第九章化學發(fā)光免疫技術(shù)

第九章化學發(fā)光免疫技術(shù)第1頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一教學目的要求：1、掌握化學發(fā)光、化學發(fā)光酶免疫分析及化學發(fā)光的臨床應(yīng)用2、熟練掌握電化學發(fā)光免疫分析3、了解化學發(fā)光效率、化學發(fā)光劑、發(fā)光劑的標記技術(shù)（自學）、直接化學發(fā)光免疫分析第2頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一發(fā)光免疫分析:

是將發(fā)光分析和免疫反應(yīng)相結(jié)合而建立起來的一種新的檢測微量抗原或抗體的新型標記免疫分析技術(shù)。全自動化學發(fā)光分析儀第3頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一第一節(jié)概述一、發(fā)光的分類是指一種物質(zhì)由電子激發(fā)態(tài)回復到基態(tài)時，釋放出的能量表現(xiàn)為光的發(fā)射，稱為發(fā)光。根據(jù)形成激發(fā)態(tài)分子的能量來源不同，可將發(fā)光分為三種：光照發(fā)光、生物發(fā)光和化學發(fā)光。第4頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一（一）光照發(fā)光是指發(fā)光劑經(jīng)短波長入射光照后進入激發(fā)態(tài)，回至基態(tài)時發(fā)出較長的可見光。第5頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一（二）生物發(fā)光典型例子為熒火蟲發(fā)光。熒火蟲發(fā)光素光ATP、O2、Mｇ2+熒光素酶第6頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一（三）化學發(fā)光是指常溫下經(jīng)化學反應(yīng)所產(chǎn)生的發(fā)射光?；瘜W發(fā)光是一個多步驟的過程。第7頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一二、化學發(fā)光產(chǎn)生的條件1、反應(yīng)必須提供足夠的能量（170-300KJ/mol）2、這些化學能必須能被某種物質(zhì)分子吸收而產(chǎn)生電子激發(fā)，并且有足夠的光量子產(chǎn)生。第8頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一直接化學發(fā)光：間接化學發(fā)光：第9頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一三、化學發(fā)光效率第10頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一四、化學發(fā)光免疫技術(shù)的分類1、直接化學發(fā)光免疫分析2、化學發(fā)光酶免疫分析3、電化學發(fā)光免疫分析4、魯米諾氧途徑免疫分析常用化學發(fā)光劑：（1）吖啶酯類直接標記發(fā)光劑（2）三聯(lián)吡啶釕電化學發(fā)光劑（3）酶促反應(yīng)發(fā)光劑：魯米諾

AMPPD(金剛烷)第11頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一（一）固相分離——板式或管式（二）過濾分離——過濾杯（膜）（三）珠式分離——與丙烯酰胺小珠子（四）順磁珠性顆粒分離——順磁性顆粒五、化學發(fā)光免疫的非均相分離方式第12頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一一、化學發(fā)光劑在化學發(fā)光反應(yīng)中參與能量轉(zhuǎn)移并最終以發(fā)射光子的形式釋放能量的化合物，稱為化學發(fā)光劑或發(fā)光底物。第二節(jié)化學發(fā)光劑和標記技術(shù)第13頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一第14頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一第15頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一第16頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一第17頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一第18頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一第19頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一魯米諾早在1853年就被合成出來了。1928年，化學家首次發(fā)現(xiàn)這種化合物有一個奇妙的特性，它被氧化時能發(fā)出藍光?；瘜W名稱為3-氨基鄰苯二甲酰肼。刑偵學應(yīng)用：在檢驗血痕時，魯米諾與血紅蛋白發(fā)生反應(yīng)，顯出藍綠色的熒光。這種檢測方法極為靈敏，能檢測只有百萬分之一含量的血。第20頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一第21頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一第22頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一二、發(fā)光劑的標記技術(shù)（自學）

第23頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一第三節(jié)化學發(fā)光免疫分析的類型一、直接化學發(fā)光免疫分析第24頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一第25頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一二、化學發(fā)光酶免疫分析發(fā)光酶免疫分析(LEIA):是用參與催化某一發(fā)光反應(yīng)的酶來標記抗原或抗體，在抗原抗體反應(yīng)結(jié)束后，加入底物，通過酶催化底物發(fā)光反應(yīng)，發(fā)出的光在特定儀器上進行測定。第26頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一HRP標記的LEIA（一）辣根過氧化酶標記的化學發(fā)光免疫分析第27頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一（二）堿性磷酸酶標記的化學發(fā)光免疫分析ALP標記的LEIA第28頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一第29頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一三、電化學發(fā)光免疫分析電化學發(fā)光免疫分析（ECLIA）：是電化學發(fā)光和免疫測定相結(jié)合的產(chǎn)物。第30頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一第31頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一第四節(jié)化學發(fā)光免疫測定的臨床應(yīng)用化學發(fā)光免疫技術(shù)因標記物為非放射性物質(zhì)，且易于實現(xiàn)自動化，具有快速、簡便、靈敏、特異等特點，已廣泛應(yīng)用于各種激素、腫瘤標志物、藥物及其化微量生物活性物質(zhì)測定。第32頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一臨床應(yīng)用特點：1、靈敏度高，特異性強可實現(xiàn)ng甚至pg級微量待測物的定量檢測，保證了各種激素、病毒抗原抗體等微量物質(zhì)的準確定量測定。第33頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一2、線性范圍寬可滿足103-106數(shù)量級的絕對定量檢測需要。保證了臨床應(yīng)用中的簡便性，避免了試驗中的稀釋誤差。第34頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一3、標記物穩(wěn)定，試劑有效期長有效期可長達一年第35頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一4、自動化程度高，檢測菜單齊全第36頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一Thyroid甲狀腺T3三碘甲狀腺原氨酸T4四碘甲狀腺原氨酸FT3游離三碘甲狀腺原氨酸FT4游離四碘甲狀腺原氨酸RT3反三碘甲狀腺原氨酸TRAB促甲狀腺受體抗體TGA甲狀腺球蛋白抗體TMA甲狀腺微粒體抗體TG甲狀腺球蛋白TSH(3rdGen)促甲狀腺激素(第三代超敏)第37頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一Fertility生育

FSH促卵泡激素

LH黃體生成素

PRL催乳素

E2，Estradiol雌二醇PRG孕酮TEST睪酮F-TEST游離睪酮

HCG/β-HCG絨毛膜促性腺激素B-HCG絨毛膜促性腺激素B亞單位FE3游離雌三醇PAPP-A妊娠相關(guān)血漿蛋白DHEA-S脫氫表雄酮第38頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一Cardiac心血管及心肌標志物類TroponinI肌鈣蛋白IMyoglobinI肌紅蛋白CK-MB肌酸激酶同工酶AI血管緊張素IAII血管緊張素IIAldosterone醛固酮腦自然肽N端前體蛋白第39頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一TumorMakers腫瘤標志物AFP甲胎蛋白CEA癌胚抗原Ferritin鐵蛋白TPA組織多肽抗原PAP前列腺酸性磷酸酶PSA前列腺特異性抗原F-PSA游離前列腺特異性抗原CA125糖類抗原125第40頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一PrenatalScreening產(chǎn)前篩查AFP甲胎蛋白Free-B-HCG游離絨毛膜促性腺激素B亞單位PAPP-A妊娠相關(guān)蛋白第41頁，共43頁，2023年，2月20日，星期一KidneyFunction腎功能β2-MGβ2微球蛋白H-ALB人尿微量白蛋白第42頁，共43頁，202