滅菌無(wú)菌藥品生產(chǎn)管理與質(zhì)量控制

滅菌無(wú)菌藥品生產(chǎn)管理與質(zhì)量控制第1頁(yè)/共118頁(yè)

最終滅菌無(wú)菌藥品生產(chǎn)管理與質(zhì)量控制

第2頁(yè)/共118頁(yè)一、微生物知識(shí)----什么是微生物二、無(wú)菌的基本概念----什么是無(wú)菌三、無(wú)菌保證要素----如何實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品無(wú)菌第3頁(yè)/共118頁(yè)

微生物知識(shí)----什么是細(xì)菌第4頁(yè)/共118頁(yè)微生物知識(shí)什么是微生物微生物（microorganism,microbe）是一些肉眼看不見(jiàn)的微小生物的總稱(chēng)。包括屬于原核類(lèi)的細(xì)菌、放線(xiàn)菌、支原體、立克次氏體、衣原體和藍(lán)細(xì)菌（過(guò)去稱(chēng)藍(lán)藻或藍(lán)綠藻），屬于真核類(lèi)的真菌（酵母菌和霉菌）、原生動(dòng)物和顯微藻類(lèi)，以及屬于非細(xì)胞類(lèi)的病毒、類(lèi)病毒和朊病毒等。第5頁(yè)/共118頁(yè)微生物知識(shí)

微生物在地球上幾乎無(wú)處不有，無(wú)孔不入，人的皮膚上，口腔，腸道里都有許多微生物。任意取一把土或一粒土，就是一個(gè)微生物世界，在肥沃的土壤中，每克土含有20億個(gè)微生物，即使是貧瘠的土壤，每克土中也含有3－5億個(gè)微生物。空氣里懸浮著無(wú)數(shù)細(xì)小的塵埃和水滴，它們是微生物在空氣中的藏身之地。哪里塵埃多，哪里的微生物就多。第6頁(yè)/共118頁(yè)微生物知識(shí)微生物按其結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及生活習(xí)性等分為三大類(lèi)：原核細(xì)胞型：細(xì)菌、放線(xiàn)菌、支原體、衣原體、立克次氏體、螺旋體等真核細(xì)胞型：真菌非細(xì)胞型：病毒噬菌體第7頁(yè)/共118頁(yè)真菌和細(xì)菌大小真菌5μm~50μm細(xì)菌0.5~5μm主要成員酵母、霉菌細(xì)菌細(xì)胞組成酵母是單細(xì)胞，其它為多細(xì)胞均為單細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)成份遺傳物質(zhì)(DNA)被雙層核膜包裹(真核)，并且還有如線(xiàn)粒體、葉綠體及高卡基體等被膜包裹的細(xì)胞器。遺傳物質(zhì)(DNA)祼露并游離于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)(原核)，并且不含有其它有膜細(xì)胞器。繁殖方式有性（如大型真菌或無(wú)性如酵母），霉菌則二者兼有無(wú)性（裂殖）孢子霉菌產(chǎn)生分生孢子（生長(zhǎng)繁殖，類(lèi)似于植物的種子)，雖不耐熱，但會(huì)飄浮于空氣中而難以消除。酵母不會(huì)產(chǎn)生孢子。主要只有兩個(gè)屬產(chǎn)生孢子（內(nèi)生孢子），又名芽孢：Bacillus-芽孢桿菌屬和Clostridium-梭菌屬，細(xì)菌芽孢屬于休眠體，一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞產(chǎn)生一個(gè)芽孢生長(zhǎng)條件20-25oC,3-5天30-35oC,1-2天殺滅程度不耐熱，但難用消毒劑消毒（因孢子處于漂浮狀態(tài)）生長(zhǎng)態(tài)菌不耐熱（極個(gè)別除外），但形成芽孢后耐熱。第8頁(yè)/共118頁(yè)

芽孢桿菌（細(xì)菌）蠟樣芽孢桿菌（細(xì)菌）第9頁(yè)/共118頁(yè)根霉（Rhizopus)是種真菌，屬于接合菌。能產(chǎn)生無(wú)性孢子菌絲體的直徑約12um黑的是孢子囊青霉是種真菌，屬于子囊菌。有的能產(chǎn)生青霉素，救了無(wú)數(shù)人的命。產(chǎn)生無(wú)性孢子。第10頁(yè)/共118頁(yè)

粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征

沙門(mén)氏菌的菌落特征

銅綠假單孢菌的菌落特征

弗氏志賀氏菌的菌落特征

粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征

第11頁(yè)/共118頁(yè)微生物生存的環(huán)境G+G-微生物無(wú)處不在氣源性微生物革蘭氏陽(yáng)性菌較多它們可形成芽孢，難以殺滅因此，藥品生產(chǎn)需要HVAC水源性則革蘭氏陰性菌居多不會(huì)生成孢子但會(huì)形成細(xì)菌內(nèi)毒素耐熱性差第12頁(yè)/共118頁(yè)微生物知識(shí)將植物比喻微生物，不恰當(dāng)而直觀(guān)如玉米，發(fā)芽→生長(zhǎng)→種子，前二種相當(dāng)于微生物的生長(zhǎng)狀態(tài)，到了種子，對(duì)環(huán)境的（水分、溫度等）耐受性大大增強(qiáng)然而，微生物的芽孢，并不是繁殖的手段，而是休眠體，植物沒(méi)有這種相對(duì)應(yīng)的東西革蘭氏陽(yáng)性菌：氣源性，身體上部，呼吸道革蘭氏陰性菌：則是水源性的，細(xì)胞結(jié)構(gòu)不同生物指示劑均為革蘭氏陽(yáng)性菌，滅菌用BI為非致病菌。第13頁(yè)/共118頁(yè)成熟芽孢孢子壁母細(xì)胞孢子壁的形成生長(zhǎng)態(tài)細(xì)胞內(nèi)生孢子產(chǎn)生于Gram+

細(xì)菌:

芽孢桿菌屬Bacillus

梭菌屬Clostridium僅含核酸及少量萌發(fā)必需物皮層含DPA和Ca2+復(fù)合物能抵御各種惡劣環(huán)境可休眠上百萬(wàn)年真菌孢子因不具上述特性而不耐熱DPA：吡啶二羧酸細(xì)菌芽胞（孢）的形成及其特性第14頁(yè)/共118頁(yè)芽孢的特點(diǎn)耐熱80℃下長(zhǎng)期存活100℃下有相當(dāng)高的存活率100℃以上死亡過(guò)程符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程影響芽孢耐熱性的因素芽孢存在的介質(zhì)受熱時(shí)的濕度第15頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌的基本概念----什么是無(wú)菌第16頁(yè)/共118頁(yè)最終滅菌方法生產(chǎn)的無(wú)菌藥品概述什么是無(wú)菌?“無(wú)菌”的理論定義完全無(wú)生物存在絕對(duì)條件“無(wú)菌”的實(shí)際定義經(jīng)生長(zhǎng)和繁殖證明無(wú)生物普遍接受的標(biāo)準(zhǔn)是，滅菌后，最終滅菌注射劑或其它關(guān)鍵設(shè)備微生物存活的概率達(dá)到10-6，即保證一百萬(wàn)個(gè)已滅菌物品或制劑中存活的微生物數(shù)低于一。第17頁(yè)/共118頁(yè)滅菌和消毒滅菌——使達(dá)到無(wú)菌狀態(tài)的方法（GMP指南）。用物理或化學(xué)方法殺滅傳播媒介上所有的微生物，使其達(dá)到無(wú)菌（GB）。通常是指殺滅或除去全部活的微生物（包括繁殖體和芽孢）。消毒——用物理或化學(xué)方法殺滅或清除傳播媒介上的病原微生物，使其達(dá)到無(wú)害化（GB）。通常是指殺死病原微生物的繁殖體，但不能破壞其芽孢。所以消毒是不徹底的，不能代替滅菌。第18頁(yè)/共118頁(yè)最終滅菌產(chǎn)品的無(wú)菌標(biāo)準(zhǔn)FDA在“最終滅菌產(chǎn)品參數(shù)放行”文件中要求將產(chǎn)品中的污染菌降至一個(gè)菌以下，并在此基礎(chǔ)上使產(chǎn)品的無(wú)菌安全系數(shù)再增加六個(gè)對(duì)數(shù)單位USP、歐洲藥典、BP及中國(guó)藥典現(xiàn)行版：最終濕熱滅菌水針劑的標(biāo)準(zhǔn)滅菌條件是121℃15分鐘。也可用采用其它溫度及時(shí)間參數(shù)，只要能有效地證明……所采用的工藝和監(jiān)控措施應(yīng)能確保無(wú)菌保證水平小于10-6。第19頁(yè)/共118頁(yè)最終滅菌無(wú)菌藥品滅菌方式的選擇濕熱滅菌是首選的滅菌方法按產(chǎn)品熱穩(wěn)定性差分為二種：過(guò)度殺滅法；存活概率法。合格標(biāo)準(zhǔn)滅菌后產(chǎn)品均應(yīng)至少達(dá)到百萬(wàn)分之一的無(wú)菌保證水平。不能在100℃以上滅菌時(shí)，注意：強(qiáng)化環(huán)境控制，可能時(shí)灌裝環(huán)境達(dá)到（Ｂ＋Ａ）；對(duì)設(shè)備容器具滅菌；藥液除菌過(guò)濾；可能條件下采用巴氏消毒。第20頁(yè)/共118頁(yè)不同滅菌工藝的無(wú)菌保證能力第21頁(yè)/共118頁(yè)重點(diǎn)關(guān)注水溶液產(chǎn)品滅菌工藝的符合性第22頁(yè)/共118頁(yè)最終滅菌產(chǎn)品“無(wú)菌”標(biāo)準(zhǔn)及概念無(wú)菌的量化標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)當(dāng)可以用試驗(yàn)來(lái)證明的，“每批產(chǎn)品中，污染品的數(shù)量不得超過(guò)一百萬(wàn)分之一”，因此，不可能用那么多產(chǎn)品進(jìn)行無(wú)菌檢查來(lái)證明是否達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。然而，每瓶產(chǎn)品微生物存活的概率可通過(guò)計(jì)算獲得。這就需要測(cè)試微生物耐熱參數(shù)－D值，使用對(duì)數(shù)規(guī)則，并用生物指示劑試驗(yàn)來(lái)證實(shí)。量化指標(biāo)+計(jì)算+試驗(yàn)，使技術(shù)無(wú)菌標(biāo)準(zhǔn)成為工業(yè)界可執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)第23頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌概念的理解某產(chǎn)品批量為1萬(wàn)瓶，10ml安瓿，每瓶1000個(gè)孢子，D121=1分鐘，不同滅菌時(shí)間下的結(jié)果？第24頁(yè)/共118頁(yè)

滅菌3分鐘，從批看，所有產(chǎn)品有菌，100%污染。從每一瓶看，有1個(gè)菌，二者等同；滅菌4分鐘，從批看，批產(chǎn)品孢子總數(shù)為1000個(gè)，有一瓶應(yīng)是無(wú)菌的，污染概率10-1。從每瓶看，也是10-1。滅菌6分鐘時(shí)，從整批看，還有10個(gè)菌，分布在10瓶中，污染品為10，因批量為一萬(wàn)，污染概率為千分之一。從每瓶看，二者等同；滅菌8分鐘時(shí)，從整批看，根據(jù)計(jì)算還有十分之一個(gè)菌，分布在一萬(wàn)瓶中，污染概率為十萬(wàn)分之一。從每瓶看，二者等同；“每批產(chǎn)品中，污染品的數(shù)量不得超過(guò)一百萬(wàn)分之一”或“一瓶產(chǎn)品中微生物存活的概率低于百萬(wàn)分之一”，這二種提法只是無(wú)菌合格標(biāo)準(zhǔn)的不同表述方式。無(wú)菌概念的理解第25頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌保證值與Fo、D值及帶菌量的關(guān)系SAL＝F0/D–lgN0

假定D121為1lgN2345-2-3-41-5-6-10生產(chǎn)中Fo=8示意過(guò)度殺滅示意第26頁(yè)/共118頁(yè)芽孢的耐熱參數(shù)：D值lgNt1234t1t2D指一定溫度下將微生物殺滅90％或下降一個(gè)對(duì)數(shù)單位所需要的時(shí)間。第27頁(yè)/共118頁(yè)滅菌溫度對(duì)D值的影響115℃121℃125℃lgNt△lgN=1D125D121D115滅菌溫度低時(shí)，達(dá)到同一滅菌效果的時(shí)間就長(zhǎng)第28頁(yè)/共118頁(yè)F0值：達(dá)到同一滅菌效果的概念lgNtLgNoLgNt121℃117℃△LgNFTFoF0值即標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間指產(chǎn)品在滅菌過(guò)程中獲得的與標(biāo)準(zhǔn)參照條件（121℃）相同滅菌效果的曝?zé)釙r(shí)間第29頁(yè)/共118頁(yè)菌溫度系數(shù)-Z值使D值變更一個(gè)對(duì)數(shù)單位滅菌溫度需升高或下降的度數(shù)；實(shí)測(cè)細(xì)菌孢子的Z值在8-12℃之間，但計(jì)算滅菌率時(shí)，Z通常取10℃；在干熱滅菌計(jì)算中，Z通常取20℃；物理意義：Z大時(shí)，用升高溫度的辦法來(lái)改善滅菌效果時(shí)，收效不明顯。第30頁(yè)/共118頁(yè)不同滅菌溫度下的滅菌率滅菌溫度℃滅菌率L1000.0081050.0251120.1261150.2511160.3161180.5011200.7941211.0001221.251231.59滅菌率：為達(dá)到與某一溫度下滅菌1分鐘相同的滅菌效果，在121℃下滅菌所需要的滅菌時(shí)間

100℃滅菌時(shí)1分鐘，相當(dāng)于121℃滅菌0.008分鐘，即Fo值為0.008分鐘。105℃滅菌40分鐘時(shí)，F(xiàn)o約為1分鐘，能使D值為1分鐘的芽孢數(shù)量下降1個(gè)對(duì)數(shù)單位第31頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌檢查的局限性歷史的教訓(xùn)：1962年，美國(guó)FDA頒布第一部GMP1970-1975年，美國(guó)輸液污染至敗血癥400多起

--有問(wèn)題的產(chǎn)品全部通過(guò)了無(wú)菌檢查1973年的英國(guó)藥典和1980年USP增補(bǔ)版提到了無(wú)菌的量化標(biāo)準(zhǔn)Fo不小于8分鐘,經(jīng)滅菌后，產(chǎn)品中污染菌存活的概率不大于百萬(wàn)分之一。中國(guó)藥典在2000版起，收載了此標(biāo)準(zhǔn)。第32頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌檢查的局限性無(wú)菌的定義理論上：無(wú)菌＝?jīng)]有任何活的微生物實(shí)際上：我們無(wú)法證明產(chǎn)品中沒(méi)有活微生物存在無(wú)法對(duì)整批產(chǎn)品進(jìn)行100%檢驗(yàn)無(wú)菌檢驗(yàn)的結(jié)果只是一個(gè)基于“可能性”的判斷無(wú)菌檢驗(yàn)用培養(yǎng)基有其局限性只進(jìn)行細(xì)菌和真菌的檢驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判定是基于“是否在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)”培養(yǎng)條件（如溫度和時(shí)間）是有限的我們的工作環(huán)境及操作是在相對(duì)無(wú)菌的狀態(tài)第33頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌檢查的局限性試驗(yàn)?zāi)康模翰缓细竦目赡苄?%)試驗(yàn)批量：60,000支試驗(yàn)方法：按無(wú)菌測(cè)試方法真實(shí)的不合格率測(cè)試20支樣品不合格的可能性測(cè)試40支樣品不合格的可能性1％18.2%33.1%5％64.2%87.2%15％96.1%99.8%30％99.9%100.0%第34頁(yè)/共118頁(yè)滅菌工藝與滅菌前微生物控制的關(guān)系第35頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌保證要素----如何實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品無(wú)菌第36頁(yè)/共118頁(yè)最終滅菌藥品生產(chǎn)中微生物污染控制第37頁(yè)/共118頁(yè)工藝生產(chǎn)中微生物污染控制重點(diǎn)關(guān)注內(nèi)容第38頁(yè)/共118頁(yè)藥品生產(chǎn)管理和質(zhì)量控制的主要內(nèi)容人員管理;

生產(chǎn)工藝管理（技術(shù)、流程、設(shè)備）；空氣凈化、環(huán)境管理；制藥工藝用水管理。第39頁(yè)/共118頁(yè)一、人員的管理人是潔凈室最大的污染源，占90%左右。一般男性每人每分鐘向周?chē)欧?000個(gè)以上的含菌粒子，女性為750個(gè)以上。穿無(wú)菌服時(shí)，靜止時(shí)的發(fā)菌量為10~300個(gè)/min，一般活動(dòng)時(shí)發(fā)菌量為150~1000個(gè)/min，行走時(shí)發(fā)菌量為900~2500個(gè)/min?？人砸淮伟l(fā)菌量為70~700個(gè)/min，噴嚏一次為4000~60000個(gè)/min。所以在潔凈室中，人的數(shù)量和活動(dòng)應(yīng)有特別嚴(yán)格的限制。第40頁(yè)/共118頁(yè)人員的管理人是最大的污染源坐著不動(dòng)能產(chǎn)生100,000個(gè)顆粒第41頁(yè)/共118頁(yè)人員的管理走能產(chǎn)生5,000,000個(gè)顆粒第42頁(yè)/共118頁(yè)人員的管理跑能產(chǎn)生15,000,000個(gè)顆粒第43頁(yè)/共118頁(yè)人員的管理人體攜帶的微生物根據(jù)衛(wèi)生情況不同因人而異第44頁(yè)/共118頁(yè)人員的管理人體內(nèi)外表面廣泛存在微生物第45頁(yè)/共118頁(yè)人員的管理難以覺(jué)察的口腔微滴第46頁(yè)/共118頁(yè)人員的管理和培訓(xùn)

為降低微生物、微粒和熱原污染的風(fēng)險(xiǎn)，無(wú)菌藥品的生產(chǎn)應(yīng)有各種特殊要求。這在很大程度上取決于生產(chǎn)人員的技能、所接受的培訓(xùn)及其工作態(tài)度。人員除必要的著裝、清潔和消毒措施以外，還應(yīng)特別注意，不應(yīng)裸手接觸任何已清潔的產(chǎn)品容器，或已滅菌的過(guò)濾器、灌裝器具等與產(chǎn)品接觸的部位。第47頁(yè)/共118頁(yè)潔凈區(qū)更衣YESNONO頭發(fā)應(yīng)完全包在帽子內(nèi)第48頁(yè)/共118頁(yè)潔凈區(qū)更衣YESNO工作服的紐扣應(yīng)完全扣上第49頁(yè)/共118頁(yè)潔凈區(qū)更衣YESNO鞋套不能有破損第50頁(yè)/共118頁(yè)潔凈區(qū)更衣不能配戴手表、首飾第51頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌工作服的穿著穿著的順序由上而下穿著要領(lǐng)盡可能不要直接接觸無(wú)菌服的外表面第52頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌工作服的穿著NOYES面罩敞開(kāi)第53頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌工作服的穿著手套尺寸不對(duì)戴法不正確第54頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌工作服的穿著手套破損第55頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌工作服的穿著鞋套穿戴不正確YESNO第56頁(yè)/共118頁(yè)10,000級(jí)潔凈區(qū)更衣參考程序第57頁(yè)/共118頁(yè)工作服管理－清洗、整理與滅菌第58頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌工作服的微生物控制污染產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)大處需取樣衣服袖管取樣示意衣服胸部取樣示意背部不需要取樣第59頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌工作服的微生物控制手指接觸碟試驗(yàn)第60頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌操作NOYES不要在更衣室交談第61頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌操作NOYESYES不操作時(shí)，應(yīng)將前臂和雙手放在前面，身體不能斜靠第62頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌操作NOYES第63頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌操作定時(shí)或在任何關(guān)鍵操作前，應(yīng)消毒手套第64頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌操作填寫(xiě)批記錄后，手套應(yīng)消毒第65頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌操作YESNO關(guān)鍵操作過(guò)程中不要揀地上的東西第66頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌操作層流下的操作臺(tái)應(yīng)始終保持干凈整潔NOYES第67頁(yè)/共118頁(yè)二、生產(chǎn)工藝管理（技術(shù)、流程、設(shè)備）濕熱滅菌的基本要求了解藥品滅菌柜容量計(jì)算，理論批次量和實(shí)際的生產(chǎn)批量，考慮一天生產(chǎn)多個(gè)批號(hào)或一批需多次滅菌時(shí)，如何處理？滅菌柜應(yīng)有自動(dòng)監(jiān)測(cè)和記錄裝置。自動(dòng)監(jiān)測(cè)記錄應(yīng)納入批生產(chǎn)記錄；滅菌設(shè)備升溫、降溫速度符合生產(chǎn)工藝要求。能夠適應(yīng)于生產(chǎn)工藝的不同功能要求；第68頁(yè)/共118頁(yè)濕熱滅菌程序的驗(yàn)證濕熱滅菌設(shè)備應(yīng)具有進(jìn)行熱均勻性驗(yàn)證并符合要求的必要條件；滅菌程序驗(yàn)證應(yīng)有熱分布(滅菌設(shè)備空載無(wú)負(fù)荷熱分布試驗(yàn))、熱穿透(負(fù)載熱分布試驗(yàn))和細(xì)菌挑戰(zhàn)的三個(gè)必要的試驗(yàn)，且試驗(yàn)結(jié)果符合工藝生產(chǎn)要求；對(duì)滅菌設(shè)備構(gòu)造、其組成部分功能、輔助系統(tǒng)的概述(包括生產(chǎn)商和型號(hào))。設(shè)備運(yùn)行控制系統(tǒng)、記錄系統(tǒng)的功能等所使用的滅菌方式(如飽和蒸汽、水浴、水噴淋式等)；滅菌的工藝參數(shù)和運(yùn)行標(biāo)準(zhǔn)(如溫度、壓力、時(shí)間、最大及最小F0值等)；第69頁(yè)/共118頁(yè)濕熱滅菌程序的驗(yàn)證待滅菌物的裝載情況(如裝載方式、產(chǎn)品處方、容器大小、灌裝體積、最大及最小裝載量等)；滅菌程序的監(jiān)控方法(如熱電偶、監(jiān)控溫度用產(chǎn)品模擬瓶、生物指示劑的數(shù)量、位置以及合格/不合格標(biāo)準(zhǔn))；關(guān)鍵參數(shù)允許的變化范圍(最大及最小值)；產(chǎn)品所能承受的F0值限度；對(duì)滅菌工藝波動(dòng)情況所作統(tǒng)計(jì)分析的評(píng)估報(bào)告；再驗(yàn)證計(jì)劃(如常規(guī)和非常規(guī)情況下再驗(yàn)證方案的詳細(xì)說(shuō)明、頻率等)；第70頁(yè)/共118頁(yè)濕熱滅菌重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容和方法

滅菌介質(zhì)是什么？蒸汽（鍋爐蒸汽、純蒸汽）？過(guò)熱水？滅菌設(shè)備的過(guò)濾器滅菌機(jī)使用什么類(lèi)型的過(guò)濾器？多長(zhǎng)時(shí)間對(duì)過(guò)濾器進(jìn)行一次完整性測(cè)試？滅菌周期控制是手動(dòng)的還是程序自動(dòng)控制的？應(yīng)了解具體產(chǎn)品的高壓蒸汽滅菌機(jī)的滅菌參數(shù)情況？①時(shí)間；②溫度；③壓力；④壓力下降速度。設(shè)備滅菌周期控制用傳感器安裝的位置？上述參數(shù)是如何監(jiān)測(cè)的？如未監(jiān)測(cè)，應(yīng)要求說(shuō)明：滅菌機(jī)在每個(gè)滅菌周期內(nèi)均監(jiān)測(cè)驗(yàn)證確定的冷點(diǎn)溫度嗎？第71頁(yè)/共118頁(yè)濕熱滅菌重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容和方法高壓蒸汽滅菌的驗(yàn)證文件是否包括下述項(xiàng)目：空載熱分布情況，是否已確定冷點(diǎn)溫度并針對(duì)冷點(diǎn)溫度對(duì)滅菌溫度進(jìn)行了校正？負(fù)載熱穿透情況，是否對(duì)待滅菌物的每一種裝載形式和使用的每一種體積的裝載容器都進(jìn)行了驗(yàn)證？微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)？驗(yàn)證確定的冷點(diǎn)溫度偏差是否反映到批生產(chǎn)記錄BPR中？蒸汽滅菌機(jī)使用的熱電偶校正情況

第72頁(yè)/共118頁(yè)濕熱滅菌重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容和方法如果在蒸汽滅菌驗(yàn)證時(shí)使用了生物指示劑，應(yīng)確認(rèn)：①生物指示劑的類(lèi)型？②生物指示劑來(lái)源？③是哪種微生物？④濃度是多少？⑤生物指示劑的D值是多少？⑥生物指示劑以全部滅活方式還是對(duì)數(shù)減少方式使用的？第73頁(yè)/共118頁(yè)干熱滅菌工藝及驗(yàn)證干熱滅菌是使微生物氧化而不是象濕熱滅菌使蛋白質(zhì)變性；干熱滅菌時(shí)，以強(qiáng)制方式將空氣對(duì)流，高溫空氣將水分逐漸帶走，被滅菌物品及芽孢跟著失水，滅菌率也發(fā)生相應(yīng)的變化。去熱原的工藝條件比孢子殺滅程序要苛刻得多，通常相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)干熱滅菌時(shí)間FH的數(shù)十倍。170℃下滅菌時(shí)間用FH表示；干熱滅菌空氣應(yīng)經(jīng)過(guò)HEPA過(guò)濾器過(guò)濾，并要控制層流方向。檢查生產(chǎn)中的時(shí)間，壓力是否與驗(yàn)證一致；最終滅菌無(wú)菌藥品生產(chǎn)中，干熱滅菌工藝主要用于生產(chǎn)過(guò)程中器具的滅菌與除熱原處理。第74頁(yè)/共118頁(yè)干熱滅菌重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容和方法滅菌設(shè)備通過(guò)風(fēng)機(jī)空氣循環(huán)還是僅靠熱空氣對(duì)流熱分布？滅菌后物品冷卻使用的空氣經(jīng)過(guò)高效過(guò)濾器過(guò)濾處理嗎？有沒(méi)有進(jìn)行高效過(guò)濾器的完整性測(cè)試？多長(zhǎng)時(shí)間測(cè)定一次高效過(guò)濾器的完整性？了解干熱滅菌周期采用人工控制還是自動(dòng)控制？評(píng)估滅菌控制的可靠性。了解干熱滅菌參數(shù)是如何監(jiān)測(cè)的？如未監(jiān)測(cè)，要求予以說(shuō)明。干熱設(shè)備使用的是那類(lèi)監(jiān)測(cè)和控制傳感器了解干熱滅菌的周期參數(shù)和確定依據(jù)（將驗(yàn)證記錄和SOP中規(guī)定的參數(shù)與所抽取的產(chǎn)品的生產(chǎn)記錄進(jìn)行比較）？干熱滅菌時(shí)間和溫度的規(guī)定指標(biāo)和實(shí)際觀(guān)察到的參數(shù)有無(wú)偏差？偏差的處理？第75頁(yè)/共118頁(yè)干熱滅菌重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容和方法了解干熱滅菌的驗(yàn)證文件，文件是否包括：(1)空載熱分布試驗(yàn)；①設(shè)備運(yùn)轉(zhuǎn)次數(shù)；②測(cè)定到冷點(diǎn)溫度了嗎；③根據(jù)冷點(diǎn)溫度確定允許的偏差和實(shí)際發(fā)現(xiàn)的偏差；(2)熱穿透試驗(yàn)：①對(duì)每種裝載方式/和所用的不同大小容器分別進(jìn)行試驗(yàn)嗎？②每種裝載方式的運(yùn)轉(zhuǎn)次數(shù)？③每種裝載方式均檢測(cè)測(cè)了冷點(diǎn)了嗎？(3)每次使用前后均對(duì)熱電偶校正了嗎？校正時(shí)用了冰點(diǎn)參照標(biāo)準(zhǔn)了嗎？(4)高溫參照標(biāo)準(zhǔn)是否均有NBS可追溯性？在驗(yàn)證時(shí)，如發(fā)現(xiàn)了熱分布或熱穿透研究不一致，應(yīng)了解偏差是如何糾正的，是否未糾正就接受了？干熱滅菌是否根據(jù)容器大小，產(chǎn)品粘性，等確定了延滯時(shí)間？是否分別調(diào)整了滅菌周期？第76頁(yè)/共118頁(yè)除菌過(guò)濾工藝過(guò)濾系統(tǒng)要求：過(guò)濾系統(tǒng)無(wú)泄漏；壓力、流速、溫度；化學(xué)性質(zhì)、pH值；溶劑溶出物；

通過(guò)起泡點(diǎn)試驗(yàn)，判斷確認(rèn)過(guò)濾孔徑與工藝要求相適應(yīng)。

與其它滅菌方法相比，過(guò)濾滅菌法的風(fēng)險(xiǎn)更大，建議在緊挨“灌裝”的位置安裝第二只滅過(guò)菌的除菌過(guò)濾器，再過(guò)濾一次。此最終除菌過(guò)濾器應(yīng)盡可能接近灌裝點(diǎn)。

為防止因時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致微生物生長(zhǎng)或穿透濾膜而污染濾液，應(yīng)在既定最大時(shí)間限度內(nèi)完成產(chǎn)品的過(guò)濾和灌裝。該時(shí)限還應(yīng)當(dāng)防止過(guò)濾器上游微生物數(shù)量的過(guò)份增加，微生物增多將導(dǎo)致熱原的產(chǎn)生。第77頁(yè)/共118頁(yè)除菌過(guò)濾工藝重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容和方法了解除菌過(guò)濾器的類(lèi)型，筒式或盤(pán)式？疏水性或親水性？工藝過(guò)程中是使用單個(gè)除菌濾器還是多個(gè)濾器？過(guò)濾裝置采用何種方法滅菌？①過(guò)濾裝置采用何種方法滅菌？②滅菌工藝經(jīng)過(guò)充分驗(yàn)證嗎？要求了解過(guò)濾器驗(yàn)證操作的SOP。③在同一批產(chǎn)品生產(chǎn)期間更換濾器嗎？過(guò)濾器更換的頻次經(jīng)過(guò)驗(yàn)證測(cè)試嗎？過(guò)濾器采用重新清洗滅菌和重新使用方式嗎？這種方法經(jīng)過(guò)驗(yàn)證嗎？要求了解過(guò)濾器重新清洗滅菌和重新使用方式驗(yàn)證操作的SOP該濾器供應(yīng)商是否對(duì)每批濾器介質(zhì)做過(guò)細(xì)菌挑戰(zhàn)性試驗(yàn)？企業(yè)對(duì)過(guò)濾器的供應(yīng)審計(jì)是如何進(jìn)行的？生產(chǎn)中的產(chǎn)品組合都進(jìn)行了物理和化學(xué)挑戰(zhàn)性試驗(yàn)嗎？第78頁(yè)/共118頁(yè)除菌過(guò)濾工藝重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容和方法過(guò)濾器的驗(yàn)證測(cè)試過(guò)濾器裝置在使用前后均測(cè)試起泡點(diǎn)壓力嗎？測(cè)試壓力與生產(chǎn)中使用的壓力有何關(guān)系？當(dāng)過(guò)濾器使用后測(cè)試壓力不符合要求時(shí)采取了什么措施？過(guò)濾器在測(cè)試不符合后有無(wú)進(jìn)行相應(yīng)的原因調(diào)查？生產(chǎn)中會(huì)遇到的產(chǎn)品組合都進(jìn)行了物理和化學(xué)挑戰(zhàn)性試驗(yàn)嗎？該測(cè)試的條件與實(shí)際使用條件相同嗎？跟蹤對(duì)一種用于給定的工藝和產(chǎn)品的專(zhuān)用濾器的驗(yàn)證，了解該驗(yàn)證的詳細(xì)情況，是否延伸至有著相似的性質(zhì)和工藝條件的相關(guān)產(chǎn)品，如果是，是否已將這種延伸的理由文件化？第79頁(yè)/共118頁(yè)丁基膠塞清洗工藝第80頁(yè)/共118頁(yè)膠塞清洗原理第81頁(yè)/共118頁(yè)膠塞清洗、硅化、滅菌、干燥機(jī)示意第82頁(yè)/共118頁(yè)重點(diǎn)關(guān)注膠塞密封性-通過(guò)驗(yàn)證試驗(yàn)嗎？第83頁(yè)/共118頁(yè)膠塞清洗工藝重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容和方法洗滌后最終淋洗水應(yīng)達(dá)到如下標(biāo)準(zhǔn)：菌落<10CFU/100ml;熱原<0.25EU/ml;氯化物、不溶性微粒、pH達(dá)到藥典標(biāo)準(zhǔn);澄明度符合中國(guó)2005年版藥典注射劑通則的要求。滅菌后膠塞的可見(jiàn)異物？第84頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌藥品的細(xì)菌內(nèi)毒素控制無(wú)論采用何種方法生產(chǎn)無(wú)菌藥品，都需要嚴(yán)格控制藥品中的細(xì)菌內(nèi)毒素。通常液體藥品的細(xì)菌內(nèi)毒素，采用超過(guò)濾或活性碳吸附來(lái)去除液體中的細(xì)菌內(nèi)毒素，粉未分裝藥品的細(xì)菌內(nèi)毒素則由無(wú)菌原料生產(chǎn)過(guò)程中的除熱原措施（例如有機(jī)溶酶處理或超濾等工藝）來(lái)解決；生產(chǎn)工藝過(guò)程中可能接觸無(wú)菌藥品的工具，器械的熱原，不耐高溫的器械通常采用無(wú)熱原的注射用水洗滌的方法稀釋去除，耐高溫的器械則用干熱滅菌（180℃以上）方法去除。第85頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌藥品的細(xì)菌內(nèi)毒素控制藥品的內(nèi)包材料的熱原去除，通常分為兩類(lèi)，一類(lèi)耐高溫的內(nèi)包材，例如玻璃瓶或金屬桶，可使用溫度大于180℃的干熱滅菌方法，高溫分解包材表面的細(xì)菌內(nèi)毒素，金屬容器表面的熱原物質(zhì)也可通過(guò)使用雙氧水等化學(xué)藥品來(lái)除去熱原；塑料容器和膠塞在處理和貯存過(guò)程中應(yīng)控制可能產(chǎn)生的熱原污染，因此應(yīng)作去熱原處理，由于膠塞或塑料容器不耐高溫，不能用180℃以上干熱滅菌去除，常用無(wú)熱原注射用水，將膠塞或塑料容器表面熱原物質(zhì)洗滌稀釋至0.25EU/ml鱟試劑檢測(cè)靈敏度以下。同時(shí)，應(yīng)盡可能縮短洗塑料容器和膠塞和滅菌之間的時(shí)間間隔；第86頁(yè)/共118頁(yè)無(wú)菌藥品的細(xì)菌內(nèi)毒素控制小結(jié)：無(wú)菌藥品中細(xì)菌內(nèi)毒素的去除方法：超濾（液體原料）；高溫（大于180℃）；酸堿處理（重鉻酸鉀硫酸溶液等）；注射用水洗滌（膠塞處理）；活性炭吸附等。第87頁(yè)/共118頁(yè)細(xì)菌內(nèi)毒素控制重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容和方法藥品采用何種除熱原方法？如果采用的是干熱法，要求了解一個(gè)周期的時(shí)間/溫度。使用注射用水洗滌方式去除熱原嗎？如果使用腐蝕性清洗劑除熱原，是什么品種的清洗劑？使用了超濾裝置除熱原嗎？上述除熱原方法用于下述那類(lèi)物品的熱原去除：①原料的熱原去除？②制劑用容器的熱原去除？③制劑用容器的封口材料的熱原去除？④接觸無(wú)菌藥品的表面的熱原去除？⑤生產(chǎn)設(shè)備的熱原去除？⑥制劑的熱原去除？用什么方法測(cè)定內(nèi)毒素：家兔法或鱟試劑（LAL）法？所有的除熱原方法都經(jīng)過(guò)驗(yàn)證已證明內(nèi)毒素濃度至少有三個(gè)對(duì)數(shù)單位的下降嗎？第88頁(yè)/共118頁(yè)三、管理良好的HVAC系統(tǒng)HVAC系統(tǒng)的建立和維持，在很大程度上可以消除塵埃包藏芽孢，避免造成難以滅菌的風(fēng)險(xiǎn)。有必要強(qiáng)化對(duì)空氣中微生物的監(jiān)控，沉降菌的測(cè)試及浮游菌的測(cè)試，二者不可偏廢；浮游菌的測(cè)試是為了證實(shí)生產(chǎn)環(huán)境達(dá)到工藝引起的標(biāo)準(zhǔn)，有利于降低產(chǎn)品污染的風(fēng)險(xiǎn)。第89頁(yè)/共118頁(yè)潔凈室(區(qū))質(zhì)量控制項(xiàng)目第90頁(yè)/共118頁(yè)用空氣凈化技術(shù)控制滅菌產(chǎn)品的污染風(fēng)險(xiǎn)空氣中微生物基本為革蘭氏陽(yáng)性菌，它們有可能形成芽孢使其耐熱性增大。更嚴(yán)重的是，一旦被塵埃包藏時(shí)，這類(lèi)芽孢耐熱性比單獨(dú)存在狀態(tài)上升一個(gè)數(shù)量級(jí)。為防止空氣中耐熱菌污染生產(chǎn)系統(tǒng)，需要將已清潔或已清潔/滅菌的物品例如容器、膠塞及整個(gè)灌裝機(jī)置于局部單向流保護(hù)下。無(wú)菌藥品凈化空調(diào)系統(tǒng)的設(shè)置及潔凈區(qū)環(huán)境的建立和維持，使得有效控制微粒的同時(shí)，也在很大程度上自然地消除了塵埃包藏芽孢，避免了造成難以滅菌的風(fēng)險(xiǎn)。第91頁(yè)/共118頁(yè)空調(diào)凈化系統(tǒng)基本構(gòu)成第92頁(yè)/共118頁(yè)潔凈度級(jí)別比較WHO（GMP）美國(guó)（209E）美國(guó)（習(xí)慣分類(lèi)）ISO/TC（209）EEC（GMP）AM3.5100ISO5ABM3.5100ISO5BCM4.510000ISO7CDM6.5100000ISO8D第93頁(yè)/共118頁(yè)WHOGMP2002標(biāo)準(zhǔn)

級(jí)別靜態(tài)動(dòng)態(tài)最大允許粒子數(shù)/立方米最大允許粒子數(shù)/立方米0.5-5.0μm>5.0μm0.5-5.0μm>5.0μmA3500035000B350003500002000C3500002000350000020000D350000020000不作規(guī)定不作規(guī)定第94頁(yè)/共118頁(yè)中國(guó)GMP（1998修訂）潔凈級(jí)別塵粒數(shù)/立方米微生物最大允許數(shù)≥0.5μm≥5μm浮游菌CFU/立方米沉降菌CFU/皿(Ф90mm半小時(shí))10035000511000035000020001003100000350000020000500103000001050000060000100015第95頁(yè)/共118頁(yè)關(guān)鍵操作區(qū)空氣流向控制要求比較潔凈度級(jí)別WHO美國(guó)歐盟中國(guó)A100A100空氣流向單向流單向流單向流無(wú)要求風(fēng)速0.45m/s±20%0.45m/s±20%產(chǎn)粉塵的操作區(qū)風(fēng)速應(yīng)更高0.36-0.54m/s無(wú)要求第96頁(yè)/共118頁(yè)潔凈區(qū)壓差控制要求比較WHO美國(guó)歐盟中國(guó)不同級(jí)別相鄰房間的壓差10-15Pa10-15Pa10-15Pa

>5Pa其它壓差潔凈區(qū)過(guò)濾空氣的送風(fēng)應(yīng)能確保在任何運(yùn)行狀態(tài)下對(duì)周?chē)图?jí)別區(qū)保持正壓及氣流方向，并有足夠的自?xún)裟芰o(wú)菌操作間對(duì)相鄰非潔凈區(qū)操作間應(yīng)始終保持正壓（如至少12.5Pa）潔凈區(qū)過(guò)濾空氣的送風(fēng)應(yīng)能確保在任何運(yùn)行狀態(tài)下對(duì)周?chē)图?jí)別區(qū)保持正壓及氣流方向，并有足夠的自?xún)裟芰崈魠^(qū)與室外大氣的靜壓差>10Pa第97頁(yè)/共118頁(yè)潔凈區(qū)環(huán)境監(jiān)控要求比較WHO美國(guó)歐盟中國(guó)關(guān)鍵操作區(qū)的塵粒為控制各級(jí)別的潔凈區(qū)操作時(shí)的塵粒數(shù)，應(yīng)對(duì)塵粒進(jìn)行監(jiān)測(cè)每一生產(chǎn)班次應(yīng)定期進(jìn)行監(jiān)控；粒子計(jì)數(shù)探頭的安放位置應(yīng)能取到有代表性的樣品

應(yīng)對(duì)A級(jí)區(qū)的空氣粒子進(jìn)行連續(xù)測(cè)定，并建議對(duì)B級(jí)區(qū)也連續(xù)進(jìn)行測(cè)定

潔凈室(區(qū))內(nèi)空氣的微生物數(shù)和塵粒數(shù)應(yīng)定期監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)結(jié)果應(yīng)記錄存檔。潔凈室(區(qū))在靜態(tài)條件下檢測(cè)的塵埃粒子數(shù)、浮游菌數(shù)或沉降菌數(shù)必須符合規(guī)定，應(yīng)定期監(jiān)控動(dòng)態(tài)條件下的潔凈狀況。關(guān)鍵操作區(qū)的微生物無(wú)菌操作時(shí)，應(yīng)頻繁對(duì)微生物進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)；關(guān)鍵操作結(jié)束后，應(yīng)對(duì)表面和人員的微生物進(jìn)行監(jiān)測(cè)；應(yīng)制定微生物監(jiān)控的警戒和糾偏標(biāo)準(zhǔn)，以監(jiān)控空氣質(zhì)量的趨勢(shì)關(guān)鍵區(qū)出現(xiàn)微生物污染時(shí)，要進(jìn)行必要的調(diào)查無(wú)菌操作時(shí)，應(yīng)頻繁對(duì)微生物進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)；除在生產(chǎn)過(guò)程中需進(jìn)行微生物監(jiān)控外，系統(tǒng)驗(yàn)證、清潔和消毒等操作后，也應(yīng)進(jìn)行微生物監(jiān)控；應(yīng)對(duì)塵粒和微生物監(jiān)控制定適當(dāng)?shù)木浜图m偏標(biāo)準(zhǔn)關(guān)鍵操作區(qū)的壓差應(yīng)設(shè)送風(fēng)故障報(bào)警系統(tǒng)；壓差十分重要的毗鄰級(jí)別區(qū)之間應(yīng)安裝壓差表并定期記錄壓差每一班操作過(guò)程中，房間的壓差應(yīng)連續(xù)監(jiān)控并經(jīng)常記錄。所有報(bào)警應(yīng)有記錄，超過(guò)設(shè)定限度的各種偏差應(yīng)進(jìn)行調(diào)查。可列入批記錄中應(yīng)設(shè)送風(fēng)故障報(bào)警系統(tǒng)；壓差十分重要的毗鄰級(jí)別區(qū)之間應(yīng)安裝壓差表；壓差數(shù)據(jù)應(yīng)定期記錄或者歸入有關(guān)文檔中無(wú)要求第98頁(yè)/共118頁(yè)關(guān)鍵操作區(qū)氣流方向示例一MMSCIP滅菌直接包材接觸部100級(jí)10000級(jí)第99頁(yè)/共118頁(yè)關(guān)鍵操作區(qū)氣流方向示例二MMSCIP滅菌直接包材接觸部0.45±20%m/sGrade”A”Grade”B”關(guān)鍵點(diǎn)第100頁(yè)/共118頁(yè)重點(diǎn)關(guān)注－潔凈廠(chǎng)房壓差梯度控制第101頁(yè)/共118頁(yè)HVAC系統(tǒng)重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容和方法向產(chǎn)品暴露和灌裝區(qū)域輸送的空氣是否經(jīng)過(guò)高效空氣過(guò)濾器過(guò)濾，并對(duì)其他區(qū)域保持空氣正壓？輸送至關(guān)鍵控制點(diǎn)的空氣是單向流(層流)狀態(tài)嗎？單向空氣流的速度是多少？關(guān)鍵區(qū)域或過(guò)濾器表面風(fēng)速是否經(jīng)過(guò)測(cè)定？輸送至潔凈區(qū)域和無(wú)菌區(qū)域的空氣是如何過(guò)濾的？下列區(qū)域的空氣質(zhì)量等級(jí)是怎樣區(qū)分的：①產(chǎn)品暴露區(qū)域；②灌裝區(qū)域；③周?chē)鷧^(qū)域。第102頁(yè)/共118頁(yè)HVAC系統(tǒng)重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容和方法高效空氣過(guò)濾器的效率及完整性經(jīng)過(guò)測(cè)定嗎？①多長(zhǎng)時(shí)間測(cè)定一次高效空氣過(guò)濾器的完整性？用什么方法測(cè)試？②多長(zhǎng)時(shí)間檢查一次高效空氣過(guò)濾器的空氣流速？潔凈室內(nèi)風(fēng)速的監(jiān)測(cè)結(jié)果是否符合相關(guān)SOP？濕熱氣流動(dòng)型式的監(jiān)測(cè)結(jié)果是否符合相關(guān)SOP？第103頁(yè)/共118頁(yè)HVAC系統(tǒng)重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容和方法上一個(gè)年度潔凈室內(nèi)空氣換氣次數(shù)的監(jiān)測(cè)結(jié)果監(jiān)測(cè)結(jié)果是否符合相關(guān)SOP？如果監(jiān)測(cè)結(jié)果不符合相關(guān)SOP，是否有關(guān)于糾偏措施的書(shū)面記錄？HVAC系