生物化學教學課件：第一章 蛋白質(zhì)

第一篇

生物大分子的結(jié)構(gòu)與功能蛋白質(zhì)protein核酸nucleicacid酶enzyme第一章

蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能proteinPro,Pr,P什么是蛋白質(zhì)?蛋白質(zhì)(protein)是由許多氨基酸(aminoacids)通過肽鍵(peptidebond)相連形成的高分子含氮化合物。蛋白質(zhì)的生物學功能作為生物催化劑（酶）代謝調(diào)節(jié)作用免疫保護作用物質(zhì)的轉(zhuǎn)運和存儲運動與支持的作用參與細胞間信息傳遞氧化供能

蛋白質(zhì)是生物體的基本組成成分之一，幾乎參與了生命活動的所有過程。含量：約占固體成分的近1/2（45%）

種類：一個真核細胞達數(shù)千種，每一種均有其特定的結(jié)構(gòu)與功能分布廣，含量高第一節(jié)蛋白質(zhì)的分子組成碳、氫、氧、氮

、硫（C、H、O、N、S

）以及磷、鐵、銅、鋅、碘、硒元素組成:

蛋白質(zhì)平均含氮量（N%）：16%∴蛋白質(zhì)含量=含氮克數(shù)×6.25（凱氏定氮法）1/16%存在自然界中的氨基酸有300余種，但組成人體蛋白質(zhì)(參與編碼蛋白質(zhì)的)的基本氨基酸僅有20種。一、基本組成單位——氨基酸(aminoacid,AA)H甘氨酸CH3丙氨酸L-氨基酸的通式RC+NH3COO-H1.

20種AA中除Pro外，與羧基相連的α-碳原子上都有一個氨基，因而稱α-氨基酸。2.

不同的α-AA，其R側(cè)鏈不同。氨基酸R側(cè)鏈對蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)有重要影響。3.

除Gly的R側(cè)鏈為H原子外，其他AA的α-碳原子都是不對稱碳原子，可形成不同的構(gòu)型，因而具有旋光性。組成人體蛋白質(zhì)的氨基酸都為L-α-AA（Gly,Pro除外）。二、氨基酸的分類按側(cè)鏈的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)可分為：

非極性、脂肪族氨基酸

極性、中性氨基酸

芳香族氨基酸

酸性氨基酸

堿性氨基酸甘氨酸

glycine

Gly

G

5.97丙氨酸

alanineAlaA

6.00纈氨酸

valineValV

5.96亮氨酸

leucine

LeuL

5.98

異亮氨酸

isoleucineIleI

6.02

苯丙氨酸

phenylalaninePheF

5.48脯氨酸

prolineProP

6.30亞氨基酸Phe脯氨酸Pro吡咯烷環(huán)--雜環(huán)氨基酸1.非極性脂肪族氨基酸(側(cè)鏈含烴鏈的氨基酸)2.極性中性氨基酸(側(cè)鏈有極性但不帶電荷的氨基酸)3.芳香族氨基酸(側(cè)鏈含芳香基團的氨基酸)TrpTyr天冬氨酸

asparticacidAspD

2.97

谷氨酸

glutamicacidGluE

3.22

賴氨酸

lysineLysK

9.74精氨酸

arginine

ArgR

10.76組氨酸

histidineHisH

7.595.堿性氨基酸εδγβδ-胍基咪唑基—雜環(huán)氨基酸δγβγβ4.酸性氨基酸芳香族氨基酸：含羥基氨基酸：含硫氨基酸：堿性氨基酸：酸性氨基酸亞氨基酸：支鏈氨基酸：Trp、Tyr、PheSer、Thr、TyrCys、MetHis、Arg、LysAsp、GluProVal、Leu、Ile幾種特殊氨基酸

脯氨酸（亞氨基酸）

半胱氨酸+胱氨酸二硫鍵-HH修飾氨基酸：

蛋白質(zhì)合成后通過修飾加工生成的氨基酸。沒有相應(yīng)的編碼。如：胱氨酸、羥脯氨酸（Hyp）、羥賴氨酸（Hyl）。不構(gòu)成人體蛋白的氨基酸：人體蛋白質(zhì)中不存在的氨基酸。如：瓜氨酸、鳥氨酸、同型半胱氨酸，是代謝途徑中產(chǎn)生的。1968年美國Dudrick，在研究人體營養(yǎng)學工作中，利用結(jié)晶氨基酸配出了氨基酸輸液，挽救了很多病人的生命。用于大面積燒傷、創(chuàng)傷及嚴重感染等應(yīng)激狀態(tài)下肌肉分解代謝亢進、消化系統(tǒng)功能障礙、營養(yǎng)惡化及免疫功能下降的病人的營養(yǎng)支持，亦用于手術(shù)后病人，改善其營養(yǎng)狀態(tài)。氨基酸營養(yǎng)輸液是繼“疫苗”、“維生素”、“抗生素”之后，被譽為二十世紀醫(yī)療史上的四個里程碑。

氨基酸注射液三、20種氨基酸具有共同或特異的理化性質(zhì)兩性解離及等電點氨基酸是兩性電解質(zhì)，其解離程度取決于所處溶液的酸堿度。

等電點(isoelectricpoint,pI)

在某一pH的溶液中，氨基酸解離成陽離子和陰離子的趨勢及程度相等，成為兼性離子，呈電中性。此時溶液的pH值稱為該氨基酸的等電點。1.

氨基酸具有兩性解離的性質(zhì)pH=pI+OH-pH>pI+H++OH-+H+pH<pI氨基酸的兼性離子陽離子陰離子

含有共軛雙鍵的芳香族氨基酸Trp,Tyr的最大吸收峰在280nm波長附近。2.紫外吸收性質(zhì)酪氨酸色氨酸波長nm苯丙氨酸02302402502602702802906543

該藍紫色化合物在570nm波長處有最大吸收，可用于氨基酸的定量分析。3.茚三酮反應(yīng)藍紫色化合物（一）氨基酸通過肽鍵連接成肽肽鍵(peptidebond)是由一個氨基酸的-羧基與另一個氨基酸的-氨基脫水縮合而形成的化學鍵。四、肽與肽鍵(peptideandpeptidebond)+-HOH甘氨酰甘氨酸肽鍵*

肽是由氨基酸通過肽鍵縮合而形成的化合物。*

兩分子氨基酸縮合形成二肽，三分子氨基酸縮合則形成三肽……*

肽鏈中的氨基酸分子因為脫水縮合而基團不全，被稱為氨基酸殘基(residue)。*

由十個以內(nèi)氨基酸相連而成的肽稱為寡肽(oligopeptide)，由更多的氨基酸相連形成的肽稱多肽(polypeptide)。氨基酸殘基(residue)谷胱甘肽（glutathione,GSH）還原型氧化型γ-肽鍵(1)體內(nèi)重要的還原劑保護蛋白質(zhì)和酶分子中的巰基免遭氧化，使蛋白質(zhì)處于活性狀態(tài)。

(2)谷胱甘肽的巰基作用可以與致癌劑或藥物等結(jié)合,從而阻斷這些化合物與DNA、RNA或蛋白質(zhì)結(jié)合，保護機體免遭毒性損害。促甲狀腺素釋放激素（3肽）

由下丘腦分泌，促進腺垂體分泌促甲狀腺素。第二節(jié)蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)

蛋白質(zhì)是氨基酸通過肽鍵相連形成的具有三維結(jié)構(gòu)的生物大分子。一般將蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)分為四個層次來學習。Ribulose-1,5-bisphosphatecarboxylase/oxygenase蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)層次一二一二

蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)就是蛋白質(zhì)多肽鏈中氨基酸殘基的排列順序。主要化學鍵是肽鍵，有的還包含二硫鍵。一、蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)(primarystructure)一級結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)空間構(gòu)象和特異生物學功能的基礎(chǔ)。二、蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)(secondarystructure)二級結(jié)構(gòu)的主要結(jié)構(gòu)單位——肽單元（peptideunit）二級結(jié)構(gòu)的主要化學鍵——氫鍵(hydrogenbond)

*

蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)是指多肽鏈中主鏈骨架原子的局部空間排布，不涉及氨基酸側(cè)鏈的構(gòu)象。

*穩(wěn)定因素：氫鍵肽單元（peptideunit）參與肽鍵的6個原子C1、C、O、N、H、C2位于同一平面，C1和C2在平面上所處的位置為反式(trans)構(gòu)型，此同一平面上的6個原子構(gòu)成了所謂的肽單元(peptideunit)

。

肽單元具有這樣一些特性：

(1)早在1925年，Pauling等人就發(fā)現(xiàn)，肽鍵中的C-N比相鄰的C-N單鍵短，而較一般C=N雙鍵長?？梢?，肽鍵中-C-N-鍵的性質(zhì)介于單、雙鍵之間，具有部分雙鍵的性質(zhì)，因而不能旋轉(zhuǎn)，這就將其固定在一個平面之內(nèi)。

(2)肽鍵平面

肽鍵的C及N周圍三個鍵角之和均為360°，說明都處于一個平面上，也就是說肽單元的六個原子基本上同處于一個平面，是一個剛性平面，這就是肽平面。

(3)肽鍵中的C-N既然具有雙鍵性質(zhì)，就會有順反不同的立體異構(gòu)，已證實肽單元兩個α-碳原子呈反向分布。α-螺旋

(α-helix)β-折疊(β-pleatedsheet)β-轉(zhuǎn)角

(β–turnorβ-bend)無規(guī)卷曲

(randomcoil)肽鏈中能夠旋轉(zhuǎn)的只有α-碳原子所形成的單鍵，肽單元上Cα所連的兩個單鍵的旋轉(zhuǎn)角度，決定兩個相連肽單元的相對空間位置，肽平面成為肽鏈盤曲折疊的基本單位。由于肽平面和氨基酸殘基側(cè)鏈R基對多肽鏈構(gòu)象的限制作用，二級結(jié)構(gòu)只有以下幾種主要形式：常見的蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)①多個肽平面通過Cα的旋轉(zhuǎn)，相互之間緊密盤曲成穩(wěn)固的右手螺旋。

α-helix

② 主鏈螺旋上升，每3.6個氨基酸殘基上升一圈，螺距0.54nm。肽平面和螺旋長軸平行。α-helix

③相鄰兩圈螺旋之間借肽鍵中羰基氧(C＝O)和亞氨基氫(NH)形成許多鏈內(nèi)氫鍵，即每一個氨基酸殘基中的亞氨基氫和前面相隔三個殘基的羰基氧之間形成氫鍵，這是穩(wěn)定α-螺旋的主要化學鍵。α-helix

④肽鏈中氨基酸殘基側(cè)鏈R基，分布在螺旋外側(cè)，其形狀、大小及電荷均會影響α-螺旋的形成。α-helix

①是肽鏈相當伸展的結(jié)構(gòu)，肽平面之間折疊成鋸齒狀，相鄰肽平面間呈110°角。

②依靠兩條肽鏈或一條肽鏈內(nèi)的兩段肽鏈間的羰基氧與亞氨基氫形成氫鍵，使構(gòu)象穩(wěn)定。也就是說，氫鍵是穩(wěn)定β-折疊的主要化學鍵。

β-pleatedsheet

③兩段肽鏈可以是平行的，也可以是反平行的。即前者兩條鏈從N端到C端是同方向的，后者是反方向的。β-折疊結(jié)構(gòu)的形式十分多樣，正、反平行還可以相互交替。平行的β-折疊結(jié)構(gòu)中，兩個殘基的間距為0.65nm；反平行的β-折疊結(jié)構(gòu)，則間距為0.7nm。

④氨基酸殘基的側(cè)鏈R基分布在片層的上方或下方。β–turn蛋白質(zhì)分子中，肽鏈經(jīng)常會出現(xiàn)180°的回折，在這種回折角處的構(gòu)象就是β-轉(zhuǎn)角(β-turn)或稱β-折角(β-bend)。

β-轉(zhuǎn)角中，第一個氨基酸殘基的羰基氧與第四個殘基的亞氨基氫形成氫鍵，從而使結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。氫鍵

無規(guī)卷曲是用來闡述沒有確定規(guī)律性的那部分肽鏈結(jié)構(gòu)?！盁o規(guī)卷曲”也像其它二級結(jié)構(gòu)那樣是明確而穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)，但是它們受氨基酸殘基側(cè)鏈R基相互作用的影響很大。這類結(jié)構(gòu)經(jīng)常構(gòu)成酶活性部位和其它蛋白質(zhì)特異的功能部位。Randomcoil

許多蛋白質(zhì)分子中可以有二個或三個具有二級結(jié)構(gòu)的肽段，在空間位置上相互接近，形成特殊的空間結(jié)構(gòu)，稱其為“模體”（motif）。模體是具有特殊功能的超二級結(jié)構(gòu)-螺旋鈣結(jié)合蛋白中結(jié)合鈣離子的模體α-螺旋-β轉(zhuǎn)角（或環(huán)）-α-螺旋模體鏈-β轉(zhuǎn)角-鏈模體鏈-β轉(zhuǎn)角-α-螺旋-β轉(zhuǎn)角-鏈模體模體常見的形式鋅指模體結(jié)構(gòu)鋅指模體存在于類固醇激素受體超家族和一些轉(zhuǎn)錄因子中，屬DNA結(jié)合蛋白。鋅指模體約由30個氨基酸殘基組成。4個半胱氨酸殘基或2個半胱氨酸殘基和2個組氨酸殘基與1個鋅離子配價結(jié)合。其中前一對半胱氨酸殘基與后一對半胱氨酸（或組氨酸）殘基之間相隔12個氨基酸殘基。鋅指模體的-螺旋部分是與DNA結(jié)合的部位。Zn組氨酸殘基半胱氨酸殘基-折疊-折疊-螺旋ZnYKCGERSFVEKSALSRHQRVHKNCLZn三、蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)(tertiarystructure)

蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)是指多肽鏈在二級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上,由于氨基酸殘基側(cè)鏈R基的相互作用進一步盤曲或折迭而形成的特定構(gòu)象。也就是整條多肽鏈中所有原子或基團在三維空間的排布位置。

肌紅蛋白(myoglobin,Mb)一條長為153個氨基酸的多肽鏈和一個血紅素輔基組成。共有8段-螺旋結(jié)構(gòu)(A-H）功能:儲存O2

蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)的形成和穩(wěn)定主要靠次級鍵，包括氫鍵、鹽鍵、疏水鍵以及范德華力等。此外，某些蛋白質(zhì)中二硫鍵也起著重要的作用。二硫鍵

結(jié)構(gòu)域(domain):大分子蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)?？煞指畛梢粋€或數(shù)個球狀或纖維狀的區(qū)域，各自折疊得較為緊密，并且行使各自的功能。

分子伴侶分子伴侶(chaperon)可以幫助蛋白質(zhì)正確折疊：通過提供一個保護環(huán)境從而加速蛋白質(zhì)折疊成天然構(gòu)象或形成四級結(jié)構(gòu)。*幫助形成正確的高級結(jié)構(gòu)*使錯誤聚集的肽段解聚，再誘導其正確折疊。*幫助形成二硫鍵熱休克蛋白Heatshockproteins,

HSPs

幫助新生蛋白質(zhì)的正確折疊、裝配、跨膜運輸和轉(zhuǎn)位，阻止蛋白質(zhì)的變性和聚集；參與錯誤折疊的蛋白質(zhì)的水解，抑制錯誤折疊的蛋白質(zhì)的分泌。四、蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)（quaternarystructure）血紅蛋白四級結(jié)構(gòu)示意圖

主要穩(wěn)定因素：氫鍵、離子鍵

由兩個或兩個以上亞基之間彼此以非共價鍵相互作用形成的更為復雜的空間構(gòu)象，稱為蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)。血紅蛋白結(jié)構(gòu)示意圖蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)

按組成成分：

單純蛋白（僅含氨基酸）結(jié)合蛋白（單純蛋白+輔基）

按形狀分：球蛋白纖維蛋白五、蛋白質(zhì)的分類第三節(jié)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系一、蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系

蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)是空間結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)決定蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)，進而決定蛋白質(zhì)的生物學功能。天然狀態(tài)，有催化活性尿素、β-巰基乙醇去除尿素、β-巰基乙醇非折疊狀態(tài),無活性Anfinsen經(jīng)典實驗核糖核酸酶2.相似的一級結(jié)構(gòu)有相同或相似的生物學功能鐮刀狀紅細胞性貧血:β亞基N端的第6位氨基酸殘基發(fā)生了改變，Glu→Val,這種變異來源于基因上遺傳信息的突變。正常DNA……TGTGGGCTTCTTTTT

mRNA……ACACCCGAAGAAAAA

HbAN端SerProGlu

GluLys異常DNA……TGTGGGCATCTTTTTmRNA……ACACCCGUAGAAAAA

HbSN端SerProVal

GluLys

分子?。旱鞍踪|(zhì)分子發(fā)生變異所導致的疾病3.一級結(jié)構(gòu)關(guān)鍵部位的改變影響其生物學活性鐮刀型紅細胞正常紅細胞在氧張力低的毛細血管區(qū)，HbS形成管狀凝膠結(jié)構(gòu)（如棒狀結(jié)構(gòu)），導致紅細胞扭曲成鐮刀狀。這種僵硬的鐮狀紅細胞不能通過毛細血管，加上HbS的凝膠化使血液的黏滯度增大，阻塞毛細血管，引起局部組織器官缺血缺氧，產(chǎn)生脾腫大、胸腹、肌肉疼痛等臨床表現(xiàn)。肌紅蛋白（myoglobin,Mb）單體，153AA血紅蛋白（hemoglubin,Hb）四聚體，

α2β2(α2γ2,α2ε2)α:141AA,β(γ,ε):146AA二、蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系Mb與Hb氧合曲線的比較◆氧飽和度=×100%◆Mb與氧氣有著高度親和力，其曲線為雙曲線?！?/p>

與Mb相比，

Hb與氧氣的親和力較低。其曲線為S形曲線，表明Hb中各個亞基與氧氣的親和力不一致。Hb中第一個亞基與氧氣結(jié)合后，將促進后續(xù)亞基與氧氣的結(jié)合。這是由Hb的變構(gòu)效應(yīng)導致的。其作用在于使Hb能夠更有效地運輸氧氣。

MbO2MbO2+Mb~1mmHgHb的變構(gòu)效應(yīng)也稱別構(gòu)效應(yīng)

一個亞基與配體結(jié)合后，影響另一亞基與配體的結(jié)合能力。促進——正協(xié)同效應(yīng)抑制——負協(xié)同效應(yīng)協(xié)同效應(yīng)蛋白質(zhì)折疊病瘋牛病是由朊病毒蛋白(prionprotein,PrP)引起的具有傳染性、遺傳性的神經(jīng)退行性病變。PrP是由染色體基因編碼的分子量為33-35kD的蛋白質(zhì)。動物和人的正常PrP水溶性強、對蛋白酶敏感，含有多個α-螺旋，稱為PrPC。PrPC通過某種機制可轉(zhuǎn)變成全為β-折疊的PrP(稱為PrPSC)。PrPSC水溶性差、對蛋白酶耐受、熱穩(wěn)定、而且可以傳染給其他個體，并致使其他個體中正常的PrPC通過某種機制重新折疊成PrPSC。最后PrPSC可以相互聚集，形成淀粉樣沉淀而致病。

蛋白質(zhì)是由氨基酸組成的大分子化合物，其理化性質(zhì)一、蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)

第四節(jié)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)及其分離純化一部分與氨基酸相似，如兩性電離及等電點、紫外吸收、呈色反應(yīng)等。也有一部分又不同于氨基酸，如高分子量、膠體性質(zhì)、沉淀、變性和凝固等。蛋白質(zhì)的兩性電離及等電點蛋白質(zhì)的等電點（pI）

在某一溶液中，蛋白質(zhì)所帶正負電荷相等，凈電荷為零時，此時該溶液的pH值即為該蛋白質(zhì)的等電點(isoelectricpoint，pI)。蛋白質(zhì)的吸收光譜及幾種呈色反應(yīng)蛋白質(zhì)的特征紫外吸收光波長—280nm

（Trp、Tyr的貢獻）2.呈色反應(yīng)——?？捎糜诘鞍踪|(zhì)定量雙縮脲反應(yīng)(BiuretReaction)兩個或兩個以上的肽鍵在堿性條件下與Cu2+反應(yīng)生成紫紅色物質(zhì)Folin-酚試劑反應(yīng)蛋白質(zhì)分子中的Tyr在堿性條件下與酚試劑生成藍色化合物茚三酮反應(yīng)蛋白質(zhì)分子中的游離氨基和羧基與茚三酮加熱生成藍紫色化合物蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)

蛋白質(zhì)分子量頗大，可自一萬至百萬之巨，故其分子的大小已達到膠粒1～100nm范圍之內(nèi)。因此蛋白質(zhì)溶液具有膠體溶液的性質(zhì)。穩(wěn)定該親水膠體的因素是：水化膜、顆粒表面電荷。+++++++帶正電荷的蛋白質(zhì)－－－－－－－－帶負電荷的蛋白質(zhì)在等電點的蛋白質(zhì)水化膜++++++++帶正電荷的蛋白質(zhì)－－－－－－－－帶負電荷的蛋白質(zhì)不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒酸堿酸堿酸堿脫水作用脫水作用脫水作用溶液中蛋白質(zhì)的聚沉

天然蛋白質(zhì)在某些物理或化學因素作用下，其特定的空間結(jié)構(gòu)被破壞，從而導致理化性質(zhì)改變和生物學活性的喪失，稱為蛋白質(zhì)的變性作用(denaturation)。變性主要是二硫鍵及非共價鍵的斷裂，并不涉及一級結(jié)構(gòu)氨基酸序列的改變。蛋白質(zhì)的變性----吳憲最早提出

變性因素：加熱、有機溶劑、強酸、強堿、重金屬等蛋白質(zhì)的沉淀

蛋白質(zhì)變性后，疏水基團暴露，相互之間容易聚集而發(fā)生沉淀。值得注意的是，有時蛋白質(zhì)發(fā)生沉淀，但并不變性。蛋白質(zhì)變性的應(yīng)用：利用：高溫、高壓滅菌利用：低溫保存酶、疫苗等，防止蛋白質(zhì)變性。

變性并非是不可逆的變化，當變性程度較輕時，如去除變性因素，有的蛋白質(zhì)仍能恢復或部分恢復其原來的構(gòu)象及功能，變性的可逆變化稱為復性（renaturation）。

蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與特點：膠體性質(zhì)；沉淀；變性與復性；凝固。分離與純化就是利用蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)和特點！蛋白質(zhì)的分離和純化鹽析（saltprecipitation）：中性鹽（硫酸銨等），分段鹽析有機試劑沉淀：乙醇、丙酮，低溫免疫沉淀：抗原-抗體

透析（dialysis）：半透膜層析（chromatography）：離子交換層析、親和層析、凝膠柱層析離心、超速離心(ultracentrifugation)：沉降系數(shù)S電泳(electrophoresis):pI分子量的大小一、透析和超濾法可去除蛋白質(zhì)溶液中的小分子化合物應(yīng)用正壓或離心力使蛋白質(zhì)溶液透過有一定截留分子量的超濾膜，達到濃縮蛋白質(zhì)溶液的目的。透析(dialysis)超濾法利用透析袋把大分子蛋白質(zhì)與小分子化合物分開的方法。透析(dialysis):磁力攪拌器透析前透析后透析袋通過透析，小分子通透透析袋，散布于透析液中，大分子量的蛋白質(zhì)不能通透透析袋，留在透析袋內(nèi)。從而，蛋白質(zhì)溶液中的小分子物質(zhì)通過透析被分離除去。透析技術(shù)

在一定的壓力下，使蛋白質(zhì)溶液在通過一定孔徑的超濾膜時，小分子量物質(zhì)濾過，而大分子量的蛋白質(zhì)被截留，從而達到分離純化的目的。這種方法既可以純化蛋白質(zhì)，又可達到濃縮蛋白質(zhì)溶液的目的。磁力攪拌器待超濾的蛋白質(zhì)溶液加壓的氮氣超濾膜超濾（ultrafiltration）:二、丙酮沉淀、鹽析及免疫沉淀是常用的蛋白質(zhì)沉淀方法使用丙酮沉淀時，必須在0～4℃低溫下進行，丙酮用量一般10倍于蛋白質(zhì)溶液體積。蛋白質(zhì)被丙酮沉淀后，應(yīng)立即分離。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。鹽析(saltprecipitation)是將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質(zhì)溶液，使蛋白質(zhì)表面電荷被中和以及水化膜被破壞，導致蛋白質(zhì)沉淀。免疫沉淀法：將某一純化蛋白質(zhì)免疫動物可獲得抗該蛋白的特異抗體。利用特異抗體識別相應(yīng)的抗原蛋白，并形成抗原抗體復合物的性質(zhì)，可從蛋白質(zhì)混合溶液中分離獲得抗原蛋白。