《動物細胞工程》課件

動物細胞工程提問：植物細胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物組織培養(yǎng),植物體細胞雜交這些技術(shù)的理論基礎(chǔ)：植物細胞的全能性動物細胞全能性如何？二、動物細胞工程常用技術(shù)動物細胞培養(yǎng)動物細胞融合單克隆抗體胚胎移植核移植動物細胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。觀看示意圖簡述融合過程？2、誘導(dǎo)動物細胞融合的方法3、動物細胞融合的用途制備單克隆抗體：仙臺病毒紫外線喪失感染活性（不感染細胞）保留融合活性（誘導(dǎo)細胞融合）物理法化學(xué)法生物法思考：（1）請概括單克隆抗體的概念（2）根據(jù)阿根廷科學(xué)家米爾斯坦和德國科學(xué)家柯勒設(shè)計的實驗方案，思考實驗過程與原理？（3）為什么用小鼠骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合？單克隆抗體制備過程中應(yīng)用哪些細胞工程技術(shù)手段？制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選？(三)單克隆抗體提出問題：長期以來，人們?yōu)榱双@得抗體，采用的是把某種抗原反復(fù)注射到動物體內(nèi)，然后從動物血清中分離出所需抗體的方法。用這種方法獲得的抗體，不僅產(chǎn)量低，而且抗體的特異性差，純度低，反應(yīng)不夠靈敏。1.概括單克隆抗體的概念單：單個細胞克隆:無性繁殖抗體:化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強實驗?zāi)康?制備單克隆抗體.實驗原理：實驗材料：小白鼠實驗器材：培養(yǎng)皿、針筒等等。實驗過程：？2.根據(jù)阿根廷科學(xué)家米爾斯坦和德國科學(xué)家柯勒設(shè)計的實驗方案，回答下列問題：B淋巴細胞能產(chǎn)生抗體，骨髓瘤細胞能無限增殖，雜交瘤細胞既能產(chǎn)生抗體又能無限增殖。（1）為什么用小鼠骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合？思考：（2）單克隆抗體制備過程中應(yīng)用哪些細胞工程技術(shù)手段？（3）制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選？單克隆抗體有何應(yīng)用？主要用于疾病的診斷、治療和預(yù)防。與常規(guī)抗體相比，具有特異性強、靈敏度高的優(yōu)點。如；各種癌癥、肝炎病毒、SARS病毒、細菌及血吸蟲等數(shù)百種疾病的診斷；在疾病治療方面，單克隆抗體猶如人體衛(wèi)士，能識別“自己”與“異己”，一旦發(fā)現(xiàn)致病因素便與之結(jié)合將其殺死。若在單抗上帶上抗癌藥物制成“生物導(dǎo)彈”，將藥物定向帶到癌細胞所在部位，既消滅了癌細胞又不會傷害健康細胞。絕大多數(shù)的單克隆抗體(mAb)是用小鼠開發(fā)的，雖然可作為研究和診斷的工具，但它們至少在一定程度上不是理想的治療劑，：因為它們在人類中有免疫原性。也就是說，小鼠抗體引入到病人體內(nèi)，將被病人的免疫系統(tǒng)識別為外源物質(zhì)，并將發(fā)生有損治療抗體利用的人抗鼠抗體(HAMA)應(yīng)答。已經(jīng)通過將這些鼠的抗體人源化或直接制備人的mAb來解決。直接制備人的mAb

通過人的B細胞與骨髓瘤細胞融合，已經(jīng)制成了人的抗體，雖然這曾是十分困難的，并且通常在融合前需要用EB病毒感染以無限增殖B細胞。這種方法由于使用病毒而不理想，產(chǎn)生的mAb的特異性是有限的，抗體的產(chǎn)量也很少。最近，通過用人免疫球蛋白基因取代小鼠免疫球蛋白基因創(chuàng)建了產(chǎn)生人抗體的小鼠。因此，當(dāng)小鼠被免疫時它直接制造出對該抗原的人的抗體，并且產(chǎn)生這些抗體的B細胞可與骨髓瘤細胞融合，產(chǎn)生制造人mAb的雜交瘤。細胞融合技術(shù)、細胞培養(yǎng)技術(shù)。第一次篩選得到雜交瘤細胞，第二次篩選先在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個雜交瘤細胞下培養(yǎng)篩選出特異抗體的細胞群。動物細胞培養(yǎng)液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。與植物培養(yǎng)基相比其特點是：（1）液體培養(yǎng)基（2）含有動物血清動物體細胞大都生活在液體的環(huán)境保證細胞順利的生長增殖細胞懸浮液10代細胞50代細胞無限傳代原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細胞株細胞系如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；細胞株和細胞系？多數(shù)組織細胞固定在表面生長和分裂。隨細胞增多，細胞就會停止分裂增殖遺傳物質(zhì)改變動物細胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用（1）生產(chǎn)蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。（2）獲得大量自身的皮膚細胞，用于植皮。（3）用于檢測有毒物質(zhì)（4）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)這只老鼠身上的“人耳”是由我國科學(xué)家曹誼林教授利用細胞工程技術(shù)復(fù)制出來的。拓展：聚乙二醇處理后，培養(yǎng)液中存在哪幾種細胞？脾-脾脾-瘤瘤-瘤未融合的脾細胞未融合的瘤細胞解析：

（1）試管中有人的淋巴細胞和小鼠骨髓瘤細胞，在促溶劑的作用下，可能出現(xiàn)以下3種細胞的融合情況，人的淋巴細胞和淋巴細胞融合，小鼠的骨髓瘤細胞和骨髓瘤細胞融合，人的淋巴細胞和小鼠的骨髓瘤細胞融合，實驗需要的是第3種細胞，即雜交瘤細胞；

（2）要將雜交瘤細胞分離出來，可以在培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖的細胞；加入氨基嘌呤后，使D合成途徑阻斷，僅有D合成途徑的骨髓瘤細胞及其彼此融合的細胞就不能增殖，但人淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后的雜種細胞中可以利用淋巴細胞中的S途徑合成DNA而增殖。變式訓(xùn)練生產(chǎn)單克隆抗體時，要在培養(yǎng)液中加入某種試劑才能篩選出雜交瘤細胞，因為該試劑A．能抑制淋巴細胞和雜交瘤細胞的DNA復(fù)制B．能阻止淋巴細胞的原癌基因被激活C．選擇性抑制骨髓瘤細胞的DNA復(fù)制D．能阻止雜交瘤細胞核糖體上所有蛋白質(zhì)的合成解析：（3）B株有a酶活性，通過表格可以看出B株有6號染色體而A、C株沒有，說明控制a酶活性的基因位于6號染色體上。控制其它酶的基因所在的染色體位置以此類推。答案：6；1；2；7；8。獲得細胞細胞的全能性細胞株、細胞系植物體培養(yǎng)結(jié)果或細胞產(chǎn)物快速繁殖、培育無病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細胞增殖原理動物細胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法使細胞分散后誘導(dǎo)細胞融合去除細胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合細胞融合的方法細胞膜的流動性細胞膜的流動性、植物細胞全能性細胞融合的原理動物細胞融合植物體細胞雜交比較項目比較項目植物、動物細胞融合的比較三、動物細胞工程(一)