微生物實(shí)驗(yàn)課件：實(shí)驗(yàn)4

實(shí)驗(yàn)四一.藥敏試驗(yàn)

K-B法（示教）E試驗(yàn)（示教）微量稀釋法（操作，1份/組）二.抗“O”試驗(yàn)—膠乳法（操作，1份/組）三.鏈球菌菌落（示教）四.奈瑟菌鏡下形態(tài)（示教）五.病例一[1]討論

K-B(紙片擴(kuò)散）法原理：含抗菌藥物的紙片貼在已接種菌的瓊脂平板上，藥物吸取瓊脂的水分溶解后向紙片周圍擴(kuò)散，形成透明的抑菌圈。

MIC:最低抑菌濃度。抑菌圈越大，MIC越小>24mm>15mm結(jié)果判讀：用毫米尺量取抑菌圈直徑，參照標(biāo)準(zhǔn)判讀可以觀察一種細(xì)菌對(duì)多種藥物的作用，也可以觀察一種藥物對(duì)多種細(xì)菌的作用。微量稀釋法材料：營(yíng)養(yǎng)肉湯、藥液、測(cè)試菌液、加樣槍、酶標(biāo)條等方法：1.1-11孔：營(yíng)養(yǎng)肉湯100μl/孔；

12孔：200μl肉湯。

2.1孔：Pen(128IU/ml)100μl,依次作倍比稀釋至10孔；

3.加菌液自11孔開始至1孔每孔100μl4.混勻，反復(fù)吹打

注意加菌液時(shí)按12→1的順序加樣。100ul100ul1112只有肉湯肉湯＋菌液結(jié)果判讀37。C，24h后肉湯對(duì)照肉湯+菌液對(duì)照測(cè)試菌不出現(xiàn)肉眼可見生長(zhǎng)的最低藥物濃度為該藥對(duì)測(cè)試菌的MIC清澈渾濁，甚至出現(xiàn)沉淀E試驗(yàn)E試驗(yàn)試條:

寬5mm，長(zhǎng)50mm，內(nèi)含干化，穩(wěn)定的，濃度由高至低呈指數(shù)梯度分布的一種抗菌藥物的商品化塑料試條。試條上面用數(shù)字標(biāo)出所含藥物的濃度刻度（ug/ml），濃度梯度范圍一般為15個(gè)自然對(duì)數(shù)

E試驗(yàn)結(jié)合了稀釋法和擴(kuò)散法的原理和特點(diǎn)，可以直接定量測(cè)出抗菌藥物對(duì)測(cè)試菌的MIC，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好。140mm平板結(jié)果判讀

橢圓的抑菌圈和試條的橫向相交處的讀數(shù)刻度即是該測(cè)定抗菌藥物對(duì)測(cè)試均的最低抑菌濃度選擇題：下列可用于做定量藥敏試驗(yàn)的方法有：A：試管法B：微量稀釋法C：E試驗(yàn)D:KB法抗“

O”實(shí)驗(yàn)（膠乳法）乙型溶血性鏈球菌能產(chǎn)生鏈球菌溶血素“O”，其能溶解紅細(xì)胞，對(duì)氧敏感，可使之暫時(shí)失去溶血能力，但若加入還原劑又可恢復(fù)其溶血作用溶血素“O”有很強(qiáng)的抗原性，人受乙型溶血性鏈球菌感染2-3周就能產(chǎn)生抗鏈球菌溶血素“O”抗體，此抗體可中和溶血素“O”的活性。原理鏈球菌溶血素“O”抗“O”抗體（血清中）鏈球菌溶血素“O”

羧化聚苯乙烯膠乳ASO膠乳試劑（Ag）肉眼可見的凝集反應(yīng)+試劑

1.ASO膠乳試劑（藍(lán)色瓶蓋）

2.陽(yáng)性對(duì)照＞200IU/ml（紅色瓶蓋）

3.陰性對(duì)照＜200IU/ml（綠色瓶蓋）標(biāo)本采集經(jīng)離心獲得新鮮血清標(biāo)本，貯存于2-8℃，48小時(shí)內(nèi)使用，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)須冰凍貯存，血漿不能使用。抗“O”試驗(yàn)方法

1.在反應(yīng)板上標(biāo)記好反應(yīng)區(qū)域；

2.分別在相應(yīng)區(qū)域加：血清50μl、陽(yáng)/陰性對(duì)照1滴

3.再各加1滴膠乳試劑，攪拌充分混勻；

4.約2分鐘觀察結(jié)果。

結(jié)果觀察陰性對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照待測(cè)血清均勻渾濁，白色顆粒狀凝集，白色？抗“O”試驗(yàn)?zāi)霈F(xiàn)ASO>200IU/ml陽(yáng)性無(wú)凝集出現(xiàn)ASO<200IU/ml陰性注意事項(xiàng)

1.試劑使用前先預(yù)置達(dá)室溫，且要搖勻。

2.加試劑時(shí)，要保證液滴大小一致。

3.試劑盒貯存于2-10℃，切勿冰凍。意義1.抗體滴度＞200IU/ml以上，新近有可能反復(fù)感染過(guò)乙型溶血型鏈球菌2.作為風(fēng)濕活動(dòng)期、急性腎小球腎炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的輔助診斷鏈球菌菌落（示教）甲型溶血性鏈球菌α溶血乙型溶血性鏈球菌β溶血丙型鏈球菌不溶血示教鏡腦膜炎奈瑟菌：G-,腎形或豆形，0.6-0.8um排列不規(guī)則，單個(gè)，成雙或4個(gè)相連等，無(wú)鞭毛，無(wú)芽胞，有菌毛和莢膜。淋病奈瑟菌：G-,腎形或豆形，0.6-0.8um

雙排列，像一對(duì)咖啡豆。無(wú)鞭毛，無(wú)芽胞，有菌毛和莢膜注意觀察形態(tài)，排列，染色病例一[1]討論患者男性，15歲，初中生，因發(fā)熱腿痛4天，氣促2天入院。患者訴5天前因額部有一癤腫，自行用手?jǐn)D壓并用針刺破，擠出少量膿液，當(dāng)時(shí)有疼痛出血。4天前突起畏寒、發(fā)熱，體溫38-39℃，無(wú)咳嗽、流涕，并感到右大腿根部疼痛，但仍活動(dòng)自如，于診所靜脈點(diǎn)滴“阿莫西林”1天，用藥劑量不詳，癥狀無(wú)好轉(zhuǎn)，腿痛逐漸加劇，活動(dòng)受限。2天前感覺癥狀進(jìn)行性加重，出現(xiàn)氣促、心慌，偶有咳嗽，無(wú)痰。1天前出現(xiàn)高熱，體溫40℃，右大腿劇痛難忍，髖關(guān)節(jié)不能活動(dòng)，氣促加劇，呼吸困難，于9月2日下午5時(shí)在家人攙扶下入院?；颊呒揖齿^差，且長(zhǎng)期偏食，故體質(zhì)較差，營(yíng)養(yǎng)不良，易感冒，既往無(wú)其他特殊病史，預(yù)防接種史不詳。入院查體：T39.5℃，P150次/分，R50次/分，BP100/60mmHg。發(fā)育一般，體質(zhì)瘦弱，營(yíng)養(yǎng)差，痛苦面容，貧血貌，被迫臥位，右腿蜷曲，神志清，查體不合作。右額部可見一大小為1×1cm大小的硬結(jié)，表面及周圍皮膚發(fā)紅，有結(jié)痂。雙下肢皮膚可見多個(gè)0.5×0.5cm褐色斑疹，口唇發(fā)紺，張口呼吸，氣管居中，頸軟，雙肺呼吸音粗，未聞及干濕羅音，心界不大，心率150次/分，心音低鈍，律齊，腹平軟，肝脾未捫及。右股部腫脹，表面不紅，觸痛明顯，無(wú)波動(dòng)感，髖關(guān)節(jié)處無(wú)紅腫，壓痛明顯，被迫制動(dòng)。實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果：WBC14.6×109/L，Neutrophil91%，Lymphocyte8%，Monocyte1%。RBC2.9×1012/L，Hb84g/L。病例一[1]討論患者的各種癥狀、查體及實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果中，哪些屬于異常表現(xiàn)？患者最可能的初步臨床診斷是什么？有哪些疾病需作鑒別診斷？該患者還需要做哪些檢查以幫助診斷？可采集哪些標(biāo)本？可用什么可靠的病原學(xué)檢查作進(jìn)一步確診？病例一[1]分析敗血癥、膿毒血癥、休克、多器官衰竭等肺結(jié)核、大葉性肺炎、猩紅熱、病毒性肺炎等胸片、B超、血生化、血?dú)庋獦?biāo)本、痰標(biāo)本、膿腫穿刺液等培養(yǎng)、藥敏、痰涂片染色鏡檢（Gram、抗酸）微生物學(xué)檢查1.標(biāo)本采集采血：①.發(fā)病初期1-2天or發(fā)熱高峰期②.盡量在抗生素使用前采血③.采血量：5-10ml