎng)標(biāo)本。必須同時(shí)或間隔短時(shí)間內(nèi)采集２套以上血培養(yǎng)標(biāo)本。成年患者：推薦同時(shí)采集２－３套（不同部位）血培養(yǎng)標(biāo)本（即雙瓶雙臂同時(shí)采集血培養(yǎng)標(biāo)本），采血量每瓶不少于5ml;嬰幼兒患者：推薦同時(shí)采集２次（不同部位）血培養(yǎng)標(biāo)本,采血量每瓶不少于2ml。（少于病人總血容量的1%）.在采取血培養(yǎng)后的2—5天內(nèi)，無(wú)需重復(fù)采取血培養(yǎng)。兩個(gè)例外：細(xì)菌性心內(nèi)膜炎和金黃色葡萄球菌菌血癥。4.1.3血標(biāo)本采集的量是影響檢出率的最重要的因素。檢出率與采血量成比例增長(zhǎng)，每增加1ml的血液，病原菌的檢出率就會(huì)相應(yīng)增加。兒童患者血液中病原菌濃度較高，血培養(yǎng)量無(wú)需等同于成人。采用一對(duì)（需氧瓶+厭氧瓶）組合，比采用二個(gè)需氧瓶的組合可檢出更多的葡萄球菌、腸桿菌科細(xì)菌和厭氧菌。采血量不能滿足推薦的量時(shí)，應(yīng)首先滿足需氧瓶的需要。推薦從外周靜脈采集血液標(biāo)本,不推薦靜脈留置導(dǎo)管，因其常伴有高污染率。如果必須從留置導(dǎo)管內(nèi)采血，也應(yīng)同時(shí)從外周靜脈采集另外一個(gè)血培養(yǎng)標(biāo)本以幫助陽(yáng)性結(jié)果的判讀。4.1.4血標(biāo)本采集的注意事項(xiàng)在采血之前，血培養(yǎng)瓶的橡皮塞需使用75%酒精消毒并干燥。然后再進(jìn)行穿刺部操作程序文件編號(hào)SOP-LJ-AQSS版本:1.0生效時(shí)間:2016.12.1第3頁(yè)/共6頁(yè)位的皮膚消毒。嚴(yán)格按照“酒精、含碘消毒劑、酒精”的消毒步驟操作，并等待足夠的消毒時(shí)間。嚴(yán)格無(wú)菌操作，不允許在皮膚消毒后用手接觸靜脈，除非帶有無(wú)菌手套.不推薦采血和接種血培養(yǎng)瓶更換注射器針頭;采集后的血培養(yǎng)瓶應(yīng)在1小時(shí)之內(nèi)送往實(shí)驗(yàn)室,血培養(yǎng)瓶在接種前和接種后均不得冷藏或冷凍。痰培養(yǎng)標(biāo)本采集，運(yùn)送4.2.1痰培養(yǎng)指征上呼吸道感染包括咽炎，喉炎，會(huì)咽炎等都可采集鼻，鼻咽，口咽拭子標(biāo)本培養(yǎng)。下呼吸道感染：凡是咳嗽，咳痰，痰呈膿性，粘稠或血性等都可采集痰標(biāo)本。4..2.2標(biāo)本的采集采集前囑咐病人先用清水漱口，摘去牙托，因唾液中口咽部定植菌的濃度可達(dá)108-109/ml，去除表面的菌群。教育病人深咳，收集從下呼吸道咳出的痰液。在抗生素應(yīng)用前采集痰標(biāo)本;標(biāo)本采集后1～2h內(nèi)送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理，采集標(biāo)本過(guò)程中要有專(zhuān)業(yè)的醫(yī)務(wù)人員指導(dǎo);無(wú)痰可用3％～5％NaCl5ml霧吸約5min導(dǎo)痰；也可用物理療法、體位引流、鼻導(dǎo)管抽吸等方法取痰。4.2.3正常的痰標(biāo)本低倍視野下鱗狀上皮細(xì)胞小于25個(gè)，白細(xì)胞大于10個(gè)。如果低倍視野下鱗狀上皮細(xì)胞大于25個(gè)，白細(xì)胞小于10個(gè)應(yīng)不做或僅在特殊要求時(shí)做培養(yǎng)，如做培養(yǎng)，報(bào)告中注明“鏡檢結(jié)果表明標(biāo)本口咽分泌物污染明顯”。4.2.4痰培養(yǎng)方法的局限性多數(shù)引起肺炎的病原菌不能培養(yǎng)出，如病毒，軍團(tuán)菌，衣原體等。影響因素很多：如黏液包裹、定植菌污染。建議痰培養(yǎng)同時(shí)做血培養(yǎng)和痰涂片鏡檢。4.2.5注意事項(xiàng)常規(guī)的痰培養(yǎng)需在2小時(shí)內(nèi)送檢，若懷疑嗜血桿菌，肺炎鏈球菌感染時(shí)必需隨留隨送;標(biāo)本中不能混入唾液與鼻咽分泌物等。尿培養(yǎng)標(biāo)本采集，運(yùn)送4.3.1尿培養(yǎng)指征尿路感染，腎結(jié)核，泌尿系結(jié)石，膀胱排空功能受損或前列腺增生等患者，出現(xiàn)操作程序文件編號(hào)SOP-LJ-AQSS版本:1.0生效時(shí)間:2016.12.1第4頁(yè)/共6頁(yè)尿頻，尿急，尿痛等膀胱刺激癥狀，肉眼膿尿或血尿，尿常規(guī)檢查有白細(xì)胞或亞硝酸鹽陽(yáng)性，，不明原因的發(fā)熱，尿道口有膿性分泌物等癥狀，需采集尿培養(yǎng)標(biāo)本送檢。4.3.2標(biāo)本的采集清潔中段尿液，囑咐患者用肥皂水清洗，棄去開(kāi)始流出的尿液，以沖刷尿道口的細(xì)菌，取能代表膀胱部位病原菌的中段尿；導(dǎo)尿管尿液，留置導(dǎo)管尿液標(biāo)本常通過(guò)專(zhuān)門(mén)的采樣端口采集，不能把導(dǎo)尿管與尿袋拔開(kāi)后收集尿液，采樣端口用酒精消毒；必要時(shí)，可先夾住導(dǎo)尿管但不能超過(guò)30分鐘；將注射器針頭插入采樣端口，抽吸出尿液；注入無(wú)菌杯或試管中。膀胱穿刺尿，無(wú)菌操作，用無(wú)菌注射器刺入膀胱抽取5—10ml尿液送檢，主要用于厭氧菌的培養(yǎng)或留取標(biāo)本困難的嬰幼兒標(biāo)本的采集，此法可避免尿液標(biāo)本的污染。標(biāo)本的采集量一般成人采集10-15ml,嬰幼兒不得少于1ml。診斷癥狀明顯的病人（如尿急、尿頻、尿痛），一份標(biāo)本就已足夠，治療48-72小時(shí)后再采集第二份標(biāo)本。對(duì)于癥狀不明顯的病人，需采集2-3份標(biāo)本。懷疑腎結(jié)核時(shí)，應(yīng)連續(xù)3天采集晨尿。4.3.4.室溫都有利于病原菌和污染菌生長(zhǎng)繁殖，標(biāo)本采集后立即送檢和接種，室溫下存放不能超過(guò)2小時(shí)，（夏季保存時(shí)間應(yīng)適當(dāng)縮短或冷藏），4-8度冷藏保存時(shí)間也不能超過(guò)24小時(shí)，冷藏的尿液不能用于淋球菌的培養(yǎng)。4.3.5注意事項(xiàng)必須無(wú)菌操作，采用帶蓋防滲漏的無(wú)菌杯收集，多次收集或24小時(shí)尿不能用作培養(yǎng)。集尿袋內(nèi)的尿液不能用作培養(yǎng)。導(dǎo)尿管末端的尿液也不能用于培養(yǎng)，很難避免沒(méi)有尿道菌群污染。在使用抗菌藥物前留取標(biāo)本，尿液中不能加任何防腐劑或消毒劑，抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)。4.4糞便標(biāo)本采集，運(yùn)送4.4.1送檢指征當(dāng)患者出現(xiàn)腹瀉，大便每天大于或等于3次，糞便的性狀異常，可為稀便，水樣便，粘液便，膿血便或血便，伴有惡心，嘔吐，食欲不振，發(fā)熱，腹痛及全身不操作程序文件編號(hào)SOP-LJ-AQSS版本:1.0生效時(shí)間:2016.12.1第5頁(yè)/共6頁(yè)適等，大便鏡檢白細(xì)胞大于等于5個(gè)每高倍視野，抗菌藥物治療后的腹瀉等。4.4.2標(biāo)本的采集方法，時(shí)間與量盡可能在發(fā)病早期（急性期）或應(yīng)用抗菌藥物治療之前，采集新鮮的糞便，懷疑沙門(mén)菌感染時(shí)，應(yīng)在發(fā)病2周以后采集。自然排便法，排便后，挑取有膿血或粘液部位的大便，液狀糞便取絮狀物盛于無(wú)菌的容器內(nèi)；直腸拭子采集法，用于排便困難的患者或嬰幼兒。一般用拭子采集大于2g的標(biāo)本送檢，若標(biāo)本為水樣，采集大于2ml的標(biāo)本于無(wú)菌容器中送檢。4.4.3標(biāo)本的運(yùn)送與保存標(biāo)本采集后應(yīng)盡快送檢，室溫條件下不能超過(guò)2小時(shí)，如不能及時(shí)送檢可加入ph7.0磷酸鹽甘油緩沖保存液中或?qū)ｉT(mén)的大便運(yùn)送培養(yǎng)基中置4度冰箱保存，但不能超過(guò)24小時(shí)。高度懷疑霍亂弧菌感染的標(biāo)本必須符合特殊標(biāo)本的安全要求。注意事項(xiàng)最好在用藥前，采集新鮮的標(biāo)本盛裝在無(wú)菌容器內(nèi)，立即送檢，提高陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果。厭氧菌的培養(yǎng)盡量避免與空氣接觸和正常的菌群污染。膿液及創(chuàng)傷感染分泌物標(biāo)本的采集及運(yùn)送4.5.1送檢指征凡是當(dāng)患者有外傷感染，術(shù)后切口感染，導(dǎo)管感染，臍帶殘端感染，有膿液和分泌物時(shí)，應(yīng)采集標(biāo)本培養(yǎng)。4.5.2.標(biāo)本的采集時(shí)間和方法在使用抗生素前或停用藥1—2天以后，或使用下一次抗生素前采集，對(duì)膿腫性分泌物應(yīng)先用生理鹽水或75%的酒精沖洗潰瘍表面滲出物，盡可能抽取膿液于無(wú)菌杯內(nèi)送檢。對(duì)于封閉性膿腫時(shí)，應(yīng)無(wú)菌操作抽取膿液3—10ml于無(wú)菌試管內(nèi)或血培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)送檢，懷疑厭氧菌感染時(shí)，應(yīng)做床旁接種或注入?yún)捬跗績(jī)?nèi)（3—10ml）送檢，最佳方法是采集組織送檢。4.5.3標(biāo)本的運(yùn)送標(biāo)本采集后應(yīng)于2小時(shí)內(nèi)送微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理，若不能及時(shí)送檢，需氧培養(yǎng)的標(biāo)本除對(duì)環(huán)境敏感的淋病奈瑟菌，腦膜炎奈瑟菌和流感嗜血桿菌外，可保存在操作程序文件編號(hào)SOP-LJ-AQSS版本:1.0生效時(shí)間:2016.12.1第6頁(yè)/共6頁(yè)4度冰箱中，但保存時(shí)間不能超過(guò)24小時(shí);厭氧培養(yǎng)時(shí)，需用厭氧瓶或厭氧袋在室溫下保存，但不能超過(guò)24小時(shí)。4.5.4注意事項(xiàng)盡可能在用抗生素前采集，若患者也用藥，應(yīng)在檢驗(yàn)單上注明抗菌藥名，并在下次用藥前采集；對(duì)于開(kāi)放性的傷口，采集前應(yīng)先除去表面污染菌，以防帶入與感染無(wú)關(guān)的皮膚定值菌。干燥結(jié)痂的標(biāo)本一般不做培養(yǎng)，除非有滲出物。采集標(biāo)本時(shí)應(yīng)無(wú)菌操作。穿刺液標(biāo)本的采集與運(yùn)送穿刺液主要包括腦脊液，胸腹水，心包液，膽汁，關(guān)節(jié)液及鞘膜液，