細(xì)胞生物學(xué)課件第三章細(xì)胞技術(shù)

細(xì)胞生物學(xué)課件第三章細(xì)胞技術(shù)第1頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)容提要第一節(jié)顯微技術(shù)一、光學(xué)顯微鏡二、電子顯微鏡三、顯微操作技術(shù)第二節(jié)生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)第三節(jié)細(xì)胞分離技術(shù)第四節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞雜交第五節(jié)模式生物第2頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二第一節(jié)顯微技術(shù)光學(xué)顯微鏡：以可見光（或紫外線）為光源。電子顯微鏡：以電子束為光源。第3頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二—、光學(xué)顯微鏡第4頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二1.構(gòu)成：①照明系統(tǒng)②光學(xué)放大系統(tǒng)③機(jī)械裝置2.原理：經(jīng)物鏡形成倒立實像，經(jīng)目鏡進(jìn)一步放大成像。（一）普通光學(xué)顯微鏡第5頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二第6頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二第7頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二3.分辨力：指分辨物體最小間隔的能力。R=0.61λ/N．A．其中λ為入射光線波長；N．A．為鏡口率

＝ｎsinα/2，n=介質(zhì)折射率；α=鏡口角（樣品對物鏡鏡口的張角）。如何提高顯微鏡的分辨能力？第8頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二表一、幾種介質(zhì)的折射率第9頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二顯微鏡的幾個光學(xué)特點：制作光學(xué)鏡頭所用的玻璃折射率為1.65~1.78，所用介質(zhì)的折射率越接近玻璃的越好。sinα/2的最大值必然小于1；介質(zhì)為空氣，鏡口率一般為0.05~0.95；油鏡頭用香柏油為介質(zhì)，鏡口率可接近1.5。普通光線的波長為400~700nm，分辨力數(shù)值不會小于0.2μm，人眼的分辨力為0.2mm,因此顯微鏡的最大設(shè)計倍數(shù)為1000X。第10頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二（二）熒光顯微鏡Fluorescencemicroscope特點：光源為紫外線，波長較短，分辨力高于普通顯微鏡；有兩個特殊的濾光片；照明方式通常為落射式。第11頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二第12頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二第13頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二Fluorescenceimageofepithelialcell(上皮細(xì)胞),DNAinblueandMicrotubulesingreen用于觀察能激發(fā)出熒光的結(jié)構(gòu)。用途：免疫熒光觀察、基因定位、疾病診斷。第14頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二微管呈綠色、微絲紅色、核藍(lán)色第15頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二（三）激光共聚焦掃描顯微境

Laserconfocalscanningmicroscope,LCSM用激光作光源，逐點、逐行、逐面快速掃描。能顯示細(xì)胞樣品的立體結(jié)構(gòu)。分辨力是普通光學(xué)顯微鏡的3倍。用途類似熒光顯微鏡，但能掃描不同層次，形成立體圖像。第16頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二LCSM第17頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二第18頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二microtubulecytoskeleton(green)andthenucleus(blue)第19頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二聚光鏡中央有擋光片，照明光線不直接進(jìn)人物鏡，只允許被標(biāo)本反射和衍射的光線進(jìn)入物鏡。因而視野的背景是黑的，物體的邊緣是亮的。可觀察4~200nm的微粒子，分辨率比普通顯微鏡高50倍。第20頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二第21頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二把透過標(biāo)本的可見光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對比度，使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見。在構(gòu)造上，相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡兩個特殊之處。環(huán)形光闌（annulardiaphragm）：位于光源與聚光器之間，使透過聚光器的光線形成空心光錐，焦聚到標(biāo)本上。相位板（annularphaseplate）：物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。（五）相差顯微鏡第22頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二第23頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二用途：觀察未經(jīng)染色的玻片標(biāo)本第24頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二（六）偏光顯微鏡polarizingmicroscope用于檢測具有雙折射性的物質(zhì)，如纖維絲、紡錘體、膠原、染色體等。光源前有偏振片（起偏器），使進(jìn)入顯微鏡的光線為偏振光，鏡筒中有檢偏器（與起偏器方向垂直的偏振片）。載物臺是可以旋轉(zhuǎn)。淀粉第25頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二（七）微分干涉差顯微鏡Differentialinterferencecontrastmicroscope（DIC）1952年，Nomarski發(fā)明，利用兩組平面偏振光的干涉，加強(qiáng)影像的明暗效果，能顯示結(jié)構(gòu)的三維立體投影。標(biāo)本可略厚一點，折射率差別更大，故影像的立體感更強(qiáng)。第26頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二物鏡與照明系統(tǒng)顛倒，前者在載物臺之下，后者在載物臺之上，用于觀察培養(yǎng)的活細(xì)胞，通常具有相差物鏡，有的還具有熒光裝置。

第27頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二（九）比較顯微鏡

屬特種顯微鏡：用一組目鏡同時觀察到左右兩個光學(xué)系統(tǒng)物方物體的像。并通過對接、切割、重疊、旋轉(zhuǎn)等手段，對兩個或兩個以上物體進(jìn)行宏觀或微觀上的比較，以檢查、分析和鑒別它們的微小差別：形式、組織、結(jié)構(gòu)、色彩或材料。

簡單的比較顯微鏡可由兩臺普通顯微鏡加一個可共享兩臺顯微鏡物鏡的目鏡系統(tǒng)（比較橋）組成。

專業(yè)的比較顯微鏡采用一體化結(jié)構(gòu)，光學(xué)系統(tǒng)、載物臺等依照特殊需求進(jìn)行專門設(shè)計，功能十分強(qiáng)大。第28頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二比較顯微鏡是刑偵技術(shù)、檢察技術(shù)和法醫(yī)鑒定的主要科學(xué)技術(shù)手段之一，在比較顯微鏡里，一顆子彈的兩截可以在同樣的鏡頭下連成一體，使得觀察者可以借兩者的異?？拷鼇肀容^分析每顆子彈上的痕跡。近年來在化學(xué)、物理、冶金、醫(yī)藥、材料、環(huán)境、微電子研究等方面也有廣泛應(yīng)用。

第29頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二（十）當(dāng)代顯微鏡的發(fā)展趨勢組合模式：集普通光鏡加相差、熒光、暗視野、DIC、攝影裝置于一體。自動化與電子化。第30頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二

明暗偏第31頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二二、電子顯微鏡（一）透射電子顯微鏡transmissionelectronmicroscope,TEM第32頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二以電子束作光源，電磁場作透鏡。電子束的波長短，并且波長與加速電壓(通常50~120KV)的平方根成反比。由電子照明系統(tǒng)、電磁透鏡成像系統(tǒng)、真空系統(tǒng)、記錄系統(tǒng)、電源系統(tǒng)等5部分構(gòu)成。分辨力0.2nm，放大倍數(shù)可達(dá)百萬倍。用于觀察超微結(jié)構(gòu)（ultrastructure），即小于0.2μm、光學(xué)顯微鏡下無法看清的結(jié)構(gòu)，又稱亞顯微結(jié)構(gòu)（submicroscopicstructures）。1.原理第33頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二第34頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二透射電子顯微鏡TRANSMISSIONELECTRONMICROSCOPE，TEM第35頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二表二、不同光線的波長第36頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二2、制樣技術(shù)1）超薄切片電子束穿透力很弱，用于電鏡觀察的標(biāo)本須制成厚度僅50nm的超薄切片，用超薄切片機(jī)（ultramicrotome）制作。通常以鋨酸和戊二醛固定樣品，丙酮逐級脫水，環(huán)氧樹脂包埋，以熱膨脹或螺旋推進(jìn)的方式切片，重金屬（鈾、鉛）鹽染色。第37頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二第38頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二2）負(fù)染技術(shù)用重金屬鹽(如磷鎢酸)對鋪展在載網(wǎng)上的樣品染色；吸去染料，干燥后，樣品凹陷處鋪了一層重金屬鹽，而凸的出地方?jīng)]有染料沉積，從而出現(xiàn)負(fù)染效果，分辨力可達(dá)1.5nm左右。NegativeStainedActin肌動蛋白纖維的負(fù)染電鏡照片第39頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二3）冰凍蝕刻freeze-etching亦稱冰凍斷裂。標(biāo)本置于干冰或液氮中冰凍。然后斷開，升溫后，冰升華，暴露出了斷面結(jié)構(gòu)。向斷裂面上噴涂一層蒸汽碳和鉑。然后將組織溶掉，把碳和鉑的膜剝下來，即為復(fù)膜（replica）。AYeastCell第40頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二20世紀(jì)60年代問世，用來觀察標(biāo)本表面結(jié)構(gòu)。分辨力為6~10nm，由于人眼的分辨力（區(qū)別熒光屏上距離最近兩個光點的能力）為0.2mm，掃描電鏡的有效放大倍率為0.2mm/10nm=20000X。（二）掃描電子顯微鏡第41頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二Scanningelectronmicroscope（SEM）第42頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二工作原理：用一束極細(xì)的電子束掃描樣品，在樣品表面激發(fā)出次級電子，次級電子的多少與樣品表面結(jié)構(gòu)有關(guān)，次級電子由探測器收集，信號經(jīng)放大用來調(diào)制熒光屏上電子束的強(qiáng)度，顯示出與電子束同步的掃描圖像。為了使標(biāo)本表面發(fā)射出次級電子，標(biāo)本在固定、脫水后，要噴涂上一層重金屬膜，重金屬在電子束的轟擊下發(fā)出次級電子信號。第43頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二掃描電子顯微鏡原理第44頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二第45頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二酵母細(xì)胞第46頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二（三）掃描隧道顯微鏡

scanningtunnelingmicroscope，STM原理：根據(jù)隧道效應(yīng)而設(shè)計，當(dāng)原子尺度的針尖在不到一個納米的高度上掃描樣品時，此處電子云重疊，外加一電壓（2mV~2V），針尖與樣品之間形成隧道電流。電流強(qiáng)度與針尖和樣品間的距離有函數(shù)關(guān)系，將掃描過程中電流的變化轉(zhuǎn)換為圖像，即可顯示出原子水平的凹凸形態(tài)。分辨率：橫向為0.1~0.2nm，縱向可達(dá)0.001nm。用途：三態(tài)（固態(tài)、液態(tài)和氣態(tài)）物質(zhì)均可進(jìn)行觀察。第47頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二掃描隧道顯微鏡原理第48頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二第49頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二STMimage,BenzenemoleculesaccumulateatstepedgesonCu第50頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二三、顯微操作技術(shù)

micromanipulationtechnique在倒置顯微鏡下利用顯微操作器進(jìn)行細(xì)胞或早期胚胎操作的一種方法。顯微操作器是用以控制顯微注射針在顯微鏡視野內(nèi)移動的機(jī)械裝置。顯微操作技術(shù)包括細(xì)胞核移植、顯微注射、嵌合體技術(shù)、胚胎移植以及顯微切割等。細(xì)胞核移植技術(shù)已有幾十年的歷史，Gurdon等人（1962）對非洲爪蟾進(jìn)行核移植獲得成功。我國著名學(xué)者童第周等上個世紀(jì)70年代在魚類細(xì)胞核移植方面進(jìn)行了許多工作，并取得了豐碩成果。第51頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二顯微操作儀第52頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二第二節(jié)生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)一、細(xì)胞化學(xué)技術(shù)第53頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)染色方法（histochemicalandcytochemicalstainingmethod）用于對某些細(xì)胞成分進(jìn)行定性和定位研究。（一）固定物理固定：血膜空氣快速干燥、冷凍干燥?；瘜W(xué)固定：如甲醇、乙醇、丙酮、甲醛、戊二醛和鋨酸等試劑。顯示多糖常用乙醇固定，顯示酶類多用甲醛丙酮緩沖液固定。第54頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二（二）顯示方法金屬沉淀法：如磷酸酶分解磷酸酯底物后，反應(yīng)產(chǎn)物最終生成CoS或PbS有色沉淀，而顯示出酶活性。Schiff反應(yīng)：細(xì)胞中的醛基可使Schiff試劑中的無色品紅變?yōu)榧t色。用于顯示糖和脫氧核糖核酸（Feulgen反應(yīng)）。聯(lián)苯胺反應(yīng)：過氧化酶分解H202。產(chǎn)生新生氧，后者再將無色聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍(lán)，進(jìn)而變成棕色化合物。脂溶染色法：借蘇丹染料溶于脂類而使脂類顯色。茚三酮反應(yīng)：顯示蛋白質(zhì)。第55頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二二、免疫細(xì)胞化學(xué)根據(jù)免疫學(xué)原理，利用抗體同特定抗原專一結(jié)合，對抗原進(jìn)行定位測定的技術(shù)。常用的標(biāo)記物有熒光素和酶。免疫熒光法（immunofluorescenttechnique）：常用的螢光素有異硫氰酸熒光素、羅丹明等。酶標(biāo)免疫法（enzyme-labeledantibodymethod）：常用的酶有辣根過氧化物酶，酶與底物發(fā)生反應(yīng)后形成不透明的沉積物，從而顯示出抗原存在的部位。第56頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二三、顯微光譜分析技術(shù)細(xì)胞中有一些成分具有特定的吸收光譜，核酸、蛋白質(zhì)、細(xì)胞色素、維生素等都有自己特征性的吸收曲線?？衫蔑@微分光光度計對某些成分進(jìn)行定位、定性和定量測定。第57頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二四、放射自顯影術(shù)用于研究標(biāo)記化合物在機(jī)體、組織和細(xì)胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用機(jī)理、作用部位等等。原理：將放射性同位素標(biāo)記的化合物導(dǎo)入生物體內(nèi)，經(jīng)過一段時間后，制取切片，涂上鹵化銀乳膠，經(jīng)放射性曝光，使乳膠感光。一般用14C和3H標(biāo)記。常用3H-TDR來顯示DNA，用3H-UDR顯示RNA；用3H氨基酸研究蛋白質(zhì)，用3H甘露糖、3H巖藻糖研究多糖。14C半衰期為5730年，3H為12.5年。第58頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二五、分子雜交技術(shù)具有互補(bǔ)核苷酸序列的兩條單鏈核苷酸分子片段，在適當(dāng)條件下，通過氫鍵結(jié)合和堿基配對，形成DNA-DNA，DNA-RNA或RNA-RNA雜交的雙鏈分子?？捎脕頊y定單鏈分子核苷酸序列間是否具有互補(bǔ)關(guān)系。（一）原位雜交（insituhybridization）。用于檢測染色體上的特殊DNA序列。最初是使用帶放射性的DNA探針，后來發(fā)明了免疫探針法。第59頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二（二）Southern雜交是體外分析特異DNA序列的方法，操作時先用限制性內(nèi)切酶將核DNA或線粒體DNA切成DNA片段，經(jīng)凝膠電泳分離后，轉(zhuǎn)移到醋酸纖維薄膜上，再用探針雜交，通過放射自顯影，即可辨認(rèn)出與探針互補(bǔ)的特殊核苷序列。將RNA轉(zhuǎn)移到薄膜上，用探針雜交，則稱為Northern雜交。第60頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二EdwinSouthern1975年發(fā)明核酸雜交技術(shù)（Southernblot）。

隨后，人們將RNA和蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上的技術(shù)分別命名為Northernblot和Westernblot。

90年代初，Southern和他的科研團(tuán)隊在DNA芯片方面的工作：開發(fā)了在固相的玻璃表面合成特定核苷酸短序列的方法，為DNA及RNA雜交的熒光檢測鋪平了道路。這項技術(shù)和先進(jìn)的工藝相結(jié)合，最終產(chǎn)生了DNA芯片。

第61頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二六、PCR技術(shù)PCR即：polymerasechainreaction。反應(yīng)體系：①樣品DNA；②引物（primer），約15-20個核苷酸；③4種dNTP；④TagDNA聚合酶，來自于嗜熱水生菌Thermusaquaticus，最適作用溫度75~80℃，短時間在95℃下不失活。⑤緩沖體系和Mg2+。反應(yīng)過程：①變性：約90-95℃；②復(fù)性：約60℃左右；③延伸：70-75℃；④重復(fù)“變性——復(fù)性——延伸”過程20-30次循環(huán)。第62頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二PCR原理第63頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二第三節(jié)細(xì)胞分離技術(shù)第64頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二一、離心技術(shù)離心是分離細(xì)胞器（如細(xì)胞核、線粒體、高爾基體）及各種大分子基本手段。高速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速為10~25kr/min。超速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速>25kr/min，離心力>89Kｇ者。目前超速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速可達(dá)100000r/min，離心力超過500Kg。第65頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二（一）差速離心Differentialcentrifugation特點：介質(zhì)密度均一；速度由低向高，逐級離心。用途：分離大小相差懸殊的細(xì)胞和細(xì)胞器。沉降順序：核—線粒體—溶酶體與過氧化物酶體—內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體—核蛋白體。可將細(xì)胞器初步分離，常需進(jìn)一步通過密度梯離心再行分離純化。第66頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二LowspeedHighspeedDifferentialcentrifugation第67頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二（二）密度梯度離心用介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細(xì)胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部，通過離心力場的作用使細(xì)胞分層、分離。類型：速度沉降、等密度沉降。常用介質(zhì)：氯化銫、蔗糖、多聚蔗糖。分離活細(xì)胞的介質(zhì)要求：1）能產(chǎn)生密度梯度，且密度高時，粘度不高；2）PH中性或易調(diào)為中性；3）濃度大時滲透壓不大；4）對細(xì)胞無毒。第68頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二1、速度沉降velocitysedimentation

用途：分離密度相近而大小不等的細(xì)胞或細(xì)胞器。特點：介質(zhì)密度較低，介質(zhì)的最大密度應(yīng)小于被分離生物顆粒的最小密度。原理：介質(zhì)密度梯度平緩，分離物按各自的沉降系數(shù)以不同的速度沉降而達(dá)到分離。第69頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二2.等密度沉降isopycnicsedimentation用途：分離密度不等的顆粒。特點：介質(zhì)密度較高，陡度大，介質(zhì)的最高密度應(yīng)大于被分離組分的最大密度。所需的力場通常比速率沉降法大10~100倍，往往需要高速或超速離心。原理：樣品各成分在連續(xù)梯度的介質(zhì)中經(jīng)過一定時間的離心則沉降到與自身密度相等的介質(zhì)處，并停留在那里達(dá)到平衡，從而將不同密度的成分分離。第70頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二Velocity(A)andEquilibrium(B)sedimentation第71頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二二、流式細(xì)胞術(shù)用途：對單個細(xì)胞進(jìn)行快速定量分析與分選。原理：包在鞘液中的細(xì)胞通過高頻振蕩控制的噴嘴，形成包含單個細(xì)胞的液滴，在激光束的照射下，這些細(xì)胞發(fā)出散射光和熒光，這些熒光信號的強(qiáng)度代表了所測細(xì)胞膜表面抗原的強(qiáng)度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度，

經(jīng)探測器檢測，轉(zhuǎn)換為電信號，送入計算機(jī)處理，輸出統(tǒng)計結(jié)果，并可根據(jù)這些性質(zhì)分選出高純度的細(xì)胞亞群，分離純度可達(dá)99%。流式細(xì)胞儀作為一種先進(jìn)的細(xì)胞定量分析檢測儀器，設(shè)計上采用了許多獨特的技術(shù)，其中涉及到液流系統(tǒng)、光路系統(tǒng)、信號測量和細(xì)胞分選等4個方面。第72頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二第73頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二細(xì)胞的分選通過分離含有單細(xì)胞的液滴而實現(xiàn)的。在流動室的噴口上配有一個超高頻電晶體，充電后振動，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測定細(xì)胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正負(fù)不同的電荷，當(dāng)液滴流經(jīng)帶有幾千伏特的偏轉(zhuǎn)板時，在高壓電場的作用下偏轉(zhuǎn)，落入各自的收集容器中，不予充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實現(xiàn)細(xì)胞的分離。

第74頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二應(yīng)用范圍

用于白血病的分型、腫瘤細(xì)胞染色體的異倍性測定，以及免疫學(xué)研究，并已開始用于細(xì)菌鑒定，病毒感染細(xì)胞的識別和愛滋病感染者T4、T8細(xì)胞的記數(shù)。

70年代以來，隨著流式細(xì)胞技術(shù)水平的不斷提高，其應(yīng)用范圍也日益廣泛。流式細(xì)胞術(shù)已普遍應(yīng)用于免疫學(xué)、血液學(xué)、腫瘤學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、生物化學(xué)等臨床醫(yī)學(xué)和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。

第75頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二三、細(xì)胞電泳原理：在一定pH值下細(xì)胞表面帶有凈的正或負(fù)電荷，能在外加電場的作用下發(fā)生泳動。各種細(xì)胞或處于不同生理狀態(tài)的同種細(xì)胞荷電量有所不同，故在一定的電場中的泳動速度不同。用途：檢測細(xì)胞生理狀態(tài)和病理狀態(tài)、分離不同種類的細(xì)胞，如分離哺乳動物的X和Y精子。第76頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二第四節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞雜交一、細(xì)胞培養(yǎng)第77頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二（一）動物細(xì)胞培養(yǎng)群體培養(yǎng)（massculture）：將含有一定數(shù)量細(xì)胞的懸液置于培養(yǎng)瓶中，讓細(xì)胞貼壁生長，匯合（confluence）后形成均勻的單細(xì)胞層；克隆培養(yǎng)（clonalculture）：培養(yǎng)高度稀釋的細(xì)胞懸液，細(xì)胞貼壁生長，每一個細(xì)胞形成一個細(xì)胞集落，稱為克隆。轉(zhuǎn)鼓培養(yǎng)法：為制取細(xì)胞產(chǎn)品而設(shè)計，大容量旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)，使培養(yǎng)的細(xì)胞始終處于懸浮狀態(tài)之中。第78頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二原代培養(yǎng)（primaryculture）：培養(yǎng)直接來自動物機(jī)體的細(xì)胞群。將細(xì)胞從一個培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到另外一個培養(yǎng)瓶稱為傳代或傳代培養(yǎng)（Passage）。細(xì)胞株（cellstrain）：從原代培養(yǎng)細(xì)胞群中篩選出的具有特定性質(zhì)或標(biāo)志的細(xì)胞群。細(xì)胞系（cellline）：從腫瘤組織培養(yǎng)建立的細(xì)胞群或培養(yǎng)過程中發(fā)生突變或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞，可無限繁殖?？寺。╟lone）：亦稱無性系。指由同一個祖先細(xì)胞通過有絲分裂產(chǎn)生的遺傳性狀一致的細(xì)胞群。第79頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二表三、實驗室中常用的幾種細(xì)胞系細(xì)胞系名稱細(xì)胞類型來源3T3成纖維細(xì)胞小鼠HeLa宮頸癌上皮細(xì)胞HenriettaLacks

BHK21成纖維細(xì)胞敘利亞倉鼠PtKl上皮細(xì)胞袋鼠L6成肌細(xì)胞大鼠PCI2嗜鉻細(xì)胞大鼠SP2漿細(xì)胞小鼠SP2／0骨髓瘤漿細(xì)胞小鼠CHO卵巢細(xì)胞中國地鼠**HenriettaLacks,Americanblack,diedofcancerofuterinecervixin1951

第80頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二（二）植物細(xì)胞培養(yǎng)外植體培養(yǎng)：誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織。用于研究植物的生長發(fā)育、分化和變異；進(jìn)行無性繁殖；制取代謝產(chǎn)物。懸浮細(xì)胞培養(yǎng)：適合于進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)，制取植物代謝產(chǎn)物。原生質(zhì)體培養(yǎng)：培養(yǎng)脫壁后的細(xì)胞，特點：①比較容易攝取外來的遺傳物質(zhì)，如DNA；②便于進(jìn)行細(xì)胞融合，形成雜交細(xì)胞；③適宜條件下可產(chǎn)生細(xì)胞壁，經(jīng)誘導(dǎo)分化成完整植株。單倍體培養(yǎng)：通過花藥或花粉培養(yǎng)可獲得單倍體植株。第81頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二PlantCellCultureAnimalCellCulture第82頁，共90頁，2023年，2月20日，星期二二、細(xì)胞融合通過培養(yǎng)和介導(dǎo)，兩個或多個細(xì)胞