血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶alt的測定課件

血清谷—丙轉(zhuǎn)氨酶活性的測定（改良賴氏法）【目的要求】1.掌握血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定的基本原理。2.熟悉血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定的具體操作方法。3.了解血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定的臨床意義?！緦嶒炘怼垦逯械墓?丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT），在37℃、pH7.4的條件下，可催化基質(zhì)（底物）液中的丙氨酸與α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：

盡管基質(zhì)液中余下的a-酮戊二酸同樣可生成紅棕色苯腙硝醌化合物而影響測定結(jié)果，但因其量不多，加之對505nm的吸光度遠不如丙酮酸生成的苯腙硝醌化合物強，尤其用標(biāo)準(zhǔn)曲線作測定時，所用的酶活性單位通過卡門氏分光光度速率法矯正，擯棄了賴氏法一些固有弊端，結(jié)果比其他比色法準(zhǔn)確。故衛(wèi)生部臨檢中心建議國內(nèi)無條件使用連續(xù)監(jiān)測法的單位使用賴氏法。1981年全國常規(guī)生化檢驗方法學(xué)術(shù)討論會認(rèn)為賴氏法測定ALT活性較為合理，全國肝炎協(xié)作會議也建議統(tǒng)一使用改良賴氏法。取干凈試管12支，按下表所示標(biāo)號，要求各S管和U管進行雙管平行操作。先做對照管和測定管，在30min保溫期間再做空白管和標(biāo)準(zhǔn)管。

【實驗結(jié)果】1.賴氏法測定ALT的標(biāo)準(zhǔn)曲線(即計量反應(yīng)曲線)在坐標(biāo)紙上以上表中An－A0之值為縱坐標(biāo)，相應(yīng)的酶活性的卡門氏單位為橫坐標(biāo)作圖，即得賴氏法測定ALT的標(biāo)準(zhǔn)曲線2.標(biāo)本中ALT活性結(jié)果⑴查標(biāo)準(zhǔn)曲線利用測定所得的吸光度結(jié)果(AU－AB)，便可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得標(biāo)本的ALT結(jié)果⑵計算將實驗測得的AU－AB、AS代入下面計算公式，即可算得標(biāo)本中ALT活性

【方法評價】ALT活性測定主要有兩類。一是卡門氏（Karman）分光光度法，測定的是酶促反應(yīng)速率。其原理如下：由于NADH在波長340nm處有特異吸收峰，因此ALT的活性可通過NADH的減少量，亦即通過340nm吸光度的減少量間接作出定量測定。這一方法特異性、準(zhǔn)確性高。但是此法除要加入待測酶ALT的底物外，還需要加入指示酶LDH及其輔酶NADH，又需用紫外分光光度計，因此不易為一般臨床化驗室推廣。改原賴氏法的反應(yīng)溫度(40℃改為37℃)和底物濃度(改為低濃度)的改良賴氏法，對卡門氏單位的科學(xué)套用，使比色法一些缺陷得到了卓有成效的克服，使其結(jié)果與速率法較為一致，能較好反映酶的真實活性。由于賴氏法設(shè)計的底物濃度,如a-酮戊二酸不足，反應(yīng)速度只能達到最大速度的65%；顯色劑2,4-二硝基苯肼的用量只及反應(yīng)液中酮酸濃度的一半；保溫30min的酶促反應(yīng)后，新生成的丙酮酸和未用完的a-酮戊二酸存在著無法人為控制的競爭顯色的幾率問題，如此等等，使賴氏法的重現(xiàn)性較差，在測量精度上仍與連續(xù)監(jiān)測法相差甚大。【臨床意義】肝細(xì)胞中含ALT最豐富，因此當(dāng)肝臟疾病致肝細(xì)胞受損傷時，ALT即大量釋放入血液，致使血清中ALT活性增高。測定ALT是檢查肝功能的重要指標(biāo)之一。ALT顯著增高見于各種急性肝炎及藥物中毒性肝細(xì)胞壞死，中等程度增高見于肝癌、肝硬化、慢性肝炎及心肌梗塞，輕度增高則見于阻塞性黃疸及膽道炎等疾病。骨骼肌損傷、多發(fā)性肌炎亦可引