血凝和血凝抑制實(shí)驗(yàn)課件

血凝(HA)與血凝抑制(HI)試驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?、?shí)驗(yàn)內(nèi)容三、實(shí)驗(yàn)原理四、實(shí)驗(yàn)材料五、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果判定六、注意事項(xiàng)七、紅細(xì)胞制備一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握血凝和血凝抑制試驗(yàn)的基本原理、操作方法和結(jié)果判定方法2、了解新城疫有關(guān)背景知識(shí)

二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、血凝試驗(yàn)(HA)檢測(cè)新城疫抗原的效價(jià)2、血凝抑制試驗(yàn)(HI)檢測(cè)新城疫抗體（疫苗注射后的抗體檢測(cè)）2、血凝抑制試驗(yàn)（HI）原理：當(dāng)病毒的懸液中加入特異性抗體，且這種抗體的量足以抑制病毒顆?；蚱溲貢r(shí)，則紅細(xì)胞表面的受體就不能與病毒顆?；蜓刂苯咏佑|。這時(shí)紅細(xì)胞的凝集現(xiàn)象就被抑制，稱為紅細(xì)胞凝集抑制（HI）反應(yīng)，也稱血凝抑制反應(yīng)。Iamlate！抗體抗原四、實(shí)驗(yàn)材料1、血凝板（96孔90oV型）2、新城疫陽(yáng)性血清3、被檢血清（1份）4、1％紅細(xì)胞懸液5、稀釋液6、移液器（50ul,2人/把）7、槍頭五、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果判定血凝試驗(yàn)（HA)1、在血凝板上第一排和第二排的1－12孔內(nèi)各加入25ul生理鹽水2、在第1孔內(nèi)加入25ul病毒抗原，然后依次倍比稀釋至第11孔，最后棄25ul（也就是可以一次做2個(gè)抗原效價(jià)測(cè)定）3、每孔加入1％雞紅細(xì)胞懸液25ul4、輕輕振蕩均勻，后放于室溫或37℃中靜置30分鐘5、結(jié)果判定結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)1、＋＋＋＋：紅細(xì)胞呈細(xì)沙樣均勻鋪于孔底，即100％凝集；2、＋＋＋：紅細(xì)胞均勻鋪于孔底，當(dāng)邊緣不整齊而稍向孔底集中，即75％凝集；3、＋＋：紅細(xì)胞形成一個(gè)環(huán)狀，四周有凝集塊，即50％凝集；4、＋：紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)，邊緣不夠光滑，四周稍有凝集塊，即25％凝集；5、－：紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)，邊緣光滑整齊，即無(wú)凝集；血凝價(jià)的判定以出現(xiàn)＋＋（50％凝集）的抗原最高稀釋倍數(shù)為該抗原的血凝價(jià)（1:128）？？？。25ul1:256稀釋的病毒抗原為該抗原的一個(gè)血凝單位。血凝抑制試驗(yàn)1、將病毒抗原稀釋成4個(gè)血凝單位（1/128×4=1:32）2、在血凝板上1－12孔內(nèi)各加入25ul生理鹽水；3、在第1孔內(nèi)加入被檢血清25ul，然后倍比稀釋至第10孔，最后棄25ul；4、第1－11孔內(nèi)加入4單位抗原25ul（第11孔為抗原對(duì)照第12孔為紅細(xì)胞對(duì)照）；5、輕輕振蕩均勻，后放于室溫或37℃中靜置30分鐘6、每孔加入1％雞紅細(xì)胞懸液25ul；7、輕輕振蕩均勻，后放于室溫或37℃中靜置30分鐘8、結(jié)果判定結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)1、＋＋＋＋：紅細(xì)胞呈細(xì)沙樣均勻鋪于孔底，即100％凝集；2、＋＋＋：紅細(xì)胞均勻鋪于孔底，當(dāng)邊緣不整齊而稍向孔底集中，即75％凝集；3、＋＋：紅細(xì)胞形成一個(gè)環(huán)狀，四周有下凝集塊，即50％凝集；4、＋：紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)，邊緣不夠光滑，四周稍有凝集塊，即25％凝集；5、－：紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)，邊緣光滑整齊，即無(wú)凝集。血凝抑制價(jià)的判定以出現(xiàn)完全抑制凝集(即不凝集)的血清最高稀釋倍數(shù)為該血清的血凝抑制價(jià)（1:4）即抗體為22。六、注意事項(xiàng)1、紅細(xì)胞用前請(qǐng)搖勻2、用槍加樣定要準(zhǔn)，盡量不要有氣泡3、結(jié)果判定有耐心4、HA和HI勿相混注意事項(xiàng)1、在稀釋移取混勻的操作過(guò)程中動(dòng)作要慢，以免損壞紅細(xì)胞（